实验酶的特异性.ppt

实验酶的特异性【【实验目的目的】】 学学习酵母蔗糖酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉（粗提液）和唾液淀粉酶的的制制备，了解，了解酶的特异性及的特异性及检测方法实验原理原理】】 酶是生物催化是生物催化剂，，酶对所作用的底物有所作用的底物有严格格的的选择性，即性，即酶的特异性的特异性 淀粉和蔗糖都是非淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分原性糖，分别为唾液淀唾液淀粉粉酶和蔗糖和蔗糖酶的的专一底物淀粉被唾液淀粉一底物淀粉被唾液淀粉酶水水解生成具有解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解水解生成具有生成具有还原性的葡萄糖和果糖原性的葡萄糖和果糖 Benedict试剂（含有（含有Cu 2+）常用于）常用于检验还原原糖的存在，其被糖的存在，其被还原后生成原后生成砖红色的色的Cu2O沉淀【【器材及器材及试剂】】（一）器材：（一）器材： 1. 恒温水浴恒温水浴锅 2. 试管及管及试管架管架 3. 离心机离心机 4. 吸量吸量管管 5.烧杯、量筒杯、量筒 、漏斗等、漏斗等（二）（二）试剂：： 1. 2%蔗糖蔗糖 2. 1%淀粉（内含淀粉（内含0.3%的的NaCl）） 3. 唾液淀粉唾液淀粉酶溶液溶液 4. 蔗糖蔗糖酶溶液溶液 5. Benedict试剂【【实验步步骤】】（一）淀粉（一）淀粉酶的特异性的特异性1.唾液淀粉唾液淀粉酶溶液的制溶液的制备：： 先用蒸先用蒸馏水漱口，然后用水漱口，然后用洁净试管管1支，支，取唾液（无泡沫）取唾液（无泡沫）约2ml，蒸，蒸馏水水20倍稀倍稀释，，备用。

用2.取取试管管5支，支，标号，按下表所列的次序操作：号，按下表所列的次序操作：试剂试管管编号号123451%淀粉溶液淀粉溶液（（ml））1.0—1.0——2%蔗糖溶液蔗糖溶液（（ml））—1.0—1.0—唾液淀粉唾液淀粉酶（（ml））——1.01.01.0蒸蒸馏水（水（ml））1.01.0——1.0 3. 摇匀，置匀，置37℃℃恒温水浴保温恒温水浴保温10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴，再放沸水浴5min观察各察各管管颜色色变化，并解化，并解释实验结果 (二二) 蔗糖蔗糖酶的特异性的特异性1. 蔗糖蔗糖酶溶液的制溶液的制备：： 取活性干酵母取活性干酵母1.0g，置于研，置于研钵中，中，加少量蒸加少量蒸馏水及石英砂研磨提取水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸，再加蒸馏水至水至总体体积约为20ml，，过滤或离心，或离心，滤液或上清液液或上清液备用2. 取取试管管5支，支，标号，按下表所列的次序操作：号，按下表所列的次序操作：试剂试管管编号号123451%淀粉溶液淀粉溶液（（ml））1.0—1.0——2%蔗糖溶液蔗糖溶液（（ml））—1.0—1.0—蔗糖蔗糖酶（（ml））——1.01.01.0蒸蒸馏水水（（ml））1.01.0——1.03. 摇匀，匀， 置置37℃℃恒温水浴保温恒温水浴保温10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水，再放沸水浴浴5min。

观察各管察各管颜色色变化，化，并解并解释实验结果【【注意事注意事项】】 唾液的稀唾液的稀释倍数因人而异，有倍数因人而异，有时差差别很大，很大，稀稀释倍数可以是倍数可以是50～～300倍思考思考题】】 1、、 若将淀粉若将淀粉酶和蔗糖和蔗糖酶煮沸煮沸1min，，实验结果会果会发生什么生什么样的的变化？化？ 2、、 酶作用的作用的专一性有哪几种？一性有哪几种？量程的量程的调节1.按照从大体按照从大体积调为小体小体积的方法的方法调节2.用拇指和食指旋用拇指和食指旋转取液器上的旋取液器上的旋钮，使，使数字窗口出数字窗口出现所需容量体所需容量体积的数字注意：千万不要将旋注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，旋出最大量程，否否则会卡住内部机械装置或者会卡住内部机械装置或者弹簧簧弹出出而而损坏了移液坏了移液枪¡微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法枪头（吸液嘴）的装配（吸液嘴）的装配在将在将枪头（（pipette tips）套上移）套上移液液枪时，正确的方法是将移液，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入（器）垂直插入枪头中，稍微用力中，稍微用力左右微微左右微微转动即可使其即可使其紧密密结合。

合移液的方法移液的方法1.吸取液体吸取液体时，用大拇指将按，用大拇指将按钮按下至第一按下至第一停点，移液器保持停点，移液器保持竖直状直状态，将，将枪头插入液插入液面下面下2－－3毫米2.然后慢慢松开按然后慢慢松开按钮回原点3.接着将按接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停按至第一停点排出液体，稍停片刻片刻继续按按按按钮至第二停点吹出残余的液体至第二停点吹出残余的液体最后松开按最后松开按钮移液器的正确放置移液器的正确放置使用完使用完毕，可以将其，可以将其竖直挂在移液直挂在移液枪架上，架上，但要小心但要小心别掉下来当移液器当移液器枪头里有液体里有液体时，切勿将移液器，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞活塞弹簧维护保养保养时的注意事的注意事项如不使用，要把移液如不使用，要把移液枪的量程的量程调至最至最大大值的刻度，使的刻度，使弹簧簧处于松弛状于松弛状态以以保保护弹簧。