酵母菌大小的测定和细胞计数.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验,六,酵母菌大小的测定和细胞计数,一、实验目的,1、学会测微尺和血球计数板的使用方法2、建立对微生物大小的概念二、实验材料,1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数 板、载玻片等2、麦芽汁培养基、酵母菌3、吸管、吸水纸等三、实验原理,(一)酵母菌大小的测定原理,所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计算该微生物的大小酵母菌的直径约8-10,m二)酵母细胞计数原理,微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内后者是在,平,板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长本实验是利用血球计数板进行直接计数计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及计算公式运算后，即可得出实际数值四、操作方法,(一)酵母菌大小测定的操作方法,1.测微尺的构造和使用方法,(1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确的刻度，通常是将5,mm,划分为50格，实际每格等于100,m。

刻度的大小是随使用的目镜和物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微尺来标定，,如图,2),物镜测微尺的构造,物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈圆圈内刻有分度，将长,1,mm,的直线等分为,100,小格，每小格等于,10,m,，,如图,2.目镜测微尺的标定,(1)取下目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央3),先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线如图,(4),记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数3.计算方式,(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数,10,两个重叠刻度间目镜测微尺格数,(2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度目镜测微尺()格=物镜测微尺()格,目镜测微尺每格=(),(3),如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。

若更换物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定4.酵母菌大小的测定,(1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格，然后换算出菌体的实际长度3),在同一标本上测定,5-10,个菌体，求其平均值二)酵母细胞数的测定操作方法,1.,血,球计数板的构造,血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网方格网上刻有,9,个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用这一大方格的长和宽各为,1,m,，,深度为，其体积为,0.1,mm,3,计数室通常有两种规格一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16,25=25,16=400个小方格组成，见,图,三,2.血球计数板的使用,(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数2),样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有,4-5,个酵母细胞为宜，一般稀释,10,倍即可。

3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内5),计数时，如果使用,16,格,25,格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下,4,个中格（即,100,个小格）的酵母菌数如果,规格为,25,格,16,格的计数板,，除了取其,4,个对角方位外，还需再数中央的一个中格,(,即,80,个小方格,),的酵母菌数6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)7),对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每,1,ml,菌液中所含的酵母菌个数3.计算公式,(1)16格,25格的血球计数板计算公式：,酵母细胞数,ml=100,小格内酵母细胞个数,10040010,4,稀释倍数,(2)25格,16,格的血球计数板计算公式：,酵母细胞数,ml=80,小格内酵母细胞个数,8040010,4,稀释倍数,4.血球计数板的清洁,血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用,95,的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。

通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物若不干净，则必须重复清洗直到干净为止五、思考题及实验作业,1.,若更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用物镜测微尺标定目镜测微尺，这是为什么?,2.,利用血球计数板时，注入的菌液为什么不能过多?,3.,测定酵母细胞大小的结果1)目镜倍数是,；低倍镜倍数,；高倍镜倍数,2)低倍镜下，接目镜测微尺,格=物镜测微尺,格目镜测微尺每格=,m3),高倍镜下，接目镜测微尺,格=镜台测微尺,格目镜测微尺每格=,m4),酵母菌测量结果填表,(5)酵母菌直接计数结果报告,每,1,ml,样品含酵母细胞,个。