临床微生物检验：不动杆菌和伯克霍尔德菌.ppt

不动杆菌属不动杆菌属AcinetobacterAcinetobacter 分类分类 不动杆菌属属于不动杆菌属属于不动杆菌属属于不动杆菌属属于莫拉菌科莫拉菌科莫拉菌科莫拉菌科，是一群，是一群，是一群，是一群不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类不发酵糖类、、、、氧化酶氧化酶氧化酶氧化酶（（（（- -）、动力（）、动力（）、动力（）、动力（- -）、硝酸盐还原（）、硝酸盐还原（）、硝酸盐还原（）、硝酸盐还原（- -））））的革兰的革兰的革兰的革兰阴性球杆菌阴性球杆菌阴性球杆菌阴性球杆菌至少可分至少可分至少可分至少可分2525个基因组，其中个基因组，其中个基因组，其中个基因组，其中4040多个种已被命名多个种已被命名多个种已被命名多个种已被命名 醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌A.calcoaceticusA.calcoaceticus 洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌A.lwoffii A.lwoffii 溶血不动杆菌溶血不动杆菌溶血不动杆菌溶血不动杆菌A.haemolyticus A.haemolyticus 临床常见临床常见临床常见临床常见 鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌A.baumannii A.baumannii 6 6 个基因种个基因种个基因种个基因种 琼氏不动杆菌琼氏不动杆菌琼氏不动杆菌琼氏不动杆菌A.juniiA.junii 约氏不动杆菌约氏不动杆菌约氏不动杆菌约氏不动杆菌A.johnsoniiA.johnsonii 不动杆菌分组不动杆菌分组 临床意义临床意义 1. 1. 广泛分布于自然界和广泛分布于自然界和广泛分布于自然界和广泛分布于自然界和医院环境医院环境医院环境医院环境中，中，中，中， 可存在正常人皮肤、口咽部可存在正常人皮肤、口咽部可存在正常人皮肤、口咽部可存在正常人皮肤、口咽部 2. 2. 细菌粘附力极强，易在各类医用材料上粘附，细菌粘附力极强，易在各类医用材料上粘附，细菌粘附力极强，易在各类医用材料上粘附，细菌粘附力极强，易在各类医用材料上粘附， 贮菌源贮菌源贮菌源贮菌源 3.3. 非发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，非发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，非发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，非发酵菌的感染中仅次于假单胞菌， 最常分离出鲍曼不动杆菌最常分离出鲍曼不动杆菌最常分离出鲍曼不动杆菌最常分离出鲍曼不动杆菌 4. 4. 可引起肺部感染、伤口感染、烧伤创面感染、可引起肺部感染、伤口感染、烧伤创面感染、可引起肺部感染、伤口感染、烧伤创面感染、可引起肺部感染、伤口感染、烧伤创面感染、菌血症、脑膜炎等疾病菌血症、脑膜炎等疾病菌血症、脑膜炎等疾病菌血症、脑膜炎等疾病 是院内感染常见病原菌是院内感染常见病原菌是院内感染常见病原菌是院内感染常见病原菌 致病条件？致病条件？致病条件？致病条件？感染途径：感染途径：感染途径：感染途径：ØØ口咽部定植的非发酵菌可成为内源性感染来源口咽部定植的非发酵菌可成为内源性感染来源口咽部定植的非发酵菌可成为内源性感染来源口咽部定植的非发酵菌可成为内源性感染来源ØØ外部来源：侵入性污染器械、消毒剂污染、环境外部来源：侵入性污染器械、消毒剂污染、环境外部来源：侵入性污染器械、消毒剂污染、环境外部来源：侵入性污染器械、消毒剂污染、环境及医务人员手及医务人员手及医务人员手及医务人员手感染条件感染条件感染条件感染条件ØØ机体屏障结构遭破坏、抵抗力低机体屏障结构遭破坏、抵抗力低机体屏障结构遭破坏、抵抗力低机体屏障结构遭破坏、抵抗力低ØØ各种医疗器械的使用给非发酵菌提供易生环境各种医疗器械的使用给非发酵菌提供易生环境各种医疗器械的使用给非发酵菌提供易生环境各种医疗器械的使用给非发酵菌提供易生环境ØØ抗菌药物使用不规范。

