乳酸菌的测试方法.pdf

产品中乳酸菌的测试方法菌种名称培 养 基及培养方法培养基培养方法嗜热链球菌M17 琼脂M17 琼脂 37° C 培养 72 小时乳酸杆菌总数MRS 琼脂 ，强化盐酸 半胱氨酸至 0.05% 厌氧培养37° C 培养 72 小时嗜酸乳杆菌MRS 琼脂+氯洁霉素 PH5.4 MRS 琼脂用 10%的乙酸酸化 厌氧培养 : 37° C 培养 72 小时干酪乳杆菌MRS 琼脂， pH5.4 MRS 琼脂用 10%的乙酸酸化 厌氧培养 : 25° C/37° C 培养 72 小时双歧杆菌RCM 琼脂 + NNLT (抗生素溶液 ) 强化盐酸半胱氨酸至 0.05% 厌氧培养 : 37° C 培养 72 小时培养基准备：- 稀释剂：- 用无菌的胰化胨溶液稀释做细菌的菌落计数( 除了双歧杆菌 ) 双歧杆菌的菌落计数必需用无菌的胰化胨和盐酸半胱氨酸溶液稀释参见文章第三页 培养基 : - M17 琼脂：用商品 M17 培养基，按说明配制MRS 琼脂：用商品 MRS 培养基，按说明配制灭菌前用乙酸调节PH 到 5.4 RCM 琼脂：用商品 RCM 培养基，按说明配制灭菌后在使用之前，在RCM 培养基中加入 NNLT 溶液。

胰化胨溶液 : 组成(g/l) : - 胰蛋白胨1 g - NaCl (氯化钠 ) 8,5 g - 蒸馏水1000 ml - 溶液分装，数量小于 100 毫升的， 用灭菌锅 121o C 灭菌 15 分钟， 数量大于 100 毫升的，121o C 灭菌 20 分钟保存： 4° C 下保藏一个月胰化胨溶液+ 盐酸半胱氨酸: 组成 (g/l) : - 胰蛋白胨1 g - NaCl (氯化钠 ) 8,5 g - 蒸馏水1000 ml + 盐酸半胱氨酸0,5 g - 溶液分装，数量小于 100 毫升的，用灭菌锅 121o C 灭菌 15 分钟，数量大于 100 毫升的，121o C 灭菌 20 分钟保存： 4° C 下保藏一个月RCM + NNL T 1/ RCM Agar琼脂( 强化梭状芽孢杆菌琼脂) (Hirsh & Grinsted, Barnes & Ingram, 1956 ). 灭菌锅 121o C 灭菌 15 分钟2/ NNLT 溶液 : I 组成： -新霉素硫酸盐 (Sigma) 0. 1 g -奈啶酮酸(Sigma) 0.015 g -氯化锂 (Sigma) 3.0 g -TTC (Merk) 0.025 g -蒸馏水50 ml 溶液用避光瓶装。

过滤灭菌(0.45μ m 过滤器 )保存： 4 o C下保藏一个月3/ 5%盐酸半胱氨酸溶液：组成： - 盐酸半胱氨酸5 g - 蒸馏水100ml 灭菌锅 121o C 灭菌 15 分钟保存： 4 o C下保藏一个月准备 : 在使用之前，以5%的比例将 NNLT 溶液在无菌条件下加入RCM 琼脂中，并按 1%比例加入 5%浓度的盐酸半胱氨酸溶液MRS + 氯洁霉素溶液1/ 氯洁霉素溶液 : 组成 : -氯洁霉素0.01g -蒸馏水200ml 溶液分瓶装过滤灭菌 (0.45 μ m 过滤器 ) 保存： 4 o C下保藏一个月2/ MRS + 氯洁霉素(选择性培养基 ) : 准备 : 在使用之前，以0.2%的比例将氯洁霉素溶液在无菌条件下加入MRS 琼脂中附加说明：-乳酸杆菌总数的计数方法用于检测所有的乳酸杆菌，在没有其它乳杆菌存在的情况下，可用于检测保加利亚乳杆菌，如有其它乳杆菌存在则需用减差法将其分开干酪乳杆菌厌氧培养 : 25 °C/37° C 培养 72 小时：干酪乳杆菌在这两个温度下都能生长，对于单个干酪乳杆菌样品检测， 一般选择 37° C 厌氧培养，如混有其它乳杆菌，则用 25° C厌氧培养将其区分计数。