生物化学实验试题与答案.doc

生物化学实验试题与答案 - 生物化学实验考核试题库 一、理论考核题 1盐析和盐溶〔3分〕 2电泳〔3分〕 3层析〔色谱〕〔3分〕 4酶的活力单位〔3分〕5比活力〔3分〕 6分子筛效应〔3分〕 7电泳的原理〔4分〕 8离子交换层析的原理〔4分〕 9亲和层析的原理〔4分〕 10凝胶过滤层析的原理〔4分〕 11吸附层析的原理〔4分〕 12透析技术的根本原理及其应用〔4分〕 13聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用处〔6分〕 14按层析过程的机理，层析法分哪四类？按操作形式不同又分哪三类？〔7分〕 15普通离心机的使用考前须知？〔6分〕 16可见分光光度计的使用考前须知？〔6分〕 17蛋白质含量测定的常用方法有那些？〔6分〕 18粗脂肪的提取和含量测定的根本原理〔6分〕 19索氏提取器是由哪几局部组成的？〔6分〕 20粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤〔6分〕 21粗脂肪的提取实验中如何减少误差？〔6分〕 22凯氏定氮法测定总氮量的根本原理〔6分〕 23凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些？〔6分〕 24核酸的含量测定常用的方法有哪些？〔6分〕 25双倒数法测定米氏常数的根本原理〔6分〕 26双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪些？关键因素是什么？〔7分〕 27生物细胞的破碎的常用方法有哪些？〔6分〕 28酶的制备及提取过程中常注意哪些事项？〔6分〕 29蛋白质的别离常用的方法有哪些？〔6分〕 30甲醛滴定法测定氨基酸的根本原理〔6分〕 31为什么SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用来测定未知蛋白质的相对分子质量？〔6分〕 32连续聚丙烯酰胺凝胶电泳与不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么不同？〔6分〕 33聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点？〔6分〕 34琼脂糖凝胶电泳的优点？〔6分〕 35提取某种植物组织中的总DNA时，使用的细胞提取液中的主要试剂成分是什么？各有什么作用？〔7分〕 36如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA？〔6分〕 37聚丙烯酰胺凝胶电泳别离血清蛋白时，使用的电泳缓冲液PH＝8.3，那么样品应点在哪端？为什么？〔6分〕 二、技能或实验操作考核题 38说明纸层析和离子交换层析别离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。

〔10分〕 39凝胶电泳的一般操作步骤〔11分〕 40普通离心机的使用操作〔示范〕〔10分〕 41可见分光光度计的使用操作〔示范〕〔10分〕 42假如要105摄氏度枯燥某种物质，如何使用枯燥箱〔示范〕? 〔10分〕 43要称取某种药品2.0g，如何使用天平〔示范〕？〔10分〕 44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液应如何配制？〔10分〕 45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液应如何配制〔浓盐酸比重是1.19g/L，重量百分比浓度为36.5％〕？〔11分〕 46分别配制出10μg/ml，5μg/ml，2μg/ml，1μg/ml的DNA标准溶液，应如何配制？〔尽可能节约〕〔10分〕 答案： 1、盐析和盐溶：盐析：在蛋白质溶液中参加一定量的高浓度中性盐(如硫酸氨),使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析盐溶：参加少量中性盐可增加蛋白质的溶解度,即盐溶现象 2、电泳：带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极挪动的现象 3、层析〔色谱〕：用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进展洗脱，使混合物各组分以不同速度挪动，从而到达别离的一种物理方法。

4、酶的活力单位：是指在特定条件下(25℃、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔(10-6摩尔)底物转化所需要的酶量 5、比活力：代表酶制剂的纯度根据国际酶学委员会规定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示 6、分子筛效应：凝胶本身具有三维网状构造,大的分子在通过这种网状构造上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应 7、电泳的原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向挪动电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待别离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进展别离、鉴定或提纯的技术 8、离子交换层析的原理：离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相,利用它与流动相中的离子能进展可逆的交换性质来别离离子型化合物的一种方法 9、亲和层析的原理：亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键结实结合于载体上而制得的层析系统。