抗菌药物使用不规范抗菌药物使用不规范抗菌药物使用不规范非发酵菌感染途径和条件非发酵菌感染途径和条件Ø不动杆菌耐受肥皂，是医务工作者不动杆菌耐受肥皂，是医务工作者手上最常分离的革兰阴性菌手上最常分离的革兰阴性菌Ø是院内感染是院内感染常见病原菌常见病原菌常见病原菌常见病原菌n2010年年9月日本帝京大学医月日本帝京大学医学部附属医院学部附属医院 46人感染超级人感染超级细菌细菌---多重耐药多重耐药鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌 医院没及时报告，没能防止医院没及时报告，没能防止感染的不断扩大，警方介入感染的不断扩大，警方介入调查调查n2010年，中国福建发现了年，中国福建发现了1例携带有例携带有NDM-1耐药基因鲍耐药基因鲍曼不动杆菌曼不动杆菌不动杆菌院内暴发流行事件不动杆菌院内暴发流行事件有效防控不动杆菌感染有效防控不动杆菌感染u加强抗菌药物临床管理加强抗菌药物临床管理u严格遵守无菌操作和感染控制规范严格遵守无菌操作和感染控制规范 u阻断鲍曼不动杆菌的传播途径阻断鲍曼不动杆菌的传播途径 l手卫生手卫生l接触隔离接触隔离l环境消毒环境消毒l筛查及去定植筛查及去定植2011年年《《中国鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识中国鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识》》ØØ形态结构形态结构形态结构形态结构 G-b G-b 菌体大小菌体大小菌体大小菌体大小2.0 ×1.2μm2.0 ×1.2μm 多为球杆状多为球杆状多为球杆状多为球杆状，成对排列或单，成对排列或单，成对排列或单，成对排列或单 个存在，个存在，个存在，个存在，菌形和排列类似卡菌形和排列类似卡菌形和排列类似卡菌形和排列类似卡奈瑟菌奈瑟菌奈瑟菌奈瑟菌。

无鞭毛无鞭毛无鞭毛无鞭毛 无芽胞无芽胞无芽胞无芽胞 无荚膜无荚膜无荚膜无荚膜( (粘液型除外粘液型除外粘液型除外粘液型除外) ) 微生物学特性微生物学特性不动杆菌属细菌革兰染色不动杆菌属细菌革兰染色(×1000倍倍)革兰阴性革兰阴性革兰阴性革兰阴性球杆状球杆状球杆状球杆状，，，，成对排列成对排列成对排列成对排列或单个存或单个存或单个存或单个存在 微生物学特性微生物学特性形态与奈形态与奈瑟菌相似瑟菌相似痰涂片革兰染色，吞噬细胞中可见被吞噬的鲍曼不动杆菌痰涂片革兰染色，吞噬细胞中可见被吞噬的鲍曼不动杆菌微生物学特性微生物学特性ØØ培养特性培养特性 专性需氧菌专性需氧菌 营养要求不高营养要求不高 最适生长温度最适生长温度35℃℃ 普通平板、麦康凯平板上生长普通平板、麦康凯平板上生长 Ø分离培养分离培养 血平板血平板35-37℃℃ 18-24h 菌落圆形菌落圆形菌落圆形菌落圆形 灰白色灰白色灰白色灰白色 光滑光滑光滑光滑 湿润湿润湿润湿润 边缘整齐边缘整齐边缘整齐边缘整齐 直径直径直径直径2-3mm2-3mm 多不溶血，多不溶血，溶血不动杆菌呈溶血不动杆菌呈β溶血溶血 洛菲不动杆菌菌落小直径洛菲不动杆菌菌落小直径1-1.5mm 微生物学特性微生物学特性鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌(血平血平)菌落圆形菌落圆形菌落圆形菌落圆形灰白色灰白色灰白色灰白色 光滑光滑光滑光滑 湿润湿润湿润湿润 边缘整齐边缘整齐边缘整齐边缘整齐菌落圆形菌落圆形菌落圆形菌落圆形灰白色灰白色灰白色灰白色 光滑光滑光滑光滑 湿润湿润湿润湿润 边缘整齐边缘整齐边缘整齐边缘整齐鲍曼不动杆鲍曼不动杆菌在菌在MAC平平板板上生长慢，上生长慢，24h菌落呈菌落呈无色或红色无色或红色；；48h呈深红呈深红色菌落色菌落鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌(麦康凯平板麦康凯平板)洛菲不动杆菌菌落较小、灰白色、 