免疫基础第二章抗体.ppt

抗 体,免疫学基础,第一节 免疫球蛋白与抗体的概念,前 言,一、发现：1890年德国学者Behring和日本学者北里用白喉杆菌外毒素免疫动物，在其血清中发现一种能中和这种外毒素的组分称为抗毒素这是在血清中发现的第一种抗体 二、抗体的理化性质 1、抗体是球蛋白（Globulin） 通过电泳证明抗体是两种球蛋白 后又经电泳分析，超速离心分析和分子量测定等方法，发现大部分抗体是γ球蛋白，小部分是β球蛋白抗体（Antibody, Ab) 是由B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一类能与相应抗原特异性结合的球蛋白 免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig)： 指具有抗体活性或者化学结构与抗体相似的球蛋白概 念,因此,抗体都是Ig,但Ig不一定都是抗体Ab: 能与抗原结合 免疫球蛋白 异常Ig:无免疫功能(骨髓瘤蛋白),,体液免疫（humoral immunity） 由抗体介导的免疫称为体液免疫膜表面免疫球蛋白：（membrane surface immunoglobulin，简称SmIg） 存在于成熟的B淋巴细胞表面的抗原受体，其本质也是免疫球蛋白，称为膜表面免疫球蛋白概 念,第二节 免疫球蛋白的结构,一、 基本结构:,1.四肽链结构 ● 两条相同的重链 (heavy chain,H链) ● 两条相同的轻链(light chain,L链),重 链,两条重链各由450-550个氨基酸残基组成，分子量约50-75KD。

根据重链氨基酸的组成和排列不同, 可将 其分为五类: 即 μ（mu）、γ（gamma）、 α（alpha）、 δ（delta）、ε（epsilon）链 IgM（μ）、IgG (γ)、IgA （α）、IgD （δ）、IgE （ε）,同种动物，不同种类免疫球蛋白的差别是由重链决定的两条相同的轻链各由214个氨基酸残基组成，分子量约25KD根据轻链氨基酸的组成和排列不同,可将其分为两型: 即 κ（Kappa）、λ（Lambda）型. (κ:λ约为2:1),轻 链,κ型和λ型的差别主要是C区氨基酸组成和结构不同●有两个端 氨基端(N端) 羧基端(C端),●分两个区 可变区(variable region,V区) 恒定区(constant region,C区),免疫球蛋白的结构,2.可变区和恒定区,可变区：免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸的种类和排列顺序变化较大的区域称为可变区 (V区) 恒定区：免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸种类和排列顺序相对稳定的区域称为恒定区 (C区)●高变区(hypervariable region,HVR) 可变区中一些特定位置的氨基酸残基变异性更大，是特异性识别抗原决定簇的区域，称为超变区。

●骨架区：可变区中变化较小的部分叫骨架区高变区又称为互补决定区 （complementarity-determining region,CDR）3.免疫球蛋白的功能区(结构域）,3.免疫球蛋白的功能区,轻链:VL，CL 重链:VH，CH1，CH2，CH3(IgG、IgA 和 IgD)，CH4（IgM和IgE）,分类,,3. 免疫球蛋白的功能区,功能区的主要作用： VH + VL：结合抗原的部位 CL+CH1 ：遗传标志 CH2 ： 补体结合位点 CH3 ： 细胞表面Fc受体结合,4. 铰链区,铰链区 位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解 铰链区能改变两个Y形臂之间的距离，有利于两臂同时结合两个不同的抗原表位IgD、IgG、IgA有铰链区，IgM和IgE则无二、免疫球蛋白的其他结构,● 连接链(joining chain，J链) 是一条富含半胱氨酸的多肽链,由浆细胞合成 作用: 连接Ig分子形成二聚体和五聚体●分泌片(secretory piece,SP) 是一种由粘膜上皮细胞合成和分泌的含糖肽链 保护分泌型IgA,不受蛋白酶的水解。