这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间构造的识别 10、凝胶过滤层析的原理：一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小别离蛋白质或其它分子混合物的层析技术凝胶过滤层析具有分子筛效应 11、吸附层析的原理：组份在吸附剂外表吸附固定相是固体吸附剂,各才能不同而进展别离的方法 12、透析技术的根本原理及其应用： 13、聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用处：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因此电渗作用比拟小，不易和样品互相作用 ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链构造，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要别离物质分子 的大小，选择适宜的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比拟好的机械性质一 般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于别离分子量范围不1万至100万物 质，1万以下的蛋白质那么采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶那么难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改良凝胶的机械性能。

③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定 ④丙烯酰胺是比拟纯的化合物，可以精制，减少污染合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺丙烯酰胺称单体，甲撑双 丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反响形成凝胶 14、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类？：根据别离的原理不同分类，层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析 15、普通离心机的使用考前须知？： (1).离心机要置程度位置,以保证旋转轴垂直地球程度面 (2).使用前应检查套环是否平衡(台称) (3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡(台称) (4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡，平衡后把它们放置于转子的对称位置 (5).盖好盖子,翻开电开关,调整离心时间 (6).启动离心时转速应由小至大,缓慢升速(一般要2~3min) (7).到达预定转速后再调整离心时间至预定时间(10min) (8).离心完成后要调整调速连杆至零位,同时关上电。

(9).要等到转速为零时才能翻开离心机盖,取出样品 16、可见分光光度计的使用考前须知？：〔1〕 使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面比色皿应该防止磨损透光面 〔2〕 使用过程中不得翻开盖子，保持仪器清洁,为防止溶液洒落对仪器造成的腐蚀，所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作比色皿放进样品池之前必须把外外表擦干 〔3〕当〔仅当〕操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时，应该立即关断主机电，重新启动，但无须关断灯电 〔4〕光学器件和仪器运行环境需保护清洁清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等 有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩 17、蛋白质含量测定的常用方法有那些？：〔1〕微量凯式定氮法〔2〕双缩脲法〔3〕folin－酚试剂法〔4〕紫外分光光度法〔5〕考马斯亮蓝染色法 18、粗脂肪的提取和含量测定的根本原理脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸结合成的脂类化合物, 能溶于脂溶性有机溶剂本实验用重量法，利用脂肪能溶于脂溶性溶剂这一特性，用脂溶性溶剂将脂肪提取出来，借蒸发除去溶剂后称量整个提取过程均在索氏提取器中进展。

通常使用的脂溶性溶剂为乙醚或沸点为30oC -60 oC的石油醚用此法提取的脂溶性物质除脂肪外，还含有游离脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故称为“粗脂肪” 19、索氏提取器是由哪几局部组成的？：提取瓶，提取管和冷凝管三局部组成 20、粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤〔6分〕：1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重，材料枯燥至恒重 2.称取枯燥后的材料1-2g,放入研钵中研磨(越细越好)将研磨好的材料用脱脂滤纸包住,用少许脱脂棉擦拭研钵壁上粘的材料及油脂,也一并放入滤纸包. 用棉线拴住滤纸包,将滤纸包放入抽提管，在抽提瓶中参加2/3体积的无水乙醚在70-75℃的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50次，或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点 3 取出试样，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完，擦净瓶外壁，将抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重 21、粗脂肪的提取实验中如何减少误差？〔6分〕：〔1〕材料和提取瓶充分枯燥〔2〕材料尽可能的不损失3)提取充分完全〔4〕提取后瓶子还要充分的枯燥 22、凯氏定氮法测定总氮量的根本原理〔6分〕：样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫氨.经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液 被中和的程度可计算得样品氮的含量.以甘氨酸为例: 1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成〔NH4〕2SO4 反响式为： H2SO4==SO2+H2O+[O] R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3 NH3 R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O 2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，搜集于 H3BO3 溶液中。

反响式为: 2NH4++OH-==NH3+H2O NH3+H3BO3==NH4++H2BO3- 3. 再用浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 23、凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些？〔6分〕：凯氏烧瓶 ，容量瓶 凯氏定氮装置 移液管 酸式滴定管 分析^p 天平 电炉 烘箱 24、核酸的含量测定常用的方法有哪些？〔6分〕〔1〕紫外分光光度法； 〔2〕定磷法：钼蓝比色法 〔3〕定糖法： RNA+盐酸——糠醛+地衣酚——Ａ670，鲜绿色； DNA+二苯胺——Ａ595,蓝色化合物 〔4〕琼脂糖凝胶电泳法 25、双倒数法测定米氏常数的根本原理〔6分〕： Lineweaver和Burk将米氏方程改写成倒数形式： 26、双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪。