培养基母液配制.docx

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基 浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用 量量取由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量 较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基 配制方便准确配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高MS培养基母液及培养基配方法参考表 2大量成分母液经常将CaCl2 2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀 若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解 后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀. 大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定 容，然后移入磨口瓶中，贴上标 签，置于普通冰箱（4C）贮存微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0卜0.0001mg/l,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的 100倍一般将微量 元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将 KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中配好后，贴上标签，贮存于 4c冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四 乙酸二纳的螯合物称取Na2-EDTA 3.73 g , FeSO4 2H2O 2.78 g,分别溶解（可 加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中转入细口瓶，贴上标签，4c冰箱 中保存氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时， 母液浓度通常为原培养基配方的 50倍（或100）常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸储水溶解，但叶酸 要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸储水定容配制好后，转入细口瓶， 贴上标签，-20C （或4C）冰箱中保存植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5 或 1 mg/L 如配 0.5 mg/l NAA 母液，称 25 mg NAA 溶于50 ml重蒸储水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸储水中IAA要用棕 色瓶暗中贮存，以免光照分解常用植物生长调节物质和维生素特征见表3生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸储水溶 解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸储水定容。

配制好的母液放置在4c普通冰箱中备用这些母液保存时间不宜过长，当出现 沉淀、浑浊及霉菌团时，应重新配制椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质，如KT类似物(9-&D-ribofuranosylzeatin)、玉米素及玉米素核糖花等，有时可与细胞分裂素 相互代替采集到椰子时，应检查其汁液(保证没有变质)，煮沸，滤纸过滤掉 蛋白，高温高压消毒，贮存在-20C下备用有时可直接加入培养基酵母提取 液也一般也现用现配，称量酵母粉后，加热至沸腾 30分钟，过滤去渣四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大 10倍用天平称取，用 蒸储水分别溶解，按顺序逐步 混合后用蒸储水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液到入细口瓶,贴好标签保存于冰箱中配制培养基时，每配 1L培养基取此液100ml表1 MS培养基大量元素母液制备在舁 丁 P药品名称培加基浓炭(mg/L)扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2 - 2H2O44044004MgSO4 7H2O37037005KH2PO41701700汪思：(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如 Ca2+、SO42 —、Mg 2+和H2PO4 一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。

为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸储水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸储水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序特别应将Ca2+、SO42 一、Mg 2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合2)CaCl2 2H2O要在最后单独加入，在溶解 CaCl2 2H2O 时，蒸储水需加热沸腾，除去 水中的CO2 ,以防沉淀另外， CaCl2 - 2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出2、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成微量元素用量较少，特别是CuSO4- 5H2O、CoCl2 6H2O ,因此在配制中分微量I、n配制按照表 2,表3配 方，用电光天平称量，其它同大量元素配制培养基时，每配制1L培养基，取微量I 10ml , 微量 n 0.1ml 表2 MS培养基微量I的配制化合物名称培加基浓良(mg/L)扩大100倍称量(mg)1MnSO4 4H2O22.322302ZnSO4 7H208.68603H3BO36.26204KI0.83835Na2MoO 4 2H2(0.2525表3 MS培养基微量n的配制在舁 丁 p化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大10000倍称量 (mg)1CuSO4 5H2O0.0252502CoCl2 - 6H2O0.025250汪思：使用电子 分析天平 时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。

3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液 这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀配制方法同上，直接用蒸储水加热搅拌溶解，定容至1L配制培养基时，配制 1L取此液10ml表4 MS铁盐母液的配制在舁 丁 P化合物名称培加基浓良(mg/L)扩大100倍称量(mg)1Na2-EDTA37.337302FeSO4 7H2O27.82780汪思：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成 FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色 (约加热20 - 30min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后，再冷藏4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸毗哆素培养基中的有机成分原则上应分别单独配制配制直接用蒸储水溶解，定容至 1L,注意称量时用电子 分析天平配制培养基时，每配 1L培养基取此液5ml。

注息：由于维生素母液营养丰富， 因此贮藏时极易染菌被菌类污染的维生素母液， 有效浓度降低, 并且易给后期培养造成伤害，不宜再用避免此现象发生的方法是 ：配制母液时用无菌重蒸 储水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间表5 MS培养基有机物质母液的制备在舁 丁 P化合物名称土方加基浓良(mg/L)扩大200倍称量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003盐酸硫胺素 (VB1)0.51004盐酸叱哆素 (VB6)0.51005烟酸0.51005、激素母液配制植物组织培养中使用的 激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：(1)配制生长素类，例如 IAA、NAA、2.4-D、6BA,应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸储水定容到一定的浓度2)细胞分裂素，例如 KT,应先用少量95%乙醇或无水乙醇加 3~4滴1mol/L的盐酸溶 解，再用蒸储水定容3)配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容注息：所有的母液都应保存在 0~4 C冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用植物组织培养的必要条件录入时间：2011-7-19 13:59:05来源：生技网(一)温度: 对大多数植物组织 20〜28c即可满足生长所需，其中 26〜27c最适合。

二)光：组织培养通常在散射光线下进行光的影响可导致不同的结果有些植物组织在暗处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，但由愈伤组织分化成器官时，则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根有些次生物质的形成，光是决定三因素三)渗透压：渗透压对植物组织的生长和分化很有关系在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压通常 1〜2个大气压可促进植物组织生长，2个大气压以上时，出现生长障碍，6个大气压时植物组织即无法生存O（四）酸碱度：一般植物组织生长的最适宜 pH为5〜6. 5在培养过程中pH可发生变化，加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用五）通气： 悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件小量悬浮培养时巨常转动或振荡，可起 通气和搅拌作用大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。