中药丁公藤、金银花活性成分的荧光分析法研究.pdf

河北师范大学硕士学位论文中药丁公藤、金银花活性成分的荧光分析法研究姓名：孟伟申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：魏永巨20100508III摘 要 研究了中药丁公藤(Caulis Erycibes)、 金银花(Flos Lonicerae Japonicae)活性成分的荧光光谱，考察了实验条件对荧光光谱的影响，确立了活性成分荧光最强的环境条件，并以此为基础，建立了测定中药丁公藤中东莨菪内酯含量的溶液荧光法和薄层荧光扫描法，以及测定中药金银花中绿原酸含量的溶液荧光法 论文工作主要分为五部分： 1、研究了中药丁公藤的活性成分东莨菪内酯和东莨菪甙的荧光光谱性质实验发现溶液酸度对东莨菪内酯的荧光光谱有很大影响，而对东莨菪甙的荧光光谱影响不大以硫酸奎宁为参比，测得东莨菪内酯的荧光量子产率为 0.71，东莨菪甙的荧光量子产率为 0.21采用荧光分析法测定了东莨菪内酯的电离常数 pKa = 7.32 2、研究了中药丁公藤甲醇提取液的荧光光谱性质，利用东莨菪内酯和东莨菪甙在溶液酸度改变时荧光光谱的差异性， 建立了测定中药丁公藤中东莨菪内酯含量的溶液荧光法和薄层荧光扫描法 3、将东莨菪甙转化为东莨菪内酯，建立了测定中药丁公藤中总东莨菪内酯含量的溶液荧光法和薄层荧光扫描法。

4、绿原酸在溶液中的荧光很弱探索了敏化绿原酸荧光的实验条件，发现硼砂和十六烷基三甲基溴化铵两种试剂共存时能够显著增强绿原酸荧光， 确定了硼砂和十六烷基三甲基溴化铵的最佳浓度 研究了三元体系绿原酸-硼砂-十六烷基三甲基溴化铵的光谱性质，并以硫酸奎宁为参比，测得体系的荧光量子产率为 0.010 5、考察了金银花中的共存荧光组分，以硼砂-十六烷基三甲基溴化铵为增敏剂，建立了测定中药金银花中绿原酸含量的敏化荧光分析法 关键词：关键词：丁公藤，东莨菪内酯，东莨菪甙，荧光分析，薄层荧光扫描，绿原酸，金银花，敏化荧光 IVAbstract Fluorescence spectra of active components in Caulis Erycibes (CE, Dinggongteng in Chinese) and Flos Lonicerae Japonicae (FLJ, Jinyinhua in Chinese) were studied in this thesis, and influences of experimental conditions on fluorescence spectra were also investigated to establish the best conditions. Solution fluorescent method and thin-layer fluorescence scanning method were established for the determination of scopoletin. The content of Chlorogenic Acid (CA) in FLJ was determined by solution fluorescent method. Five parts were included in this thesis: 1. Fluorescence spectra of scopoletin and scopolin in CE were studied. It was found that solution acidity had great effect on the fluorescence spectra of scopoletin, and had no effect on scopolin. The fluorescence quantum yields of scopoletin and scopolin were measured to be 0.71 and 0.21 respectively, using quinine sulfate as a reference. The ionization constant of scopoletin was determined to be pKa = 7.32, by using a fluorimetric method. 2. Fluorescence spectra of the extract of CE were studied. Solution fluorescent method was established on the basis of difference between scopoletin and scopolin in the change of solution acidity. And thin-layer fluorescence scanning method was also established. 3. Fluorimetric method as well as thin-layer fluorescence scanning method was established to determine the total content of scopoletin in CE by transforming scopoletin into scopolin. 4. The fluorescence of CA was weak. So, method for obtaining sensitized fluorescence of CA was explored. It was found that the fluorescence of CA can be sensitized by coexisting with borax and CTAB. Fluorescence spectra of CA-borax -CTAB ternary system was then studied, and the fluorescence quantum yield of the ternary system was measured to be 0.010, using quinine sulfate as a reference. 5. The fluorescence components in FLJ were studied. Fluorimetric method for the determination of total content of CA was established using borax-CTAB as the sensitizing agent. Key Words: Caulis Erycibes; Scopoletin; Scopolin; Fluorescence analysis; Thin-layer fluorescence scanning method; Chlorogenic Acid; Flos Lonicerae Japonicae; Sensitized fluorescence II学位论文原创性声明学位论文原创性声明 本人所提交的学位论文《中药丁公藤、金银花活性成分的荧光分析法研究》 ，是在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的原创性成果。

