医学微生物学实验课件：实验3.ppt

实验三实验三 主要内容主要内容（一）细菌的人工培养（一）细菌的人工培养（二）正常人体及环境中细菌的检查（二）正常人体及环境中细菌的检查（三）理化生物因素对细菌的影响（三）理化生物因素对细菌的影响  细菌的生长条件包括：细菌的生长条件包括：①营养；营养；②适宜温度；适宜温度；③一定的酸碱度；一定的酸碱度；④适当的气体环境；适当的气体环境；⑤渗透压 因此，可根据细菌对营养、因此，可根据细菌对营养、PH、渗透压的要、渗透压的要求制备求制备细菌培养基细菌培养基把细菌接种于培养基后，放恒把细菌接种于培养基后，放恒温温 （一般为（一般为37℃）箱内培养一定时间（通常）箱内培养一定时间（通常18~24h），细菌便可大量繁殖，可进一步观察和研），细菌便可大量繁殖，可进一步观察和研究其生物学特性究其生物学特性细菌的人工培养细菌的人工培养 细菌的人工培养程序为细菌的人工培养程序为 1. 估计标本中细菌种类、数量及培养目的等，估计标本中细菌种类、数量及培养目的等，选选用适当的培养基及接种技术用适当的培养基及接种技术 2. 适宜的气体环境，适宜的气体环境，37℃，，18~24h。

液体液体培养基培养基斜面斜面培养基培养基 接种技术一般分为接种技术一般分为分离分离培养接种法和培养接种法和纯种纯种细细菌接种法菌接种法 细菌的接种技术细菌的接种技术 被检材料如粪便、痰、脓汁、尿液等常混杂有被检材料如粪便、痰、脓汁、尿液等常混杂有多种细菌，平板划线法可使混杂的细菌在琼脂平板多种细菌，平板划线法可使混杂的细菌在琼脂平板表面表面分散生长，分散生长，各自形成不同的菌落，再根据菌落各自形成不同的菌落，再根据菌落的形态特征，挑选的形态特征，挑选单个菌落单个菌落继续培养，以此分离获继续培养，以此分离获得纯种细菌，用于进一步研究、鉴定或保存得纯种细菌，用于进一步研究、鉴定或保存 平板划线的方法根据待检标本中细菌的数量来平板划线的方法根据待检标本中细菌的数量来选择，可分为选择，可分为分段划线法和连续划线法分段划线法和连续划线法两大类一）分离培养接种法（一）分离培养接种法---平板划线法：平板划线法：第一区划线第一区划线接种环灭菌接种环灭菌第二区划线第二区划线接种环灭菌接种环灭菌第三区划线第三区划线接种环灭菌接种环灭菌1．分段划线法（分区划线法）：．分段划线法（分区划线法）： 检查材料中含菌量较多时多用此法，检查材料中含菌量较多时多用此法，以求以求获得孤立菌落。

获得孤立菌落 2. 连续划线法：连续划线法： 检查材料中含菌量较少时可用本法检查材料中含菌量较少时可用本法 （二）纯种细菌接种法（二）纯种细菌接种法 细菌经分离培养出单个菌落后，细菌经分离培养出单个菌落后，常需再移种常需再移种至其他培养基中，以进一步鉴定或保存菌种根至其他培养基中，以进一步鉴定或保存菌种根据接种培养基之物理性状，纯种细菌接种法可分据接种培养基之物理性状，纯种细菌接种法可分为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种法三类养基穿刺接种法三类 斜面培养基接种法斜面培养基接种法 一般用于纯培养从平板上挑取单个一般用于纯培养从平板上挑取单个菌落接种至斜面培养基上，培养后获得大菌落接种至斜面培养基上，培养后获得大量纯种细菌量纯种细菌（有菌苔生长），（有菌苔生长），可进一步对可进一步对细菌进行鉴定或作为菌种保存细菌进行鉴定或作为菌种保存 正常人体及环境中细菌的检查（正常人体及环境中细菌的检查（4人人/组）组）1. 皮肤细菌的检查皮肤细菌的检查右手食指在平板右手食指在平板培养基表面培养基表面相应相应部位轻轻涂抹部位轻轻涂抹普通培养基普通培养基43212.水中细菌检查水中细菌检查 无菌空平皿无菌空平皿污水污水1ml 倾注倾注约约50℃℃琼脂培养基琼脂培养基1管管（约（约14ml），摇匀。

