8种市售小聚糖酶产品对饲料原料体外酶解的效果比较.docx

8种市售小聚糖酶产品对饲料原料体外酶解的效果比较 崔细鹏 王敏摘要：为了评价几种单一酶、复合酶对饲料原料的水解效果，进行了体外酶解试验共采用3种单一酶制剂（木聚糖酶）：酶制剂1号、2、3号;5种复合酶制剂：酶制剂3、4、5、6、7、8号预试验显示上述酶有基本相似的最适水解反应参数：料水比为1：10、pH5.5、温度37℃和时间5小时在此参数下，研究添加木聚糖添加量为10U/g饲料原料浓度梯度进行体外酶解实验结果显示：以还原糖增长率为指标，不同来源的酶，酶解效果差异显著关键词：体外酶解;复合酶：酶解效果在小麦、玉米、豆粕、菜粕等植物性饲料原料中存在着大量的非淀粉多糖（NSP），特別是阿拉伯木聚糖，是重要的抗营养因子对动物消化吸收存在一定的抗营养作用众多研究表明，添加木聚糖酶能降解饲粮中的木聚糖、降低食糜黏度、减少微生物的定植、维持肠道正常结构近年来对木聚糖酶的研究发现，它应用于饲料中提高了饲料营养价值，突破了饲料资源开发利用的局限，增强了动物的生产与抗病能力，减少了动物排泄物造成的污染，作为一种环保添加剂，在发展环保型畜牧业中具有十分重要的意义与价值目前在酶制剂产品的质量分析方面还没有统一的方法，主要是测定酶的活力。

由于酶活测定方法多样且不统一，测定结果很难进行相互间的比较作为饲用酶制剂，其应用价值受多方面因素的影响，仅靠酶活指标还不能评价酶的质量在动物日粮中按照设计比例添加木聚糖酶，建立体外酶解评价体系，可以为饲料酶的使用提供试验依据1 材料与方法1.1试剂及仪器（1）精密pH计（0.01）、分析天平（0.01g）、离心机、分光光度计、恒温振荡水浴锅等2）pH5.5的0.1mol/l的乙酸-乙酸钠缓冲液3）10%三氯乙酸溶液1.2底物制备实验饲料原料底物包括小麦、豆粕、玉米、米糠粕、黄粉、棉粕、菜粕和麸皮，干燥粉碎过24目1.3酶样品来源本试验采用的木聚糖酶产品来自国内外不同厂家的木聚糖酶产品表1是这些酶的基本信息1.4试验步骤及测定方法1.4.1实验设计了对照组（不加酶）和加酶组两个处理对照组：称取10.00g底物饲料，按料：水=1：10.（水指pH5.5的0.1mol/l的乙酸-乙酸钠缓冲液）与酶解样放在一起，酶解开始后，每隔1小时振荡一次，速度120r/min酶解结束后，加入5ml10%三氯乙酸溶液，取出酶解样品适量4000r/min离心10min，收集上清夜，待测加酶组：称取10.00g底物饲料，最终添加木聚糖酶：10U/g原料、50U/g原料、100U/g原料;料：水=1：10（水指pH5.5的0.1mol/l的乙酸-乙酸钠缓冲液）。

酶解温度：37℃，共酶解5个小时，酶解开始后，每隔1小时振荡一次，一次10分钟，速度120r/min酶解结束后，加入5ml 10%三氯乙酸溶液.取出酶解样品适量4000r/min离心10min，收集上清夜，待测1.4.2测定指标酶解后的样品测定可溶性还原糖含量.采用DNS法测定标准曲线制备：配制1mg/ml的标准葡萄糖液，吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，补水至2ml，再加入3，5—二硝基水杨酸溶液1.5ml，沸水显色5min，然后用流水迅速冷却，用水定容至20ml，用振荡器摇匀以蒸馏水空白调零，在540nm处比色以OD值为横坐标，还原糖浓度（mg/ml）为总坐标，绘制标准曲线样品测定：加入吸取适量的样液，置于25ml容量瓶中，补水补至2ml，再加入3，5—二硝基水杨酸溶液1.5ml，沸水显色5min，然后用流水迅速冷却，用水定容至20ml，用振荡器摇匀以蒸馏水调零，在540nm处比色，参照葡萄糖标准曲线求出还原糖的含量还原糖增长率（%）=（加酶组-对照组）/对照组*1002结果与讨论2.1 8种木聚糖酶产品对玉米的体外酶解还原糖增长率（%）见表28种酶制剂产品对玉米的还原糖增长率分别为1号（188.5%）、2号（25.50/0）、3号（24.5%）、4号（10.7%）、5号（17.1%）、6号（98.1%）、7号（6.9%）、8号（27.8%）。

