实验三 萘联苯菲的高效液相色谱分析.doc

实验实验 2 2 萘、联苯、菲的高效液相色谱分析萘、联苯、菲的高效液相色谱分析一、实验目的1、理解反相液相色谱的优点和应用；2、掌握归一化定量方法二、原理在液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基固定相，极性流动相这种色谱法称为反相液相色谱法这种分离方式特别适合于同系物、苯并系物等萘、联苯、菲在 ODS 柱上的作用力大小不等，它们的 k'值不等（k'为不同组分的分配比） ，在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子根据组分峰面积大小的不同及测得的定量校正因子，就可以由归一化定量方法求出各组分的含量归一化定量法的公式为：Pi%=Aifi'/(A1f1+A2f2+...+Anfn)×100式中：Ai 为组分峰面积，fi'为组分的绝对定量校正因子采用归一化法的条件是：样品中所有组分要流出色谱柱，并能给出信号此法简便、准确，对进样量的要求不十分严格三、仪器与试剂1、仪器：LC－7000 高效液相色谱仪；紫外吸收监测器（DAD） ；柱C18，15cm×4.6cm；微量注射器2、流动相：甲醇/水＝88/123、试剂：甲醇（AR） ，重蒸馏一次；二次蒸馏水；萘、联苯、菲（均为 AR级） 四、实验步骤1、按操作说明书使色谱仪正常运转，并将实验条件调节如下：柱温：室温；流动相流速：1.0ml/min；监测器工作波长：254nm2、标准溶液的配制：准确称取萘 0.08mg，联苯 0.02mg，菲 0.01mg，用重蒸馏的甲醇溶解，并转移至 50ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3、在基线平直后，注入标准溶液 3.0μl，记下各组分保留时间再分别注入纯样对照4、注入样品 3.0μl，记下保留时间重复 2 次5、实验结束后按照要求关好仪器五、结果处理1、确定未知样中各组分出峰次序2、求取各组分的绝对校正因子3、求取样品中各组分的百分含量六、注意事项1、用微量注射器吸液时，要防止气泡吸入2、室温较低时，为加速萘的溶解，可以用红外灯稍稍加热七、思考题1、观察分离所得的色谱图，解释不同组分之间分离差别的原因；2、说明紫外吸收检测器工作原理；3、高效液相色谱柱可以在一般的室温条件下进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？。