新药质量控制研究和质量标准制订之漫谈.ppt

新药质量控制研究新药质量控制研究和质量标准制订之漫谈和质量标准制订之漫谈中国医学科学院药物研究所中国医学科学院药物研究所General R &D Process TargetIdentifi-cationAssay DevelopmentLead Identifi-cationLeadOptimi-zationPhase IIPhase IIIFilingLaunchPhase IDevelop-mentPre-dev.Med. ChemistryDMPKAnalyticsDevelopment StrategyCovered topicsBiology / PharmacologyInvolved disciplinesDescription of deliverables and project review process for all major decision points in R&D• Roles and responsibilities of stakeholders in R&D Project Review Process• Deliverables for project team and key questions / criteria to be evaluated by decision committees• Involved disciplines: all major R&D disciplines from Target Identification through Start -of-DevelopmentDescription of activities/work packages and project milestones to optimize cycle times • Activities in Drug Substance and Drug Productdevelopment• Development process from Predevelopment through product launch• Involved disciplines: mainly Chem./Pharmaceutical Development, Processing and ManufacturingPharmaceutical DevelopmentChemical DevelopmentChem. and Pharm. Processing / Manuf.ToxicologyDDSTargetIdentifi-cationAssay DevelopmentLead Identifi-cationLeadOptimi-zationPhase IIPhase IIIFilingLaunchPhase IDevelop-mentPre-dev.Med. ChemistryDMPKAnalyticsDevelopment StrategyCovered topicsCovered topicsBiology / PharmacologyBiology / PharmacologyInvolved disciplinesInvolved disciplinesDescription of deliverables and project review process for all major decision points in R&D• Roles and responsibilities of stakeholders in R&D Project Review Process• Deliverables for project team and key questions / criteria to be evaluated by decision committees• Involved disciplines: all major R&D disciplines from Target Identification through Start -of-DevelopmentDescription of activities/work packages and project milestones to optimize cycle times • Activities in Drug Substance and Drug Productdevelopment• Development process from Predevelopment through product launch• Involved disciplines: mainly Chem./Pharmaceutical Development, Processing and ManufacturingPharmaceutical DevelopmentChemical DevelopmentChemical DevelopmentChem. and Pharm. Processing / Manuf.Chem. and Pharm. Processing / Manuf.ToxicologyDDSThe Roles of Structure Analysis Group in drug developmentPhase IIILaunchPost launchDrug Discovery PC & Ph IPD Ph IISupport Toxicology and other activitiesCofA for Tox. Lot potential impuritiesSupport preformulationSupport IND & CTAA Full CofA preliminary reference standardIND Proof of Structure Synthetic impuritiesPotential degradation productRelease testingSupport formulationSupport NDAQualify Primary Reference Standard NDA proof of StructureForced Degradation studyImpurities and Degradation productRelease testingLeachablesClinical supplies testingInvestigation of OOSSupport MarketingComplaintsCounterfeit Problem Solving in All Phases !!!新药新药安全、有效、可控安全、有效、可控新药分类新药分类o化学药品化学药品o中药、天然药物中药、天然药物o生物制品生物制品化学药品化学药品1、未在国内外上市销售的药品：、未在国内外上市销售的药品：（（1）通过合成或者半合成的方法制得的原料药及其制剂；）通过合成或者半合成的方法制得的原料药及其制剂；（（2）天然物质中提取或者通过发酵提取的新的有效单体及其制剂；）天然物质中提取或者通过发酵提取的新的有效单体及其制剂；（（3）用拆分或者合成等方法制得的已知药物中的光学异构体及其制剂；）用拆分或者合成等方法制得的已知药物中的光学异构体及其制剂；（（4）由已上市销售的多组份药物制备为较少组份的药物；）由已上市销售的多组份药物制备为较少组份的药物； （（5）新的复方制剂。

新的复方制剂2、改变给药途径且尚未在国内外上市销售的制剂改变给药途径且尚未在国内外上市销售的制剂3、已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的药品：、已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的药品：（（1）已在国外上市销售的原料药及其制剂；）已在国外上市销售的原料药及其制剂；（（2）已在国外上市销售的复方制剂；）已在国外上市销售的复方制剂；（（3）改变给药途径并已在国外上市销售的制剂改变给药途径并已在国外上市销售的制剂4、改变已上市销售盐类药物的酸根、碱基（或者金属元素），但不改变其药、改变已上市销售盐类药物的酸根、碱基（或者金属元素），但不改变其药理作用的原料药及其制剂理作用的原料药及其制剂 5、改变国内已上市销售药品的剂型，但不改变给药途径的制剂改变国内已上市销售药品的剂型，但不改变给药途径的制剂6、已有国家药品标准的原料药或者制剂已有国家药品标准的原料药或者制剂中药、天然药物中药、天然药物 1、未在国内上市销售的从中药、天然药物中提取的有效成份、未在国内上市销售的从中药、天然药物中提取的有效成份及其制剂及其制剂2、未在国内上市销售的来源于植物、动物、矿物等药用物质、未在国内上市销售的来源于植物、动物、矿物等药用物质制成的制剂。

