高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量.docx

高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量实验部分高效液相色谱法（HPLC）1、试剂与材料（除非另有说明，所有试剂均为分析纯1.1甲醇：色谱纯，200ml1.2乙腈：色谱纯，10ml1.3乙酸铅:0.5g1.4 柠檬酸：1.0640g1.5辛烷磺酸钠：色谱纯,0.9508g1.6 三氯乙酸： 2.5g1.7 三聚氰胺： 0.2500g试剂配制■ 三氯乙酸溶液（1%）：准确称取2.5g三氯乙酸用水溶解后转移至250mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀后备用■ 离子对试剂缓冲液：准确称取0.9508 g辛烷磺酸钠（5mmol/L） + 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用蒸馏水配制1L溶液，备用■ 三聚氰胺标准储备液：准确称取0.2500g （精确到0.1 mg）三聚氰胺标 准品于 100mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（20%）溶解并定容至刻度，配 制成浓度为 2.5 mg/mL 的标准储备液，低温避光保存2、 仪器和设备2.1高效液相色谱（HPLC ）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器2.2 分析天平：感量为0.0001 g2.3 离心机：转速不低于 4000 r/min2.4 超声波水浴。

2.5 具塞塑料离心管： 50mL3、 样品处理分别称取3份5 g （精确至0.0001g）奶粉于50mL具塞塑料离心管中，各加 入5mL配制好的2.5g/L的三聚氰胺溶液，编号1、2、3,往1号试管中加入20mL 三氯乙酸溶液，往2号试管中加入15mL三氯乙酸和5mL乙腈溶液，往3号试管 中加入20ml乙酸铅的三氯乙酸溶液，超声提取10 min，后以4000 r/min离心 10 min各取三支试管中上清液10mL于3个25mL容量瓶中用水定容，待测4、高效液相色谱测定4.1 HPLC 条件a) 色谱柱：CNWSIL C18 液相色谱柱(4.6X250mm,5 Mm)b) 流动相:A 液：0.9508 g 辛烷磺酸钠(5mmol/L)+ 1.0640 g 柠檬酸(pH=3-4)用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%Ac) 流速：1.0mL/mind) 柱温：40°Ce) 波长：240 nmf) 进样量：2p L4.2 标准曲线的配制与测定配制一系列标准溶液，浓度分别为：0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05 mg/ml、 0.10 mg/ml、0.25 mg/ml、0.50 mg/ml、0.80mg/ml、1.00 mg/ml。

基线走稳后， 按浓度由低到高分别进样标准溶液各2p L,确定峰的保留时间及峰面积，以峰 面积——浓度作图，得到标准曲线回归方程4.3 样品定量测定各取3份待测样液2p L进样，记录样品中峰的保留时间和峰面积若三聚氰 胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析由 峰面积在标准曲线中求得样品溶液中三聚氰胺的含量。