其中1号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了188.5%：酶解效果较好的是6号，还原糖增长率分别为98.1%：酶解效果最差的是7号仅为6.90%2.2 8种木聚糖酶产品对小麦的体外酶解还原糖增长率（%）见表38种酶制剂产品对小麦的还原糖增长率分别为1号（254.8%）、2号（101.7%）、3号（86.2%）、4号（32.1%）、5号（64.3%）、6号（118.5%）、7号（13.09%）、8号（l31.9%）其中1号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了254.8%;酶解效果较好的是2、6、8号，还原糖增长率分别为101.7% /118.5%、131.9%：酶解效果最差的是7号仅为13.09%2.3 8种木聚糖酶产品对麸皮的体外酶解还原糖增长率（%）见表48种酶制剂产品对麸皮的还原糖增长率分别为1号（75.7%）、2号（55.8%）、3号（75.7%）、4号（33.1%）、5号（49.4%）、6号（83.6%）、7号（24.6%）、8号（40.7%）其中1、3、6号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了55.8%、49.4%、40.7%;酶解效果较好的是2、5、8号，还原糖增长率分别为101.7%/118.5%、131.9%：酶解效果最差的是7号仅为24.6%。

2.4 8种木聚糖酶产品对黄粉的体外酶解还原糖增长率（%）见表58种酶制剂产品对黄粉的还原糖增长率从上表可知：其中1、6号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了56.4%、51.2%：酶解效果较好的是3号，还原糖增长率分别为47.1%：酶解效果最差的是7号仅为11.4%2.5 8种木聚糖酶产品对米糠粕的体外酶解还原糖增长率（%）见表68種酶制剂产品对米糠粕的还原糖增长率从上表可知：其中1号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了10.3%;酶解效果较好的是5、6号，还原糖增长率分别为6.01%、6.51%：酶解效果最差的是7号，基本无效果2.6 8种木聚糖酶产品对豆粕的体外酶解还原糖增长率（%）见表78种酶制剂产品对豆粕的还原糖增长率从上表可知：其中8号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了219.0%;酶解效果较好的是1、2、6号，还原糖增长率分别为52.7%、45.6%、48.2%;酶解效果最差的是7号，基本无效果2.7 8种木聚糖酶产品对菜粕的体外酶解还原糖增长率（%）见表88种酶制剂产品对菜粕的还原糖增长率从上表可知：其中8号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了395.1%：酶解效果较好的是1号，还原糖增长率分别为91.3%;酶解效果最差的是4、7号，还原糖增长率为5.00%。

2.8 8种木聚糖酶产品对棉粕的体外酶解还原糖增长率（%）见表98种酶制剂产品对棉粕的还原糖增长率从上表可知：其中3、8号的酶解效果最好，还原糖增长率达到了120.4%、104.2%：酶解效果较好的是2号，还原糖增长率分别为82.0%：酶解效果最差的是4号，基本无效果3 结果分析与讨论3.1体外法是目前许多企业反映酶制剂作用效果的主要方法，该方法研究省时，省力，省钱，可以快速达到试验目的该方法除了还原糖的测定以外还包括表观消化率，粘度的测定虽然与体内的条件差距较大，但是可作为快速评价酶制剂好坏的一种方法3.2本试验中涉及到8种酶，其中有4种复合酶（2、4、5、6号），3种单一的木聚糖酶（1、3号）1个液体发酵木聚糖酶（7号）和1个固体发酵木聚糖酶（8号）复合酶酶种可能包括有：木聚糖酶、纤维素酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、果胶酶等等：酶来源可能也不同：有毕赤酵母发酵、细菌性木聚糖酶、曲霉固体发酵所得木聚糖酶等等1号木聚糖酶对饲料原料酶解效果明显（除了棉粕），3号对棉粕的酶解还原糖增长量达到了120.4%，可能是该酶对棉粕中的木聚糖这种底物具有很强的专一性，能与该酶中的催化域很好的结合。

8号对蛋白原料酶解还原糖增长率特别显著原因可能是因为不同来源的酶由于其空间结构，催化结构域等不同，因此会对不同饲料原料的酶解产生不同的效果3.3 DNS体外酶解法是一种快速有效简捷的测定方法，其中有些因素会干扰试验的结果本试验中酶的稀释浓度对试验结果影响较大当D540>0.5时，得到的降解率结果偏低：当OD540<0.2时，得到的降解率结果偏高：当0.2参考文献（略）湖南饲料2018年4期湖南饲料的其它文章价值引领新跨越 3C开创新未来2018年湖南省饲料工业协会会长、副会长单位会议在长沙召开猪市宽松局面并未改变 猪价短期震荡微调为主环保新形势，行业新发展稻渔综合种养生态系统中生物多样性，营养与食物植物提取物在猪生产中的应用 -全文完-。