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完整word版)1.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 3学时实验一 酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的与要求 1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 3. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别.二、实验原理 1 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水—碘液浸片法来观察酵母细胞大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别 2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色，还原型无色用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞,无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色因此,不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

图1:酵母菌美兰浸片观察3min（10×40） 图2：酵母菌美兰浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1 菌种 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的麦芽汁（或豆芽汁）液体培养物2. 溶液或试剂：0.1％和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或001%美篮水溶液),革兰氏染色用碘液等3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察(1）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液,然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多注:染液不宜过多或过少,否则,在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡 用接种环将菌体与染液混合时,不要剧烈涂抹，以免破坏细胞2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上 注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡 （3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况,并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约05h后再次观察，注意死细胞数量是否增加2．水—碘液浸片的观察在载玻片中央滴一滴碘液,然后在其上加3 小滴水，取少许酵母菌苔放在水—碘液中混匀,盖上盖玻片后镜检五、实验结果绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征六、思考题1 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因. 美篮浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大原因：一是虽然美篮对细胞无毒,但浓度大时细胞外渗透压增大导致细胞失水，二是细胞还原能力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？注意事项：1 锥形瓶中装入的液体培养基应不超过30％，避免加液量过多导致菌液内部缺氧 培养时锥形瓶顶部不能用棉塞密封，应用纱布以保证更好的通透性.3. 从培养2天的液体培养基中取菌液前应先摇动锥形瓶，因为长时间培养后菌体会沉积到锥形瓶底部.。