圆形菌落较菌落较小，呈小，呈浅红色浅红色洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌(麦康凯平板麦康凯平板)ØØ生化特点生化特点 形态：形态：G-球杆菌球杆菌 氧化酶－氧化酶－ 动力－动力－ 硝酸盐还原试验－硝酸盐还原试验－ 不发酵糖类不发酵糖类 微生物学特性微生物学特性培养培养24小时小时（上述三者都阴性在（上述三者都阴性在（上述三者都阴性在（上述三者都阴性在G-bG-bG-bG-b中非常罕见）中非常罕见）中非常罕见）中非常罕见）MicrobiologyØØNonfermentativeNonfermentativeØØStrictly aerobicStrictly aerobicØØOxidase negativeOxidase negativeØØCatalase positiveCatalase positiveØØNitrate negativeNitrate negativeØØNonmotileNonmotileØØGram negative coccobacillusGram negative coccobacillus Sometimes difficult to decolorize Sometimes difficult to decolorizeØØFrequently arranged in pairsFrequently arranged in pairs痰液、脓液、尿液痰液、脓液、尿液 脑脊液、血液脑脊液、血液直接涂片直接涂片 分离培养分离培养 增菌培养增菌培养革兰染色革兰染色 血平板血平板 麦康凯平板麦康凯平板 35-37 ℃℃℃℃18-24h18-24h 挑可疑菌落挑可疑菌落 最后鉴定最后鉴定 初步鉴定初步鉴定 全面生化反应全面生化反应 G-球杆菌、氧化酶球杆菌、氧化酶- 硝酸盐还原硝酸盐还原- 动力动力- 不动杆菌的检验程序不动杆菌的检验程序微生物检验微生物检验ØØ标本采集：标本采集：标本采集：标本采集： 尿、尿、尿、尿、痰痰痰痰、脓汁等标本、脓汁等标本、脓汁等标本、脓汁等标本 菌血症和脑膜炎可采集血液、脑脊液菌血症和脑膜炎可采集血液、脑脊液菌血症和脑膜炎可采集血液、脑脊液菌血症和脑膜炎可采集血液、脑脊液ØØ直接镜检：直接镜检：直接镜检：直接镜检： 涂片革兰染色见涂片革兰染色见涂片革兰染色见涂片革兰染色见G-G-球杆菌，似奈瑟菌球杆菌，似奈瑟菌球杆菌，似奈瑟菌球杆菌，似奈瑟菌 革兰阴性球杆菌革兰阴性球杆菌革兰阴性球杆菌革兰阴性球杆菌不动杆菌属与奈瑟菌属比较不动杆菌属与奈瑟菌属比较不动杆菌属与奈瑟菌属比较不动杆菌属与奈瑟菌属比较 不动杆菌不动杆菌 奈瑟菌属奈瑟菌属球状球状 - +球杆状球杆状 + -氧化酶氧化酶 - + 动力动力 - -硝酸盐还原硝酸盐还原 - -/+葡萄糖葡萄糖O/F O/- F/-触酶触酶 + +麦康凯生长麦康凯生长 + -Ø耐药性：耐药性： 可采用可采用K-B法、稀释法药敏试验法、稀释法药敏试验 选药与假单胞菌抗生素的分组相选药与假单胞菌抗生素的分组相同同 多重耐药菌株逐渐增多多重耐药菌株逐渐增多 对多种抗生素天然耐药，抗生对多种抗生素天然耐药，抗生素耐药是在治疗不动杆菌感染素耐药是在治疗不动杆菌感染中遇到的主要问题。

中遇到的主要问题 微生物检验微生物检验2016年年CLSI关于不动杆菌药敏选药及判断标准关于不动杆菌药敏选药及判断标准2016年年CLSI关于不动杆菌药敏选药及判断标准关于不动杆菌药敏选药及判断标准多重耐药菌多重耐药菌Multidrug-resistance Multidrug-resistance （（MDRMDR）） 通用定义：对三种以上不同类别的通用定义：对三种以上不同类别的抗菌药物耐药的细菌抗菌药物耐药的细菌泛耐药不动杆菌泛耐药不动杆菌 （（pandrug-resisitance, PDR) 多重耐药菌（多重耐药菌（MDRMDR）） 