次普通微生物学实验优秀课件.ppt

实验四 革兰氏染色法一、目的要求 n1 学习革兰氏染色原理，理解着色机理n2 掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色n3 无菌操作技术n4 巩固显微镜油镜的使用方法次普通微生物学实验优秀二、基本原理 p是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的p革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法p革兰氏染色是是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色p其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌次普通微生物学实验优秀革兰氏染色原理：n第一步：结晶紫使菌体着上紫色n第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内n第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应nG+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色nG菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。

次普通微生物学实验优秀次普通微生物学实验优秀1234结晶紫碘液酒精复红次普通微生物学实验优秀三、实验材料n大肠杆菌（24h培养）斜面菌种n枯草杆菌（12h培养）斜面菌种次普通微生物学实验优秀四、方法步骤n1涂片、干燥、固定：同简单染色n2初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗3媒染：滴加碘液染色12min，后用水冲洗，甩尽残余水n4脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度），然后立即用水冲洗n5复染：用蕃红或石炭酸复红覆盖涂片进行复染，蕃红染23min，如果石炭酸复红染1min水洗，晾干n6镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察1次普通微生物学实验优秀 革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌次普通微生物学实验优秀n1、载玻片要洁净无油迹涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄n2、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色五、注意事项 3、染色过程中勿使染色液干涸 4、选用幼龄的细菌次普通微生物学实验优秀实验六 微生物细胞大小测定一、实验目的n学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法n学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小的方法n巩固显微镜油镜的使用方法次普通微生物学实验优秀二、实验原理n测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺进行。

n测微尺可分为目镜测微尺和镜台测微尺n目镜测微尺是特制的圆形玻片，中央有一刻度尺（100等分），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小n镜台测微尺为一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度为1mm(100等分)，每小格长0.01mm(10m) n目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不同而改变，使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的长度，然后用标定好的目镜测微尺进行测量次普通微生物学实验优秀次普通微生物学实验优秀三、 实验材料n枯草杆菌标本片次普通微生物学实验优秀四、实验方法步骤1）用镜台测微尺标定目镜测微尺2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小次普通微生物学实验优秀（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺n放置目尺：取出目镜，旋开接目镜，将目尺放在目镜镜筒的中间隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目镜，并插入镜筒n放置台尺：将台尺放置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上n标定目尺：先用低倍镜观察，找到台尺刻度，转动目镜使目尺与台尺的刻度轴线相平行，移动台尺使目尺与台尺某一区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两重合线间各自所占格数，通过如下公式计算： n数n标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度目尺每小格长度（um）=两对重合刻度线之间台尺所占格数10两对重合刻度线之间目尺所占格数次普通微生物学实验优秀（2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小n取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜观察，后换油镜观测，计量细菌长和宽所占小格数，将测得格数乘以已标定的目尺每小格长，即得菌体实际大小。

n分别选择5个大的和5个小的菌体，并测量其长、宽数值，求出平均值，以正确格式表示细菌大小次普通微生物学实验优秀n将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：na.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去，擦1次nb.用擦镜纸沾少许擦镜液将镜头擦1次nc.再用干净的擦镜纸将镜头擦1次n注意擦镜头时向一个方向擦拭n将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中n 观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内实验完毕后的处理次普通微生物学实验优秀 实验报告：（1）目镜测微尺标定结果记录（2）在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录下次实验：实验七、八、九次普通微生物学实验优秀。