摇匀倾注普通琼脂培养基时温度勿太高或太低！倾注普通琼脂培养基时温度勿太高或太低！3. 空气中细菌的检查空气中细菌的检查 打开皿盖，打开皿盖，暴露在空气暴露在空气中中5~10分钟分钟 普通培养基普通培养基4. 正常人体咽喉部细菌的检查正常人体咽喉部细菌的检查 用灭菌棉拭在被检用灭菌棉拭在被检查者咽喉部轻轻涂查者咽喉部轻轻涂擦后涂于血琼脂培擦后涂于血琼脂培养基一侧，然后改养基一侧，然后改用灭菌接种环作分用灭菌接种环作分段划线接种段划线接种 （做好标记）（做好标记） 血琼脂培养基血琼脂培养基4321（（1））密集划线密集划线法接种细菌：用无菌接种环取细菌培法接种细菌：用无菌接种环取细菌培养物少许，先在平板琼脂表面中央竖划一条线；垂养物少许，先在平板琼脂表面中央竖划一条线；垂直该线作平行密集划线，划满平板；将平板转动直该线作平行密集划线，划满平板；将平板转动90度，再作平行密集划线，划满平板度，再作平行密集划线，划满平板理化生物因素对细菌的影响（理化生物因素对细菌的影响（4人人/组）组）1. 紫外线对细菌的影响紫外线对细菌的影响 照射照射理化生物因素对细菌的影响（理化生物因素对细菌的影响（4人人/组）组）1. 紫外线对细菌的影响紫外线对细菌的影响 （（2）在紫外线灯下将）在紫外线灯下将平皿盖拉开一半，另平皿盖拉开一半，另半面由平皿盖遮住，半面由平皿盖遮住，照射照射20分钟。

分钟 （做好标记）（做好标记） 照射照射2. 细菌对药物的敏感性试验（纸片法）细菌对药物的敏感性试验（纸片法）（（1）以）以密集划线密集划线法接种细菌于整个平板法接种细菌于整个平板（（2）用无菌镊子分别夹取含生理盐水及不同抗生素）用无菌镊子分别夹取含生理盐水及不同抗生素的滤纸片，轻轻贴在平板表面，并用镊子稍压，使的滤纸片，轻轻贴在平板表面，并用镊子稍压，使之贴紧，滤纸片之间距离应基本相等之贴紧，滤纸片之间距离应基本相等注意无菌操作！注意无菌操作！ 结果判定结果判定 将平板置将平板置将平板置将平板置37℃37℃温箱培养温箱培养温箱培养温箱培养2424小时后取出观察滤小时后取出观察滤小时后取出观察滤小时后取出观察滤纸片周围的抑菌圈，用尺子测量其直径并对照细纸片周围的抑菌圈，用尺子测量其直径并对照细纸片周围的抑菌圈，用尺子测量其直径并对照细纸片周围的抑菌圈，用尺子测量其直径并对照细菌对抗生素敏感度判断表做出结果判断菌对抗生素敏感度判断表做出结果判断菌对抗生素敏感度判断表做出结果判断菌对抗生素敏感度判断表做出结果判断 抑菌圈直径在抑菌圈直径在抑菌圈直径在抑菌圈直径在10mm10mm以下者为耐药，以下者为耐药，以下者为耐药，以下者为耐药，10~15mm10~15mm为中度敏感，为中度敏感，为中度敏感，为中度敏感，15mm15mm以上者为敏感。

以上者为敏感以上者为敏感以上者为敏感。