不动杆菌属菌种的鉴别不动杆菌属菌种的鉴别不动杆菌属菌种的鉴别不动杆菌属菌种的鉴别 鲍曼鲍曼 醋酸钙醋酸钙 溶血溶血 洛菲洛菲 琼氏琼氏 约氏约氏生长：生长：37℃℃ + + + + + ++ + + + + +41℃℃ + - - - + - - - + + - - 溶血溶血 - - - - + + - - - - - -液化明胶液化明胶 - - + - - -- - + - - -葡萄糖葡萄糖 + + +/- - - -+ + +/- - - -木糖木糖 + + - - +/- - - - +/- - - -乳糖乳糖 + + + + - - + + + + + +精双精双 + + + + + + - - + -/+ + -/+鸟氨酸鸟氨酸 + + - - - - + + - - - - 丙二酸盐丙二酸盐 + + - - - -/++ + - - - -/+枸椽酸盐枸椽酸盐 + + + - -/+ ++ + + - -/+ + 相类似菌的比较相类似菌的比较 醋酸钙醋酸钙 洛菲洛菲 铜绿铜绿 粪产碱杆菌粪产碱杆菌氧化酶氧化酶 - - + +动力动力 - - +/- +硝酸盐还原硝酸盐还原 - - + -/ +葡萄糖葡萄糖 + - + -木糖木糖 + - + -乳糖乳糖 + + - -麦芽糖麦芽糖 + - - -精双精双 - - + -枸椽酸盐利用枸椽酸盐利用 + - + + 伯克霍尔德菌属（Burkholderia）分类分类ØØ属于伯克霍尔德菌科属于伯克霍尔德菌科ØØ临床常见的有临床常见的有 洋葱伯克霍尔德菌（洋葱伯克霍尔德菌（B. cepacia) 唐菖蒲伯克霍尔德菌（唐菖蒲伯克霍尔德菌（B. gladioli) 鼻疽伯克霍尔德菌（鼻疽伯克霍尔德菌（B. mallei) 类鼻疽伯克霍尔德菌（类鼻疽伯克霍尔德菌（B. pseudomallei)临床意义临床意义ØØ广泛分布于自然界水、土壤和植物中广泛分布于自然界水、土壤和植物中ØØ条件致病（条件致病（洋葱伯克霍尔德菌最常见洋葱伯克霍尔德菌最常见））ØØ可致：菌血症、尿路感染、化脓性关节可致：菌血症、尿路感染、化脓性关节炎、脑膜炎、呼吸道感染炎、脑膜炎、呼吸道感染ØØ鼻疽和类鼻疽伯克霍尔德菌鼻疽和类鼻疽伯克霍尔德菌是潜在的生是潜在的生物恐怖性细菌（物恐怖性细菌（吞噬细胞内可存活吞噬细胞内可存活）） 慢性感染似结核慢性感染似结核 皮肤粘膜伤口和呼吸道感染皮肤粘膜伤口和呼吸道感染 内脏脓肿、菌血症内脏脓肿、菌血症类鼻疽病的全球流行地理分布类鼻疽病的全球流行地理分布北纬北纬20°的热带和亚热带地区的热带和亚热带地区类鼻疽病的伤口接触传播类鼻疽病的伤口接触传播类鼻疽病的呼吸道接触传播类鼻疽病的呼吸道接触传播生物学特性生物学特性ØØ形态染色：形态染色：革兰阴性杆菌，无芽孢和荚膜，动力（+）ØØ培养特点：培养特点：洋葱伯克霍尔德菌营养要求不高，最适生长温度30—37℃，血平板菌落中等大小、湿润、凸起、不透明、多产黄色色素。

类鼻疽伯克霍尔德菌的镜下形态类鼻疽伯克霍尔德菌的镜下形态（（革兰阴性，略呈卵圆形杆菌、两端浓染、中间着革兰阴性，略呈卵圆形杆菌、两端浓染、中间着色较淡、无芽孢、无荚膜、有鞭毛色较淡、无芽孢、无荚膜、有鞭毛））血平板血平板上洋葱上洋葱伯克霍伯克霍尔德菌尔德菌落落血平板上洋葱伯克霍尔德菌类鼻疽伯克霍尔德菌菌落类鼻疽伯克霍尔德菌菌落（（ 24h后观察血平板可形成细小、光滑、湿润、透明的小菌落；后观察血平板可形成细小、光滑、湿润、透明的小菌落；48h后菌落逐渐增大，后菌落逐渐增大，形成不透明的银灰色菌落，同时有狭窄的形成不透明的银灰色菌落，同时有狭窄的β溶血环，溶血环，72h后菌落边缘逐渐出现不规则的后菌落边缘逐渐出现不规则的皱褶，呈蜂窝状或同心圆状皱褶，呈蜂窝状或同心圆状））微生物学检验微生物学检验ØØ标本采集标本采集：：ØØ主要鉴定特征主要鉴定特征：G- 杆菌，氧化酶（+）、触酶（+），OF为O，硝酸盐还原（+）ØØ药敏试验药物选择药敏试验药物选择： 洋葱伯克霍尔德菌固有耐药抗生素（氨苄西林、哌拉西林、替卡西林、上述抗生素+含酶抑制剂的复合抗生素、头孢噻肟（曲松）、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、厄他培南、多粘菌素、氨基糖苷类、四环素、氯霉素、磷霉素、复方SMZ等） K-B法药敏选药：复方SMZ、头孢他啶、美诺培南和米诺环素。

