胡晓年-细胞治疗规范.pptx

细胞治疗技术体系细胞治疗技术体系建设建设 遵循遵循规范及规范及临床转化临床转化胡晓年胡晓年 北京北京京蒙高科干细胞技术京蒙高科干细胞技术有限公司有限公司 内蒙古干细胞医学工程技术研究中心内蒙古干细胞医学工程技术研究中心21世纪第一个十年，干细胞领域是最引人 关注的研究方向之一 干细胞已经并将继续为目前许多不治之症 提供有效的治疗手段，是再生医学发展的 希望所在，其重要性已经得到人们的广泛 共识 借鉴国际干细胞的经验，快速提升我国干 细胞科学水平，加快产业化进程将对我国 未来经济社会发展具有重要意义细胞治疗面临的困惑规范与发展 研究与应用 监管与自律 科学与管理 有效与安全 药品或技术 企业与医疗机构 疗效与期望值教育培训 伦理知情 个体化与产业化 舆论与公众认知 立法与执行力发展发展科学科学规范规范治疗前 伦理审 核与知 情教育 治疗前 评价治疗方 案设计细胞生 产及细 胞治疗 实施治疗后 评价随访与 跟踪细胞细胞治疗治疗流程与规范内容流程与规范内容介绍原理、方法、受益介绍原理、方法、受益 介绍治疗流程介绍治疗前评价介绍治疗流程介绍治疗前评价 项目、意义项目、意义 知情同意书签署知情同意书签署• •临床评价临床评价 • •实验室评价实验室评价细胞群体及表细胞群体及表 型分析型分析细胞增殖及分细胞增殖及分 化能力分析化能力分析细胞杀伤能力细胞杀伤能力 分析分析HLAHLA分型分型混合淋巴细胞混合淋巴细胞 反应反应血浆因子检测血浆因子检测糖尿病相关分糖尿病相关分 子细胞检测子细胞检测神经系统疾病相神经系统疾病相 关分子细胞检测关分子细胞检测汇总临床及实验室检测结果汇总临床及实验室检测结果 细胞治疗方案建议细胞治疗方案建议 治疗策略及目标设定；治疗策略及目标设定； 治疗路线设计及时间安排；治疗路线设计及时间安排； 拟采用的治疗方法及细胞数量拟采用的治疗方法及细胞数量• • 遵循遵循GMPGMP要求要求 • • 遵循遵循SFDASFDA相关相关 要求要求 • • 参考参考AABBAABB、、FDAFDA 、、ISCTISCT等规范等规范 • • 独立的临床检独立的临床检 验所保证细胞的验所保证细胞的 安全性安全性 • • 严格的严格的SOPSOP保证保证 细胞的生产及使细胞的生产及使 用符合规范用符合规范 • • 经验丰富的医经验丰富的医 师保证细胞的安师保证细胞的安 全使用及不良反全使用及不良反 应的处理应的处理符合细胞治疗特性及要求的评符合细胞治疗特性及要求的评 价项目、标准及时间价项目、标准及时间全身状况评价全身状况评价器官功能评价器官功能评价干细胞数量及功能评价干细胞数量及功能评价• •定期的临床检定期的临床检 测及干细胞相测及干细胞相 关的实验室检关的实验室检 测测 • • 个体化的细个体化的细 胞治疗维护建胞治疗维护建 议议 • • 基于干细胞基于干细胞 治疗的随访项治疗的随访项 目目管理规范文件细胞治疗从业人员的要求分子生物学、医学相关专业 相关专业从业经验 健康证明 定期GMP培训 定期学术交流1 新技术、新进展报告2 专业知识培训3 国内外相关会议4 细胞治疗及新进展研讨会 劳动部及卫生部门职业上岗就业培训考核细胞制备场所的要求生产环境的要求环境监控温度与湿度控制； 通风及空气过滤； 无菌操作间及设备的清洁消毒； 无菌操作环境控制设备的维修养护； 无菌环境中微生物及粒子的检测。

细胞生产质控点人员生产车间医 院物料样品质 检分离培养成品质检病人 安检质检质检质检出库细胞 回输信息 返馈细胞采集运输材料集成质控回输后产品出库成品分离相关细胞 细胞数量、纯度启动培养期（诱导期） 培养基浓度、细胞形态关键培养期细 胞 生 产 质 控 阶 段1. 间充质干细胞表型鉴定2. 造血干细胞细胞表型鉴定3. ES 细胞鉴定4. 干细胞成瘤性检测流式细胞术CD105,CD166, CD73, CD90, Thy-1, CD44 ,CD29阳性CD34, CD45,HLA-DR阴性免疫荧光膜蛋白 STRO-1, CD34,CD90, SCF流式细胞术CD133,CD34,CD45阳性 Realtime miR-21 miR-290-295 cluster miR-296 miR-22阳性 . 癌基因检测实时荧光定量p53/p21、 C-myc、BRCA1, SP1 表达，DNA甲基化检测PCRCpG WIZ 肿瘤与疾病热点基因DAN甲基化特异性检测端粒酶的活性检测实时荧光定量TRAPEZE RT端粒酶活性检测试剂,成脂肪分化标志Adiponectin/Acrp30,FABP4,Leptin/OB,Pref-1/DLK-1/FA1 ,PPAR gamma/NR1C3成肌肉分化标志alpha-Smooth Muscle Actin, Desmin, Integrin alpha 7, Troponin T, M-Cadherin, ANP, Myosin Heavy Chain, VE-Cadherin成骨、破骨细胞标 志WDR5, IBSP/Sialoprotein II, IGFBP-3, Osteocalcin, Collagen I, TBX2, B220/CD45R, Aggrecan, RANK/TNFRSF11A, RUNX2/CBFA1, SPARC/Osteonectin成软骨分化标志Aggrecan, Collagen II, IBSP/Sialoprotein II, Collagen IV, SOX95. 分化潜能检测起始材料的来源的质控细胞与分子临床检验所，是 北京市卫生行政主管部门批准的 具有独立法人资格的临床检验机 构。

同时它也承担了干细胞产品 质量控制及细胞治疗相关检测的 任务第三方独立实验室质量控制任何产品的细胞制备与生产都应在慎细、专 业、独立的审评与监督之下进行，以最大限度 地保证细胞的质量与安全性尽快明确细胞产品质量监管部门是当务之急！供体的要求年龄、性别，既往病史、家族史等临床资料，符合 献血员的要求 传染病监测：无传染性疾病早期症状，无传染病高 危风险 常规：HBV、HCV、HIV-1/2、巨细胞病毒、人类T白血 病病毒、EB病毒、谷丙转氨酶 选测：T.cruzi（枯氏锥虫）、WNV（西尼罗河病毒） 、T. pallidum（苍白螺旋体） HLA分型，并证明与受体（病人）相匹配 遗传病基因检测 干细胞水平、动员能力、粘附归巢能力、分化能力HLA 配型细胞采集运输的要求按照供体细胞采集技术的标准操作程序，严格规范采集细 胞的地址/环境，所用的设备和设施、保存和运输的环节 和条件，预防微生物及病毒等有害因子污染，预防共用设 备和设施可能带来的交叉污染采集分离过程中细胞 的鉴定：收率、存活 率、纯度、无菌检验 专门的运送容器 运送过程的时间及温 度控制 详尽的记录物料的要求淋巴细胞分离液：纯度、质量检定。

培养基：无血清培养基成分纯度制定标准规格，保证各种 成分的质量都经过鉴定 血清：避免使用任何血清不使用同种异体人血清或血浆 人血液成份：白蛋白及转铁蛋白，来源、批号、质量检定合 格报告 抗生素：不使用抗生素 培养器皿：选择，质量检定 其他成份：有丝分裂原、抗体、细胞因子、化学物质等应 尽可能采用国家批准临床应用的产品参照国家对相应产品的 质控要点，提供质量标准，并对每批产品提供详尽的质量检定 报告通过企业标准的制定和执行，推动细胞治疗通过企业标准的制定和执行，推动细胞治疗 技术地方标准、行业标准和国家标准的制定技术地方标准、行业标准和国家标准的制定生产过程的规范详细的工艺流程标准操作程序和适时修订的程 序 培养过程对于批同一性和防止交叉污染的质量 控制系统 细胞收获时应保留细胞及培养基样品，供检定 用 若细胞培养技术有改进，则应评估对细胞得率 、生物学效应、均一性及纯度的影响 定期进行的和在体外培养后输注前对所有培养 物进行的质量控制系统无菌检测药典规定的方法 无菌检测取样要求为：对起始样本、每次传代 后、回输前24小时的培养液取样利用沙保罗血 平板法进行检测； 对最终产品取样利用革兰氏染色法进行检测。

回输后，继续培养两周 做为整个过程质量控制以及质量控制的手 段细胞出库检测（批检定）批生产记录 外观：澄清液体，无肉眼可见的絮状物 来源确认：应注明供者的来源并加以标记或确定批号 细胞存活率：台盼蓝染色，PI染色，细胞存活率>90% 细胞代数：MSC产品应在6代以内 细胞数及细胞得率：MSC>108，CIK>109，DC>106细胞出库检测（批检定）纯度与均一性检测:MSC细胞阳性检测包括CD90、CD44、CD105、 CD29、CD73；阴性检测包括CD45、HLA-DR、CD34阳性检测结果>95%，阴性检测结果<2%细胞出库检测（批检定）外源因子检测： 细菌：沙保罗、血平板培养法,阴性 真菌：沙保罗、血平板培养法,阴性 内毒素：鲎试剂法,<0.5EU/ml 支原体：PCR法,阴性 病毒：PCR法, ELISA法，阴性 生物学效应检测 增殖、杀伤、分化功能 因子分泌型式检验在下列情况下进行型式检验 产品初次投产前 间隔一年以上再投产时 设计、工艺或生产设备有重大变化 连续生产3个月 型式检验前应进行出库检验，从出库检验合格 的批中抽取样本进行型式检验型式检验按GB 2829进行，采用一次抽样方案。

从连续3批产 品中，每批随机抽取1个试样，共3个试样组成 样本质量水平RQL为30型式检验残留物检测：培养基、血清、人血液成分 、抗生素、细胞因子、其他成分 复核鉴定报告：送检中国药品生物制品检 定所或其它独立第三方检验机构，返回“ 合格”报告 毒性试验：急性全身毒性、细胞毒性、皮 内刺激、皮肤致敏反应等符合国家标准 染色体核型分析型式检验（细胞稳定性检测）型式检验（细胞衰老检测）β-半乳糖苷酶染色法检测 细胞（UCMSCs）的衰老型式检验（有效性体外试验）成脂成骨胰岛样细胞MSC型式检验（致癌性试验）癌基因和端粒酶表达水平型式检验（致癌性试验）软琼脂集落生长试验裸鼠成瘤试验（进行中 ）2009年京蒙高科干细胞与卫生部医药卫生科技发展 研究中心和中国医药生物技术协会签署的项目合作 协议书：规范化肿瘤CIK细胞治疗多中心临床研究伦理审查与知情同意临床应用规范多中心，大样本，随机对照 治疗前专项检测评估 严格掌握适应症 知情同意自愿原则 疗效评定标准 安全性评定标准 不良反应及应急预案 数据管理分析统计ISSCR：《干细胞临床转化指南》干细胞治疗最可能的目标往往是那些临床医生所 面对的最束手无策的疾病。

历史上看，许多医学创新在进入临床实践之前并 没有经过正式的临床试验 某些创新确实带来了临床医疗服务的显著与长期 改善，而另一些创新则无效甚或有害历史的机遇摆在了我们面前历史的机遇摆在了我们面前 同时也是前所未有的挑战同时也是前所未有的挑战 让我们勇敢地迎接让我们勇敢地迎接挑战挑战 遵循遵循““科学、发展、规范科学、发展、规范””的原则的原则 牢牢把握历史机遇牢牢把握历史机遇 创造历史，造福人类！创造历史，造福人类！我谨我谨代表京蒙高科代表京蒙高科干细胞全体员工干细胞全体员工 给各位领导、专家及所有朋友拜年给各位领导、专家及所有朋友拜年 ！！ 祝大家在祝大家在新的一年里新的一年里 身体身体健康健康！！ 事业发达！！事业发达！！ 心想事成！！！心想事成！！！ 万事如意！！！！万事如意！！！！。