姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜病理的影响医学论文.doc

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜病理的影响_医学论文 【摘要】 目的 观察大鼠佐剂性关节炎(AA)模型滑膜组织苏木精-伊红(H-E)染色变化，探讨姜黄素对AA滑膜组织病理的影响方法 将SD大鼠用弗氏完全佐剂(CFA)造模后，分为3组（每组n=10）：姜黄素用药组、模型组、正常组，姜黄素组每日姜黄素50 mg·kg-1·d-1（溶于10%的二甲基亚砜1 ml）腹腔注射，模型组等量溶剂腹腔注射，正常饲养；7和14天分别测量足趾肿胀度和关节肿胀度；15天后将大鼠处死，取滑膜组织、固定、包埋、切片、染色、镜检，对滑膜组织病理学的影响采用评分检测结果 关节肿胀度比较造模后7天模型组和姜黄素组差异无统计学意义，14天两组间差异有统计学意义(P<0.05)；H-E染色后光镜下滑膜病理评分比较：姜黄素组较模型组低且差异有统计学意义(P<0.05)结论 姜黄素可以减轻佐剂关节炎大鼠炎症反应，消除肿胀；减少滑膜组织炎性细胞浸润 【关键词】 姜黄素 佐剂关节炎 关节肿胀 病理 实验研究 Abstract: Objective To explore the effects of curcumin on the pathological changes in synovium of adjuvant arthritis (AA) rats. Methods SD rats were divided into three groups (n=10 each)： normal rat control group; AA model control group (induced by giving Freund′s complete adjuvant hypo into the left hind toe); and treatment group (with curcumin 50 mg·kg-1 ip qd administered to the model rats from d9 after AA). The degree of swelling of the toe and knee joint was measured on d7 and d14. The rats were killed on d15 to remove the synovium for histopathologic study and scoring. Results No obvious differences in swelling were found between the model group and the treatment group on d7, but the differences became significant on d14 (59.82 vs. 30.4, P<0.05). The pathological scores for inflammatory cell infiltration and macrophage infiltration were also lower in the treatment group (P<0.05). Conclusion The effects of curcumin on AA rats include: decreasing manifestations of arthritis, alleviating joint swelling and reducing inflammatory infiltration of synovial tissue. Key words: curcumin; adjuvant arthritis; arthrocele; pathomorphology; empirical study 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis， RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的，以多对称性关节炎为主要临床表现的异质性、系统性的慢性自身免疫功能障碍性疾病。

该病基本病理特征为淋巴细胞、粒细胞、单核巨噬细胞等炎性细胞的浸润，关节滑膜增生，关节软骨和骨组织的破坏近年来研究表明姜黄素(curcumin)对关节炎、风湿痛等与免疫有关疾病有较为显著的疗效，提示其可能具有抗炎及免疫调节作用，而作用机制尚不清楚笔者在以前工作的基础上，以佐剂性关节炎(adjuvant arthritis， AA)大鼠为模型，对姜黄素的抗炎及免疫作用进行了研究，报道如下 1 材料和方法 1.1 实验动物 SD大鼠30只，2～3月龄，平均体重(150±20) g，由南京军区南京总医院实验动物中心提供动物许可证号：SYXK（国）2002-045饲养条件：温度18～26℃，相对湿度65%～75% 1.2 主要试剂及药品 姜黄素（500 mg/2支，Sigma公司），弗氏完全佐剂(批号047K8710，Sigma公司)二甲基亚砜（Sunshine公司），YLS-7A足趾容积测量仪(山东省医学科学院设备站) 1.3 给药剂量与方法 姜黄素组每日姜黄素50 mg·kg-1·d-1（溶于10%的二甲基亚砜1 ml）腹腔注射，正常组和模型组等量生理盐水、溶剂腹腔注射，各组均于造模后第9天给药，正常饲养，自由饮水。

1.4 实验动物模型的制备 30只大鼠适应性喂养5天，随机分3组：正常组、模型组、姜黄素组，每组10只模型组、姜黄素组予弗氏完全佐剂造模；初次免疫9天后参照关节炎指数评分标准对造模效果进行评估，造模方法参照文献［1］：在无菌条件下用弗氏完全佐剂(Freund′s Complete Adjuvan， FCA)1 ml，左后足趾皮下注射 1.5 取材方法 大鼠称重，腹腔注射10%氯胺酮 0.1 ml/100 g麻醉，仰位固定，沿左侧后腿膝关节正中纵行切开皮肤，直至暴露出以膝关节为中心约3 cm×3 cm的区域，沿膑骨上沿约0.3～0.4 cm处向下切割直至膑骨，再分别沿膑骨两侧向下分离至胫骨，此时即打开了膝关节腔，可见由膑骨下极向下延续有一层平滑光亮呈浅淡黄色的滑膜组织用眼科直镊钝性分离关节囊的滑膜层和纤维层，完整剥离滑膜组织，最后以眼科镊轻轻夹住其中央，用眼科剪完整剪下，置10%的中性甲醛中固定［2］固定24 h后，石蜡包埋，苏木精-伊红染色 1.6 结果观察判定标准 ①一般情况：观察大鼠急性关节炎表现，活动量，进食量，关节红肿僵硬情况②关节肿胀度：使用足趾容积测量仪测AA大鼠双侧踝关节及足趾。