2016年洋葱伯克霍尔德菌药敏试验选药及结果判断年洋葱伯克霍尔德菌药敏试验选药及结果判断1 1、关于不动杆菌错误的是、关于不动杆菌错误的是? ? A A 氧化酶＋氧化酶＋ B B 硝酸盐还原－硝酸盐还原－ C C 革兰阴性杆菌，形态多为球杆状革兰阴性杆菌，形态多为球杆状 D D 无动力无动力 E E 专性需氧专性需氧2 2、嗜麦芽窄食单胞菌与不动杆菌的相同点是、嗜麦芽窄食单胞菌与不动杆菌的相同点是 A A 有鞭毛有鞭毛 B B 氧化酶阴性氧化酶阴性 C DNA C DNA酶阳性酶阳性 D D 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 E E 不氧化糖类不氧化糖类3 3、嗜麦芽窄食单胞菌的生化反应是、嗜麦芽窄食单胞菌的生化反应是 A A 氧化酶试验阳性，缓慢氧化葡萄糖，氧化酶试验阳性，缓慢氧化葡萄糖，DNADNA酶阳性酶阳性 B B 氧化酶试验阳性，水解七叶苷，液化明胶氧化酶试验阳性，水解七叶苷，液化明胶 C C 氧化酶试验阴性，缓慢氧化葡萄糖，氧化酶试验阴性，缓慢氧化葡萄糖，DNADNA酶阳性酶阳性 D D 氧化酶试验阴性，缓慢氧化葡萄糖，产生吲哚氧化酶试验阴性，缓慢氧化葡萄糖，产生吲哚 E E 氧化酶试验阳性，产生吲哚，氧化酶试验阳性，产生吲哚，DNADNA酶阳性酶阳性思考题思考题4 4、不动杆菌的生物学特征中、不动杆菌的生物学特征中““三阴三阴””是指是指 A DNAA DNA酶阴性，氧化酶试验阴性，动力阴性酶阴性，氧化酶试验阴性，动力阴性 B B 氧化酶试验阴性．动力阴性，硝酸盐还原试验阴性氧化酶试验阴性．动力阴性，硝酸盐还原试验阴性 C C 动力阴性，硝酸盐还原试验阴性，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性，DNADNA酶阴性酶阴性 D D 氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，DNADNA酶阴性酶阴性 E E 氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，革兰阴性杆菌氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，革兰阴性杆菌5 5、产碱杆菌的生化反应特征是、产碱杆菌的生化反应特征是 A A 分解葡萄糖分解葡萄糖 B B 分解乳糖分解乳糖 C C 分解麦芽糖分解麦芽糖 D D 分解蔗糖分解蔗糖 E E 一般不分解糖类一般不分解糖类 6 6、鲍曼不动杆菌的培养特性有、鲍曼不动杆菌的培养特性有 A A 在血平板上产生清晰的在血平板上产生清晰的β-β-溶血环溶血环 B 42 B 42 ℃生长生长 C C 在血平板上菌落较小在血平板上菌落较小 D D 产生色素产生色素 E E 营养要求高营养要求高ØØ思考题思考题 某一种细菌产黄色菌落，氧化酶－，葡萄某一种细菌产黄色菌落，氧化酶－，葡萄糖氧化分解缓慢，麦芽糖＋，糖氧化分解缓慢，麦芽糖＋，DNA＋，对＋，对临床常用的临床常用的β－内酰胺类（包括碳青霉烯－内酰胺类（包括碳青霉烯类）耐药，请推测该菌是何种菌？并写出类）耐药，请推测该菌是何种菌？并写出其生物学特性和耐药的原因。

其生物学特性和耐药的原因ØØ不动杆菌与产碱杆菌的有何区别？不动杆菌与产碱杆菌的有何区别？ØØ产碱杆菌与产碱假单胞菌有何区别？产碱杆菌与产碱假单胞菌有何区别？ØØ嗜麦芽、不动杆菌及产碱杆菌的主要微嗜麦芽、不动杆菌及产碱杆菌的主要微生物学特性？生物学特性？ØØ非发酵菌中潜在的生物恐怖菌是什么？非发酵菌中潜在的生物恐怖菌是什么？ØØ我们已学过的非发酵菌中血平板上菌落我们已学过的非发酵菌中血平板上菌落能产生明显黄色色素的有哪些？能产生明显黄色色素的有哪些？思考题思考题。