微生物的实验室培养（用）.ppt

课题1 微生物的实验室培养,专题2 微生物的培养与应用,一、培养基,常用于工业生产,常用于微生物的纯化和计数,培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质1、定义：,2、种类：,（加入凝固剂琼脂）,二、微生物所需的营养,培养基一般都含有 此外还要满足微生物生长对 的 要求培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加_______， 培养霉菌时需将培养基的pH调至______， 培养细菌时需将pH调至__________， 培养厌氧微生物时则需要提供______的条件维生素,酸性,中性或微碱性,无氧,例如：,水、碳源、氮源和无机盐,pH、特殊营养物质以及氧气,,：凡是能为微生物提供碳元素的物质①无机化合物：CO2；NaHCO3等,②有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油、牛肉膏、蛋白胨等,①参与构成生物体和一些代谢产物 ②有机碳源还是异养微生物的能源物质,⑴.概念,⑵.举例：,⑶.作用：,1.微生物的碳源,注意：自养微生物的碳源为 ；异养微生物的碳源为 。

无机碳源,有机碳源,①无机化合物：N2、NH4+、NO3-、NH3等②有机化合物：尿素、氨基酸、牛肉膏、蛋白胨等,凡是能够为微生物提供N元素的物质用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物2.微生物的氮源,⑴.概念：,⑵.举例：,⑶.作用：,①无机化合物：N2、NH4+、NO3-、NH3等②有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,凡是能够为微生物提供N元素的营养物质主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物2.微生物的氮源,⑴.概念：,⑵.来源：,⑶.作用：,注：固氮菌（如根瘤菌）的氮源为无机氮源 即学即练：,1.不能作为异养微生物碳源的是（ ） A．糖类 B．含碳有机物 C．石油 D．含碳无机物,D,2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（ ） A．碳源 B．氮源 C．无机盐 D．特殊营养物质,A,3、某细菌的培养基的组成成分是葡萄糖、尿素、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁和蒸馏水等，其中凝固剂是 ,碳源是 ，氮源是 从同化作用类型来看，该培养基培养的细菌属于 型琼脂,葡萄糖,尿素,异养,即学即练：,3、某细菌的培养基的组成成分是葡萄糖、尿素、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁和蒸馏水等，其中凝固剂是 ,碳源是 ，氮源是 。

已知只有能够合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，该培养基属于 培养基从同化作用类型来看，用该培养基培养的细菌属于( ),同化作用：自养型/异养型 异化作用：需氧型/厌氧型/兼性厌氧型,琼脂,葡萄糖,尿素,选择,异养型微生物,即学即练：,阅读并思考： 1. 获得纯净培养物的关键是什么？主要几方面？2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染三、无菌技术,防止外来杂菌的入侵3. 消毒和灭菌有何不同？,4.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？,3. 消毒和灭菌有何不同？,芽孢：某些细菌的休眠体，对热、碱、 酸、高 渗以及辐射均有强耐受性较为温和,强烈,物体表面或内部的部分微生物,物体内外所有的微生物,不能,能,孢子：真菌及某些植物所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞例：到了冬季，酵母菌进入休眠状态，存在形式是（ ）A.孢子 B.芽孢 C.受精卵 D.精子,A,①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min ③化学药剂消毒法：用70%酒精等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。

④紫外线消毒:照射30min⑴.消毒的方法：,4.常用的消毒与灭菌的方法,针对物体表面和空气中的微生物，所用器械是 紫外灯 照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果紫外线消毒,,,,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,①微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具 ②试管口或瓶口等容易被污染的部位,干热灭菌箱内 160－170℃ 加热1－2h,能耐高温的需要保持干燥的物品如玻璃器皿（吸管、培养皿)和金属用具等,高压蒸汽灭菌锅内100kPa 121℃ 15-30min,通常用于培养基的灭菌,1． 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应 在 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触清洁和消毒,灭菌,酒精灯火焰附近,周围物品,填一填：,2． 消毒方法： （1）日常生活经常用到的是 消毒法； （2）对一些不耐高温的液体，则使用 消毒法； （3）对接种室、接种箱或超净工作台，首先喷洒 等溶液以增强消毒效果，然后使用 进行消毒，以杀死 物体表面或空气中的微生物。