③滑膜病理评分标准：炎细胞：0分，无；1分，稀疏、散在；2分，较密集；3分，大量纤维组织增生：0分，无；1分，少量增生；2分，中等；3分，大量滑膜组织增生：0分，无；1分，单层；2分，2层；3分，3层巨噬细胞增生：0分，无；1分，稀疏；2分，较密集；3分，大量 1.7 统计学处理 所有计量资料采用±s统计，两组间均数比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义 2 结 果 2.1 发病情况 造模动物均有明显的急性炎症反应，表明造模成功注射FCA后3～4 h，大鼠左后足即可出现红、肿、热等急性炎症表现；2天左右达到高峰；4～5天后炎症逐渐消退；约10～13天，除左后足关节炎症可再次出现或加重外，其他肢体亦渐出现继发性关节肿胀，并呈进行性加重受累关节畸形，严重者不能负重，伴有懒动、食欲下降、消瘦、直立脱毛等全身表现，呈典型的多发性关节炎表现 2.2 关节肿胀 经姜黄素治疗15天后，AA大鼠全身症状明显改善表现为活动增多，食欲增强，体重增加，体毛平滑较有光泽，继发性关节肿胀明显减轻，7和14天测各组大鼠关节肿胀度结果表明，与AA模型组比较，用药后7天无统计学意义（P>0.05），14天姜黄素组其关节肿胀度明显降低(P<0.05)。

见表1 表1 姜黄素对AA大鼠继发关节肿胀度的影响与正常组比较：#P<0.05；与模型组比较：*P<0.05 2.3 滑膜病理 用药15天后处死大鼠，模型组病理评分均显著高于正常组(P<0.05)；姜黄素组炎细胞和巨噬细胞病理评分低于模型组(P<0.05)，而对滑膜组织增生和纤维组织增生影响较小表2 姜黄素对AA大鼠滑膜病理评分的影响与正常组比较：*P<0.05；与模型组比较：#P<0.05 3 讨 论 滑膜是由滑膜细胞、结缔组织和血管等构成关节囊的衬里层，主要功能是分泌、营养、滑润、吞噬、免疫及承受关节内应力等，是RA免疫反应的主要场所研究发现，RA患者关节衬里层的滑膜组织发生了明显的增生，厚度达5～20层临床表现为外周关节持续性、进展性的滑膜炎，并逐渐出现软骨侵蚀和骨质破坏，最终导致关节畸形功能障碍同时，关节肿胀、疼痛、功能障碍极大地降低了患者的生活质量炎症是具有血管系统的活体组织对局部损伤的反应在炎症的早期，这些炎症介质刺激血管，使血管扩张，血管内皮间隙扩大，血管壁通透性增强血浆内的液体、蛋白质和白细胞等渗出到组织间隙，随着渗出的增加，造成组织肿胀，因此，炎性渗出组织肿胀是炎症早期的重要指标［3］。

近年来国内从药理学、免疫病理学等方面对姜黄素进行了系列研究，证实了姜黄素具有良好的抗炎、镇痛和免疫调节的作用，对免疫性疾病具有较好的影响［4］我们的研究结果也证实了这点本研究的重点是探讨姜黄素对大鼠AA的抗炎、消肿和滑膜病理的作用，与模型组比较，姜黄素对关节肿胀及滑膜炎细胞和巨噬细胞有较好的作用（P<0.05），但对滑膜组织增生和纤维组织增生影响较小（P>0.05），其原因可能与用药时间过短有关，需要进一步研究从研究结果发现，姜黄素可控制关节炎症的发生、发展，这种作用可能与姜黄素抑制大鼠炎症的滑膜增生和炎症反应，调节免疫反应相关 对于RA的治疗，目前西医治疗常用非甾体类抗炎药、皮质激素、免疫抑制剂等，中药常用雷公藤、青风藤等，但以上药物在其疗效和药物的毒副作用等方面均不理想如雷公藤对肾脏有毒性作用，并可引起皮肤过敏反应及血液、消化、神经系统的不良反应［5］青风藤长期大量运用可引起白细胞减少，个别可出现血小板减少性紫癜等同时，治疗RA的许多中药，如关木通、广防己、大风藤、天仙藤等含有马兜铃酸，有损害肝肾的报道［6-7］而姜黄素的疗效确切，有效成分较安全，使用时有副作用小的优势，是很有前途的抗风湿药。

【参考文献】 ［1］ 苏 畅，张成义，韩慧慧，等.佐剂性关节炎的佐剂剂量条件探索［J］.北华大学学报(自然科学版)，2001，2(4):306-307. ［2］ 胡永红，曾克勤，张明敏，等.雷公藤甲素对胶原诱导的关节炎大鼠滑膜细胞核转录因子-κB表达与活性的影响［J］.中华风湿病学杂志，2004，8(9):515-519. ［3］ 钱娴娟，赵文明，胡永秀，等.口服Ⅱ型胶原蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠免疫耐受的研究［J］.中华风湿病学杂志，2002，6(5):331-334. ［4］ 李新建，刘晓城.姜黄素调节小鼠免疫功能的实验研究［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2005，14(2):132-135. ［5］ 马伟光，张 滔，张 超，等.有毒药物雷公藤的研究及展望［J］.中华中医药杂志，2006，21(2):117-120. ［6］ 姚茹冰，蔡 辉.核因子-κB与类风湿关节炎相关性的研究进展［J］.医学研究生学报，2006，19 (3):267-269. ［7］ 郑召岭，蔡 辉.RANKL和骨保护素在类风湿关节炎中的作用［J］.徐州医学院学报，2008，28 (4):270-272.。