柱前衍生结合手性固定相hplc法测定手性药物的光学纯度.pdf

Yl2l27 7 7 p 1 7I ：| 大罄p7 | I 犬学 硕士学位论文 题 指导教师—j L 盟学L 艮一 专 授予学位日期生旦目 四川_ 犬学硕士学位论文 柱前衍生结合手性固定相H P L C 法 测定手性药物的光学纯度 生物化工专业 研究生徐旭指导教师付超教授 高效液相色谱( H P L C ) 法是分离手性物质的一种快速、有效的方法其中， 手性固定相( C S P ) 特别是P i r k l e 型( 刷型) 手性固定相常用于H P L C 中的手性分 离，近年来已广泛应用于手性药物或中间体的制备分离以及手性药物光学纯度 的测定 P i r k l e 型C S P 能够分离的物质较多，但是由于其结构特点，仍有局限性 为了扩大分离范围，本文利用柱前衍生化与手性固定相H P L C 法相结合的原理， 根据C S P 的特点，对手性药物进行柱前衍生化，使两个对映体的衍生物与C S P 发生的相互作用差别更大，从而使两个对映体的衍生物在C S P 上得到很好的分 离利用这种方法，一些原来在选用的C S P 上不能手性分离的物质，如2 一羟基 酸( 扁桃酸) 、Ⅱ一苯乙胺等，其衍生物得到了很好的分离效果。

采用的衍生化法 是生成酰胺基团，这些衍生化方法简单快速稳定，消旋化现象少，衍生试剂选 择范围广泛，具有很好的实用性 本文采用正相H P L C 条件对手性物质进行分离在分离手性物质的过程中， 影响分离的主要因素有流动相组成、柱温等本文以正己烷为基本成分的流动 相，分别考察了添加极性剂如异丙醇、乙醇等对分离的影响；还适当添加乙酸 类物质来改善色谱峰形；还通过改变柱温等条件使手性物质在P i r k l e 型C S P 上得到最优分离结合相应的色谱分离热力学函数，对对映体拆分机理进行了 深入地探讨并给出了一些药物对映体分子与手性固定相分子的手性识别模型 本文利用手性对映体光学纯度的定义公式，又利用高效液相色谱中色谱峰 四川大学硕士学位论文 面积与物质的量成正比的原理，实现了高效液相色谱对手性药物光学纯度的测 定通过实验测定不同光学纯度的手性药物，进一步与旋光仪方法的测定比较， 得到最佳测定方法该方法简单、快速、准确，在药物不对称反应的研究及药 物生产的质量监控都具有非常重要的意义 关键词：高效液相色谱法P i r k l e 型C S P 衍生化手性药物光学纯度 四川大学硕士学位论文 E n a n t i o m e r i cP u r i t yD e t e r m i n a t i o no fC h i r a lD r u g sb y C S P sC o m b i n i n gw i t hP r e —C o l u m nD e r i v a t i o n M a j o r ：B i o c h e m i c a lE n g i n e e r i n g P o s t g r a d u a t e ：X UX uS u p e r v i s o r ：P r o f e s s o r F UC h a o H i g hp e r f o r m a n c el i q i u dc h r o m a t o g r a p h y ( H P L C 、i s af a s ta n de f f i c t i v em e t h o do f s e p a r a t i n ge n a n t i o m e r so fc h i r a lm a t e r i a l ．C h i r a ls t a t i o n a r yp h a s e s ( C S P s ) e s p e c i a l l y t h eP i r k l e - t y p eC S P sw e r ef r e q u e n t l yu s e di nt h ec h i r a lH P L Cs e p a r a t i o n ．n e P i r k l e —t y p eC S P sh a v eb e e nu s e dw i d e l yi nd e t e r m i n i n ge n a n t i o m e r t i cp u r i t yo f c h i r a ld r u g sa n di np r e p a r i n ge n a n t i o m e r so ri n t e r m e d i a t e so f c h i r a ld r u g s ． T h eP i r k l e - t y p eC S P sh a v es o m el i m i t a t i o nt oa p p l i c a t i o nb e c a u s eo ft h e i rs p e c i a l s t r u c t u r e s ．t h o u g hm a n ye n a n t i o m e r sc a l lb es e p a r a t e db yt h eC S P s ．1 1 1 ep r i n c i p l eo f p r o - c o l u m nd e r i v a t i o nc o m b i n i n gw i t hs e p a r a t i o no nC S P s w a sa p p l i e di nt h i sp a p e r ． 1 1 1 ec h i r a l d r u gw a sd e r i v e da c c o r d i n gt ot h eC S P s ’c h a r a c t e r i s t i c ．a n dt h e nt h e e n a n t i o m e r s ’d e r i v a t e sw e r es e p a r a t e db yt h eC S P s ．