细胞通透性实验报告9262.pdf

山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 一、 实验目的 1. 了解溶血现象及细胞通透性的一般规律； 2. 观察细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度； 二、 实验原理 细胞膜是一种半透膜,对物质的通透具有选择性，使细胞具有一个相对稳定的内环境将红细胞放在低渗溶液中，水分子会大量渗到细胞内，使细胞胀破,血红蛋白释放到介质中，发生溶血将红细胞放入含有不同溶质的溶液中，由于细胞膜对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的则不能，渗入的溶质能提高红细胞的渗透压， 所以促使水分进入细胞 由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血( hemolysis )随着水分不断进入，红细胞最终破裂并引起溶血 因而发生溶血现象所需的时间长短可以作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

因此， 本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料， 将其放人不同的介质溶液中，观察红细胞的变化 三、 实验用品 1. 实验材料 鸡血（事先取好，加入 Alsever 液，混匀后制悬液，4℃保存） ； 2. 实验试剂 %的氯化钠溶液（等渗溶液） ； %的氯化钠溶液（低渗溶液） L 的甲醇、L 的丙三醇、6%的葡萄糖溶液、2%的 Triton X-100 溶液（高渗溶液） ； 3. 实验器材 试管（此处用的是刻度离心管）六支、离心机、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜等 四、 实验步骤 1. 取血 吸取预先处理好的鸡血溶液 6mL，加入 4mL 的等渗%的氯化钠溶液，混匀后放入离心机，1200rpm 离心 5min； 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 2. 制细胞悬液 用滴管吸取上清液， 加入与沉淀量相等的等渗 NaCl 溶液， 混匀制成悬液。

如果沉淀量少于，则补充鸡血） 3. 溶血现象观察 在离心管之中分别加入%的氯化钠溶液、%的氯化钠溶液、L 的甲醇、L的丙三醇、6%的葡萄糖溶液、2%的 Triton X-100 溶液 3mL，滴入两滴细胞悬液，立即混匀并计时，溶血现象发生后，记录溶血时间，并制片观察溶血情况： %的氯化钠溶液、L 的甲醇、2%的 Triton X-100 溶液（高渗溶液）反应非常迅速，因此需立即观察； L 的丙三醇、6%的葡萄糖溶液反应程度不剧烈，所以，每间隔 10 分钟观察记录溶血情况，观察 1h 注意： 6%的葡萄糖溶液有强烈的诱导细胞融合的作用，因此，必须严格混匀之后进行观察 五、 实验结果判断 (一) 判断指标 (1) 不溶血:液体分二层，上层浅黄色透明，下层红色不透明镜检红细胞完好 (2) 不完全溶血:溶液混浊，上层变成红色，镜检有部分红细胞有缺口或破裂 (3)完全溶血: 液体变红而且透明，镜检发现细胞全部成碎片 (二) 记录溶血时间: 试剂类型 是否溶血 时间 结果分析 %NaCl+稀释鸡血 否 等渗溶液中不会发生破裂，作为对照 % NaCl+稀释鸡血 是 30s 低渗溶液，细胞吸水涨破。

L 甲醇+稀释鸡血 是 8s 高渗溶液，细胞通透性大，导致胞内渗透压升高， 吸水涨破 L 丙三醇+稀释鸡血 是 9s 高渗溶液，细胞通透性大，导致胞内渗透压升高， 吸水涨破 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 6%葡萄糖溶液+稀释鸡血 是 1h内未完全溶血 高渗溶液，细胞吸收缓慢，细胞逐渐吸水涨破 2%Triton X-100 溶液+稀释鸡血 是 1h内未完全溶血 高渗溶液，细胞吸收缓慢，细胞逐渐吸水涨破 六、 实验结果照片 1. % NaCl 溶液（对照组） 2. % NaCl 溶液 图 1 % NaCl 溶液下的细胞形态（放大倍数 10 ×40） ： 细胞轮廓明显清晰，细胞大小正常，细胞质透光正常。

图 3 加 %NaCl 溶 液 后 的 细 胞 形 态（10×40） ：溶血后，细胞破裂，留下一个模糊的血影（较暗视野观察） 图 2 加入后 30s， 细胞悬液出现溶血现象：（右为等渗对照，左为实验组）由深红色溶液变为，透明、颜色较浅的溶液 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 3. L 甲醇溶液 4. Triton X-100 溶液 5. mL 的丙三醇溶液 宏观变化： 图 4 加入后 8s，细胞悬液发生溶血现象： （右为等渗对照，左为实验组）由深红色溶液变为透明、颜色较浅的溶液 图 5 加 L 甲醇溶液后细胞形态： （10×40） ：溶血之后，仍是细胞破裂，留下模糊的血影（在较暗视野下观察） 。

