课题_3复方磺胺类药物中SMZ和TMP的薄层色谱分离和鉴定..doc

3 复方磺胺类药物中 SMZ 和 TMP 的薄层色谱分离和鉴定授课教师姓名及职称：一、实验名称二、授课对象复方新诺明中 SMZ 和 TMP 的分离与鉴定授课形药学 实验教学式1 ．熟悉薄层板的铺制方法三、教学目标2 ．了解薄层色谱法在复方制剂分离、鉴定中的应用3 ．掌握 Rf 的计算方法1 ．薄层色谱法的分离原理四、教学内容2 ．薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法3 ．Rf 的意义及计算方法五、教学安排1．讲解演示 30 min2．学生操作 教师 130 min与课时分配六、授课重点七、注意事项八、授课方法九、使用教材十、教研室审查意见1 ．薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法2 ．Rf 的计算方法1 ．点样时毛细管切勿损坏薄层表面2 ．展开剂用量适当教师示范讲述，学生操作《分析化学实验》自编教材主任签字新乡医学院化学教研室 年 月 日实验 复方新诺明中 SMZ 和 TMP 的分离与鉴定一、实验 目的1．熟悉薄层板的铺制方法；2．了解薄层色谱法在复方制剂的分离、鉴定中的应用 ；3．掌握 Rf 值及分离度的计算方法 二、实验原理复方新诺明为复方制剂，含磺胺甲恶唑 ( SMZ 和甲氧苄氨嘧啶 ( TMP 成分，为了使 SMZ和 TMP 分离，可使用薄层色谱法，薄层色谱法是把固定相均匀地铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，铺好薄层的板称为薄层板，经点样，展开与显色后，与适宜的对照物质在同一薄层板上所得的色谱斑点作比较，用于进行定性鉴别或含量测定的方法。

薄层色谱法分为吸附薄层色谱法和分配薄层色谱法，本实验采用吸附薄层色谱法，固定相采用的是硅胶GF254 ，磺胺甲恶唑( SMZ和甲氧苄氨嘧啶( TMP可在硅胶GF254荧光薄层板上，用氯仿-乙醇 -正庚烷( 11?1?为展开剂，利用硅胶对SMZ及 TMP具有不同的吸附能力，流动相( 展开剂对二者具有不同的溶解能力而达到混合组分的分离利用SMZ和 TMP在荧光板上产生暗斑，与同板上的对照品比较进行定性比移值（ Rf）是薄层色谱法的定性参数，比移值是溶质移动距离与流动相移动距离之比，L为原点至斑点中心的距离， L0 为原点至溶剂前沿的距离如果组分的Rf 与对照品的Rf 一致可以初步确定组分与对照品是同一化合物，仅根据一种展开剂展开后的 Rf 值作为定性依据是不够的，需要经过多种展开系统得到的 Rf 值与对照品一致时，才可基本认定该组分与对照品是同一化合物三、仪器与试剂玻璃板，乳钵，微量注射器 ( 或毛细管，紫外分析仪；磺胺甲恶唑，甲氧苄氨嘧啶，丙酮，氯仿- 乙醇 -正庚烷 ( 11?1?，复方新诺明片剂四、实验步骤1．粘合薄层板的铺制称取羧甲基纤维素钠 0.75g ，置于 100mL 水中，加热使溶解，放置 1 周待澄清备用。

取上述CMC-Na 上清液 30mL ( 或适量置乳钵中，取 10g 硅胶 GF254 ，分别加入乳钵中，研磨均匀后，取糊状物适量放在清洁的玻璃板上，晃动或转动玻板，使其均匀地流布于整块玻璃板上而获得均匀的薄层板将其平放晾干，再在 110 ℃活化 1 小时，贮于干燥器中备用2 ．供试品溶液及对照溶液的制备分别取磺胺甲恶唑 0.2g 、甲氧苄氨嘧啶 40mg ，各加丙酮 10mL ，振摇使溶解，作对照溶液取本品细粉适量 ( 0.5 ～ 0.6g ，约相当于磺胺甲恶唑 0.2g ，加丙酮 10mL ，振摇，过滤，取滤液，作为供试品溶液3．点样展开在距薄层板底边 1.5cm 处，用铅笔轻轻划一起始线用微量注射器 ( 或毛细管分别点SMZ 、 TMP 对照液及样品液各 5μL，斑点直径不超过 2~3mm 待溶剂挥散后，将薄层板置于盛有 30mL 展开剂的色谱缸中饱和 15 分钟，再将点有样品的一端浸入展开剂 [氯仿 -乙醇- 正庚烷 ( 11?1?]约 0.3~0.5cm ，展开待展开剂移行约 12cm，取出薄板，立即用铅笔划出溶剂前沿，待展开剂挥散后，在紫外分析仪 (254nm 或365nm 下观察，标出各斑点的位置、外形，计算 Rf 值。

五、注意事项1．点样时微量注射器针头切勿损坏薄层表面2．色谱缸必须密闭，否则溶剂挥发，改变展开剂比例，影响分离效果3．展开剂用量不宜过多，否则溶剂移行速度快，分离效果受影响，但也不可过少，以免分析时间过长一般只需满足薄层板浸入 0.3~0.5cm 的用量即可六、思考题1．为什么薄层荧光被掩盖的板不能使用 ?2．荧光薄层检测斑点的原理是什么 ?3．色谱缸 (槽若不预先用展开剂蒸气饱和，对实验有什么影响 ?。