T h e r em a yb em u c hm o r e d i f f e r e n c ei nt h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nt h et w oe n a n t i o m e r s ’d e r i v a t e sa n dt h eC S P s a f t e rt h ed e r i v a t i o n ．1 1 1 ee n a n t i o m e r so fs o m ec h i r a ld r u g ss u c ha sM a n d e l i ca c i d a n da - P h e n y l e t h y l a m i n ec a l lb es e p a r a t e db yt h i sm e t h o dt h o u l g ht h e yc a l l ’tb e o r i g i n a l l yo nt h eC S P s ．T h i sm e t h o do ft h ed e r i v a t i o nW a sc o n v e n i e n t , f a s ta n d e n a n t i o m e r i cs t a b l e ．T h e r eW a sl i t t l er a c e m i z a t i o ni nt h ed e r i v a t i o nw h i c hh a v et h e a m i d ep r o d u c t ．T h e r ec o u l db em a n yr e a g e n t sc h o s e nf o rt h ed e r i v a t i o n ．n l i sm e t h o d o f d e r i v a t i o nW a sv e r yp r a c t i c a l ． N o r m a l —p h a s ec h r o m a t o g r a p h i cm o d e l W a se m p l o y e df o rt h ee n a n t i o n m e d c s e p a r a t i o no fd e r i v a t i v e so nt h eC S P s ．T h ee f f e c t so fc h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n s s u c ha sm o b i l ep h a s e sa n dt e m p e r a t u r et oc h i r a lr e c o g n i t i o no ft h ed e r i v a t i v e sh a d I IT 四川大学硕士学位论文 b e e ni n v e s t i g a t e d ．T h ed e r i v a t i v e sw e ∞p r i m e l yr e s d v e d0 1 ' 1t h eP i r k l e - t y p eC S P si n t h eo p t i m a lc h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n s ．T h ee h i r a lr e c o g n i t i o nm e c h a n i s m sh a v e b e e nd i s c u s s e df u r t h e ra c c o r d i n gt ot h er e l a t i v et h e r m o d y n a m i cp a r a m e t e r s ．T h e c h i r a lr e c o g n i t i o nm o d e l so ft h ee n a n t i o m e r so nC S P sw e r ea l s op r e d i c t e db yt h e c o m p a r i s o nr e s e a r c ho fe n a n t i o s o p a r a t i o nt h e r m o d y n a m i cd a t a ． A c c o r d i n gt ot h ed e f i n i t i o no fo p t i c a lp u r i t ya n dt h ep e a l 【a r e ap r o p o r t i o n a lt ot h e q u a n t i t yo ft h em a t e r i a l ，t h eH P L Cm e t h o df o rd e t e r m i n i n gt h eo p t i c a lp u r i t yo f e n a n t i o m e r sw a se s t a b l i s h e d ．S o m ec h i r a ld r u g sw i t hd i f f e r e n to p t i c a lp u r i f i e sw e i ' e d e t e r m i n e db yt h eH P L Ca n dc o m p a r e dw i t ht h o s eb yp o l a r i m e t e r , an e wc h i r a l H P L Cm e t h o df o rd e t e r m i n i go p t i m a lp u r t i e sw a sf o u n d e d ．T h i。