图 6 加入后 9s，细胞悬液发生溶血现象： （右为等渗对照，左为实验组）由深红色溶液变为透明、颜色较浅的溶液 由于细胞不完全破裂，所以透明度相对较差，细胞液浑浊 图 7 加入 Triton X-100 后细胞的状态（10×40） ：溶血后，细胞膜遭到破坏，细胞内容物流出，留下模糊血影（暗视野下观察） 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 镜检观察结果： 图 8 加入丙三醇溶液 0min，细胞悬液未发生太大的颜色变化 （左为等渗对照，右为实验组） 图 9 加入丙三醇溶液之后 60min，细胞悬液明显变得较为澄清 （左为等渗对照组，右为实验组） 图 10 丙三醇加入后 0min 的显微状态（10×40） ： 视野中细胞全部为完全状态，细胞轮廓清晰，不发生细胞破裂。

溶血率=0% 图 11 丙三醇加入后 10min 时的显微状态（10×40） ： 视野之中， 细胞仍然为完全状态，轮廓清晰，不发生溶血 溶血率=0 % 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 图 12 丙三醇加入后 20min 后的显微状态（10×40） ： 视野之中， 开始出现很多丙三醇油滴，连接在细胞膜表面，开始有少部分细胞发生破裂，形成轮廓模糊的血影 溶血率=% 图 13 丙三醇加入后 30min 后的显微状态（10×40） ：视野之中，油滴数目开始减少，细胞边缘开始出现不规则不圆滑的断裂， 这标志着丙三醇已经开始进入细胞 溶血率=% 图 14 丙三醇加入后 40min 后的显微状态（10×40） ：视野之中更多的细胞边缘不规则化，丙三醇已经逐步进入细胞。

同时，破裂细胞数量也在增加 溶血率=% 图 15 丙三醇加入后 50min 后的显微状态（10×40） ：视野之中更多的细胞边缘不规则化，细胞破裂的速度明显加快，形成更大数量的血影 溶血率=10% 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 6. 6%葡萄糖溶液 图 16 丙三醇加入之后 60min 的显微状态（10×40） ： 视野中，细胞破裂速度更加迅速，出现了大量轮廓模糊的血影，但溶液仍未完全溶血，预计完全溶血时间＞1h 溶血率=50% 图 17 加入葡萄糖溶液 0min，细胞悬液颜色变化不明显 （左为等渗对照，右为实验组） 图 18 加入葡萄糖溶液 60min，细胞悬液颜色较为澄清 （左为等渗对照，右为实验组） 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 镜检结果： 图 19 加入葡萄糖溶液后 0min 的显微状态（10×40） ：由于葡萄糖溶液具有降低细胞表面表面张力的作用，因此会诱导细胞融合，所以视野中有细胞融合成团。

溶血率=0% 图 20 加入葡萄糖溶液之后 10min 的显微状态（10×40） ：细胞全部轮廓清晰，没有破裂现象，但部分细胞发生融合，因此一定要混合均匀，避免融合现象影响观察 溶血率=0% 图 21 加入葡萄糖溶液之后 20min 的显微状态（10×40） ：细胞开始出现破碎，内容物流出的现象，形成部分血影 溶血率=% 图 22 加入葡萄糖溶液之后 30min 的显微状态（10×40） ：更多的细胞发生破碎，标志大部分细胞的渗透压已经高于环境： 溶血率=% 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 图 23 加入葡萄糖溶液之后 40min 的显微状态（10×40） ：视野中，部分细胞边缘扭曲变形，细胞破裂的速度加快，出现更多的血影。

溶血率=% 图 24 加入葡萄糖溶液之后 50min 的显微状态（10×40） ：视野中，细胞溶血现象更加明显，在此段中，速度相对最快 溶血率=% 图 25 加入葡萄糖溶液之后 60min 的显微状态（10×40） ： 视野中， 细胞悬液同样没有完全溶血，部分细胞仍然状态完整，轮廓清晰， 预计完全溶血时间＞1h 溶血率=% 山东大学实验报告 2019 年 3 月 14 日 姓名 系年级 17 级 学号 同组者 科目 细胞实验 实验题目 观察细胞的通透性 仪器编号 七、 实验思考与总结 1. 实验中有六组实验，其中四组完成速度较快，结果记录较为方便，而剩余两组：丙三醇和葡萄糖溶液的实验之中，实验周期较长且实验记录较多，因此可以进行组内分工，分为两组更加高效的完成实验； 2. 由于 Triton-x 试剂和甲醇溶液对于细胞反应的较为迅速，所以，完全溶血状态很难稳定准确的观察到，所以应该在滴加血细胞溶液之前，做好准备计时，加入后迅速混匀观察； 。