介导二聚体IgA的转运和分泌三、免疫球蛋白的水解片段,木瓜蛋白酶水解IgG 得到两个相同的Fab段和一个Fc段 胃蛋白酶裂解IgG 得到一个具有双价活性的F(ab’)2段 和若干个小分子多肽碎片（pFc’） 意义: 用于研究免疫球蛋白的结构和功能; 构建基因工程抗体 避免超敏反应第二节 免疫球蛋白的血清型,（一）同种型（isotype）是指同一种属所有个体的Ig分子共有的抗原特异性标志，为种属型标志同种型抗原决定基存在于Ig C区 （二）同种异型（allotype）是指同一种属不同个体间Ig分子所具有的不同抗原特异性标志，为个体型标志同种异型抗原决定基主要分布在CH和CL （三）独特型（idiotype，Id）是指同一个体内，存在于不同免疫球蛋白分子可变区上的抗原特异性其决定簇又称为独特位(idiotope)免疫球蛋白的血清型示意图,第三节 免疫球蛋白的生物学活性和 各类Ig的主要特性,,一、免疫球蛋白的生物学活性,（二） 激活补体 IgG和IgM与相应抗原结合后，可因构型改变而使其CH2/CH3功能区内的补体结合点暴露，激活补体途径抗毒素+外毒素 中和毒素,抗病毒抗体+病毒 阻止病毒 感染细胞,分泌型IgA +细菌 抑制细菌 粘附,（一） 特异性结合抗原(VL · VH);,补体活化过程,1.调理作用 ( IgG)：IgG与细菌等颗粒性抗原结合后，可通过其Fc段与巨 噬细胞和中性粒细胞表面相应IgG Fc受体结合，促进吞噬细胞对细菌等颗粒抗原的吞噬作用。

2.抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)：IgG与肿瘤或病毒感染的靶细胞结合后，可通过其Fc段与NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞表面相应IgG Fc受体结合，增强NK细胞和触发吞噬细胞对靶细胞的杀伤作用，叫ADCC效应3.介导Ⅰ型超敏反应( IgE)：由IgE的Fc段结合肥大细胞与嗜碱粒细胞而使其成为致敏状态三） 结合细胞表面的 Fc 受体,,,,,,,I型超敏反应机制,,（四）通过胎盘和粘膜 在人类，IgG是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白IgG穿过胎盘的作用是一种重要的自然被动免疫机制，是新生儿抗感染的主要力量 分泌型IgA可通过呼吸道和消化道的粘膜，是粘膜局部免疫的最主要因素 （五）具有抗原性 Ig本身也是一种抗原，可刺激产生抗Ig的抗体免疫分子,免疫球蛋白,,,二、五类免疫球蛋白的特性与功能,1、 IgG,多为单体,有四个亚类(IgG1～4); 血清中含量最高，半衰期最长 于出生后3个月开始合成，3～ 5岁达成人水平 唯一能通过胎盘的抗体 能发挥重要的生物学效应：调理作用、ADCC、激活补体、抗菌、抗毒和抗病毒作用、参与II、III型超敏反应。

为五聚体，是分子量最大的Ig，称巨球蛋白 半衰期短，约5 ～ 10天 天然血型抗体是IgM IgM是个体发育过程最早能产生的抗体，胚胎晚期已能合成，新生儿脐带血中若IgM水平升高，表示该儿曾有宫内感染 抗原刺激后出现最早的抗体 参与II、III型超敏反应 2、IgM,,3、IgA,分为血清型和分泌型两种 血清型IgA 多为单体，存在于血清中 分泌型IgA（SIgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成主要存在于唾液、泪液，呼吸道消化道和泌尿生殖道粘膜的分泌液中 分泌型IgA是参与粘膜局部免疫的主要抗体4、IgD,IgD是B细胞的重要表面标志 B细胞的分化过程中首先出现SmIgM，后来出现SmIgD，SmIgD的出现标志着B细胞的成熟5、IgE,又称亲细胞抗体 参与I型超敏反应 抗寄生虫的主要抗体,CH2和CH3区可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的Fc受体结合，引起I型超敏反应,第五节 人工制备抗体,一、多克隆抗体 指体内多个B细胞克隆针对抗原物质上不同决定簇所产生抗体的混合物，叫多克隆抗体主要存在于血清中 多个抗原决定基——机体——多种抗体的混合物 来源广泛，制备容易；特异性不高，难以大量制备。

多克隆抗体产生示意图,,1.概念:是通过杂交瘤技术获得的，由识别同一种抗原决定簇的B细胞克隆产生的抗体，称为单克隆抗体 2.特点：特异性强、效价高、少或无血清交叉反应、制备成本低二、单克隆抗体（monoclonal antibody）,,,,,,,,,免疫分子,免疫球蛋白,,▲免疫诊断,▲检测激素、受体;,▲治疗肿瘤、移植排斥反应及自身免疫病等3.应用:,单克隆抗体,,三、基因工程抗体,1.定义 在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修 饰，导入受体细胞表达的抗体 2.举例 人-鼠嵌合抗体(chimeric antibody) 人源化抗体 单链抗体 双特异性抗体(bispecific antibody),。