（4）实验操作者的双手使用 进行消毒； （5）饮水水源用 进行消毒煮沸,巴氏,石炭酸或煤酚皂,紫外线,酒精,氯气,3．灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用 灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用 灭菌法，所用器械是 ； （3）培养基、无菌水等使用 灭菌法，所用器械是 灼烧,干热灭菌箱,干热,高压蒸汽,高压蒸汽灭菌锅,②干热灭菌 160－170℃ ；1－2h,能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min,,,通常用于培养基的灭菌,,对实验者双手消毒采用 ， 对操作环境消毒采用 ， 对培养基采用 ， 对玻璃器皿进行 ； 对接种环采用 复习巩固,75%酒精擦拭,紫外线照射30min,高压蒸汽灭菌,干热灭菌,灼烧灭菌,三、实验安排,本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，实验过程分为两个阶段：,（1）制备培养基,（2）纯化大肠杆菌,大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：（根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例）,2.称量准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。

思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？,3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加少量水，加热当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，不断用玻璃棒搅拌，原因：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂待琼脂完全熔化后，加蒸馏水至100mL注意：溶化后需先调节PH，再分装，然后灭菌),4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，瓶口加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放到高压蒸汽灭菌锅内灭菌将培养皿用几层报纸包紧，5-8套培养皿作一包，包好后放入干热灭菌箱内灭菌5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时，在酒精灯火焰附近倒平板在火焰旁,平板冷却凝固后，倒过来放置瓶口迅速通过火焰,,,,倒入约10-20mL培养基,倒平板操作,约50℃,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,灼烧瓶口灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基,,,,?,思考3,①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?②加琼脂的目的是什么?,可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能 溶于水中,减少误差,作为凝固剂,思考4,①在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？②培养皿能否用高压蒸汽灭菌？,?,在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞； 在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用,不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌,4、右表是某微生物培养基成分，请据此回答： （1）右表培养基可培养的微生物类型 是 。

（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中 如不想浪费此培养基，可再加入 ，用于培养金黄色葡萄球菌自养型微生物,含碳有机物,（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 （4）表中营养成分共有 类 （5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 （6）右表中各成分重量确定的原则是 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 自生固氮微生物,3,调整pH,依微生物的生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,倒平板操作的讨论,1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此不要继续用这个平板培养微生物二）纯化大肠杆菌,微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法1.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落由一个或几个连在一起的同种细胞在固体培养基上大量繁殖形成肉眼可见的子细胞群体称为菌落2.特征：,不同菌种所形成菌落的大小、形状、颜色等不同3.功能：,1.定义：,补充知识点：菌落,菌落是鉴定菌种的重要依据,1.平板划线操作：,菌液,划3个平板,1个不划线,接种环,防止划破培养基,（空白对照）,瓶口通过火焰,瓶口通过火焰,灼烧,冷却,沾取菌液,从上一次划线末端开始划线,平板划线接种,灼烧接种环,冷却,划线 （第一区域）,蘸取菌液,灼烧接种环,冷却,划线 （第二区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第三区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第四区域）,灼烧接种环,冷却,划线 （第五区域）,灼烧接种环,,,,,,,,,,,,,,,,,平板倒置放置培养,,平板划线法,,,,,,,,,,,,第一区域,第二区域,第三区域,第四区域,第五区域,在做第二次以及其以后的划线操作时，要 从 。

不要将最后一区的划线与 思考：,上一次划线的末端开始划线第一区相连,在做第二次以及其以后的划线操作时，为什么要从上一次划线的末端开始划线？,思考：,线条末端细菌数目比线条起始处要 ，每次从上 一次划线的末端开始，能使细菌数目随着划线次数 的增加而逐步 ，最终得到由单个细菌繁殖而来 的 少,减少,菌落,平板划线的结果,,6支试管，分别加入9ml无菌水,101,102,103,104,105,106,2.稀释涂布平板法：,a. 系列稀释操作：,。