除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中标明 本声明的法律后果由本人承担 论文作者（签名） ： 指导教师确认（签名） ： 年 月 日 年 月 日 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅本人授权河北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文 （保密的学位论文在 年解密后适用本授权书） 论文作者（签名） ： 指导教师（签名） ： 年 月 日 年 月 日 1绪 论 中草药是药物的重要组成成分之一，自古以来，人类通过以身试药等途径对中草药的应用积累了丰富的经验中药已经具有数千年的用药历史，对于某些疾病的治疗具有特殊的疗效中药中的化学成分种类繁多、结构新颖多样、是创新药物及其先导化合物的重要来源，从中草药中开发新药已经成为国际药物研究的热点中草药能够预防治疗疾病，其物质基础是中草药中所含的有效成分，就是我们常说的指标成分，因此中药活性成分的质量控制就变得非常重要，是衡量中药质量好坏的重要指标。

随着科学技术的迅猛发展，现代仪器分析技术已经广泛应用于中草药的研究中中草药的分析方法也是多种多样，分析结果越来越准确可靠发挥传统分析方法的优势，探寻更加简便高效的新方法是中药质量控制研究的重要使命本文借助现代荧光分析技术，考察了中药丁公藤和金银花活性成分的光谱性质，采用荧光分析法对指标成分进行了定量，该种方法能够对中药丁公藤和金银花质量进行准确、快捷的分析，提高了中药质量控制的效率 一 中药丁公藤研究进展 丁公藤(Caulis Erycibes)为旋花科植物丁公藤(Erycibe obtusifolia Benth)或光叶丁公藤(Erycibe schmidtii Craib)的干燥藤茎全年均可采收，切段或片，晒干丁公藤在广东中部及沿海岛屿均有分布，光叶丁公藤则只分布于云南东南部、广西西南至东部中国药典载丁公藤性辛，温，有小毒，归肝、脾、胃经，具有祛风除湿，消肿止痛之功效，临床上常用于治疗风湿痹痛，半身不遂，跌扑肿痛[1,2]等疾病 化学成分及成分分析 化学成分及成分分析 丁公藤和光叶丁公藤的活性成分为香豆素类化合物东莨菪内酯(scopoletin)和东莨菪甙(scopolin)(分子式见图 1 和图 2)。

OOHOOHCH3OO HOHO OOHOCH3O图 1 东莨菪内酯的分子结构 图 2 东莨菪甙的分子结构 Scheme 1 Molecular structure of Scopoletin Scheme 2 Molecular structure of Scopolin 宋蔚等[3]从光叶丁公藤茎藤的乙醇提取物中分离并鉴定出 7 个化合物，分别为东莨菪内酯，十六碳酸， 胡萝卜甙，β-谷甾醇，绿原酸，东莨菪素-7-葡萄糖甙及水溶性生物碱丁公藤丙素陆阳等[4]从凹脉丁公藤中分得两个香豆素和三个生物碱，经鉴定分别为东莨菪素，东莨菪甙，包公藤甲素，包公藤丙素和凹脉丁公藤碱(erycibelline)王朴2等[5]从毛叶丁公藤藤茎中分离出 5 个化合物，分别为：东莨菪素，东莨菪甙，包公藤甲素，包公藤丙素，包公藤碱 药理作用研究 药理作用研究 丁公藤具有祛风除湿、消肿止痛的功效，东莨菪内酯、东莨菪甙作为其抗风湿的有效成分，均具有一定的镇痛，抗炎，祛痰等作用，临床上用于治疗急慢性风湿关节炎，坐骨神经痛，腰肌劳损等症丁公藤注射液治疗肾绞痛，镇痛效果显著[6]有研究发现复方丁公藤胶囊对蛋清造成的大鼠急性关节肿以及由二甲苯引起的血管通透性增加有明显的抑制作用 [7]。

丁公藤的活性成分东莨菪内酯还具有降温、 抗肿瘤、抗真菌等多种功效[8-10] 提取分离研究 提取分离研究 国内外许多学者对东莨菪内酯的提取方法进行过研究，主要包括溶剂萃取法[11,12]，超临界流体萃取法[13]，以及胶束电动毛细管色谱[14]等在胶束电动毛细管色谱中，Wang Ketai 等分离了兴安白芷中的三种活性成分，其中包括东莨菪内酯，根据不同 pH 值下的迁移速率图，计算出了东莨菪内酯的电离常数为 7.37 质量控制研究 质量控制研究 东莨菪内酯的含量测定的方法比较多，主要有高效液相色谱法(。