制成的制剂3、中药材的代用品中药材的代用品4、未在国内上市销售的中药材新的药用部位制成的制剂未在国内上市销售的中药材新的药用部位制成的制剂5、未在国内上市销售的从中药、天然药物中提取的有效部位、未在国内上市销售的从中药、天然药物中提取的有效部位制成的制剂制成的制剂6、未在国内上市销售的由中药、天然药物制成的复方制剂未在国内上市销售的由中药、天然药物制成的复方制剂7、未在国内上市销售的由中药、天然药物制成的注射剂未在国内上市销售的由中药、天然药物制成的注射剂8、改变国内已上市销售药品给药途径的制剂改变国内已上市销售药品给药途径的制剂9、改变国内已上市销售药品剂型的制剂改变国内已上市销售药品剂型的制剂10、改变国内已上市销售药品工艺的制剂改变国内已上市销售药品工艺的制剂11、已有国家标准的中成药和天然药物制剂已有国家标准的中成药和天然药物制剂生物制品生物制品1、未在国内外上市销售的生物制品未在国内外上市销售的生物制品2、单克隆抗体单克隆抗体3、基因治疗、体细胞治疗及其制品基因治疗、体细胞治疗及其制品4、变态反应原制品变态反应原制品5、由人的、动物的组织或者体液提取的，或者通过发酵制备的具有生物活性的多组份制品。

由人的、动物的组织或者体液提取的，或者通过发酵制备的具有生物活性的多组份制品6、由已上市销售生物制品组成新的复方制品由已上市销售生物制品组成新的复方制品7、已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品8、含未经批准菌种制备的微生态制品含未经批准菌种制备的微生态制品9、与已上市销售制品结构不完全相同且国内外均未上市销售的制品（包括氨基酸位点突变、、与已上市销售制品结构不完全相同且国内外均未上市销售的制品（包括氨基酸位点突变、缺失，因表达系统不同而产生、消除或者改变翻译后修饰，对产物进行化学修饰等）缺失，因表达系统不同而产生、消除或者改变翻译后修饰，对产物进行化学修饰等）10、与已上市销售制品制备方法不同的制品（例如采用不同表达体系、宿主细胞等）与已上市销售制品制备方法不同的制品（例如采用不同表达体系、宿主细胞等）11、首次采用、首次采用DNA重组技术制备的制品（例如以重组技术替代合成技术、生物组织提取或者重组技术制备的制品（例如以重组技术替代合成技术、生物组织提取或者发酵技术等）发酵技术等）12、国内外尚未上市销售的由非注射途径改为注射途径给药，或者由局部用药改为全身给药的、国内外尚未上市销售的由非注射途径改为注射途径给药，或者由局部用药改为全身给药的制品。

制品13、改变已上市销售制品的剂型但不改变给药途径的生物制品改变已上市销售制品的剂型但不改变给药途径的生物制品14、改变给药途径的生物制品（不包括上述、改变给药途径的生物制品（不包括上述12项）15、已有国家药品标准的生物制品已有国家药品标准的生物制品化学药品申报资料项目化学药品申报资料项目（一）综述资料（一）综述资料1、药品名称药品名称2、证明性文件证明性文件3、立题目的与依据立题目的与依据4、对主要研究结果的总结及评价对主要研究结果的总结及评价5、药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献6、包装、标签设计样稿包装、标签设计样稿（二）药学研究资料（二）药学研究资料 7、药学研究资料综述药学研究资料综述8、原料药生产工艺的研究资料及文献资料；制剂处方、原料药生产工艺的研究资料及文献资料；制剂处方 及工艺的研究资料及文献资料及工艺的研究资料及文献资料9、确证化学结构或者组份的试验资料及文献资料确证化学结构或者组份的试验资料及文献资料10、质量研究工作的试验资料及文献资料质量研究工作的试验资料及文献资料11、药品标准草案及起草说明，并提供标准品或者对照品。

药品标准草案及起草说明，并提供标准品或者对照品12、样品的检验报告书样品的检验报告书13、辅料的来源及质量标准辅料的来源及质量标准14、药物稳定性研究的试验资料及文献资料药物稳定性研究的试验资料及文献资料15、直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准（三）药理毒理研究资料（三）药理毒理研究资料16、药理毒理研究资料综述药理毒理研究资料综述17、主要药效学试验资料及文献资料主要药效学试验资料及文献资料18、一般药理研究的试验资料及文献资料一般药理研究的试验资料及文献资料19、急性毒性试验资料及文献资料急性毒性试验资料及文献资料20、长期毒性试验资料及文献资料长期毒性试验资料及文献资料21、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、 皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等主要与局部、全身给药相关的特皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等主要与局部、全身给药相关的特殊安全性试验研究和文献资料殊安全性试验研究和文献资料22、复方制剂中多种成份药效、毒性、药代动力学相互影响的、复方制剂中多种成份药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料及文献资料。

试验资料及文献资料23、致突变试验资料及文献资料致突变试验资料及文献资料24、生殖毒性试验资料及文献资料生殖毒性试验资料及文献资料25、致癌试验资料及文献资料致癌试验资料及文献资料26、依赖性试验资料及文献资料依赖性试验资料及文献资料27、动物药代动力学试验资料及文献资料动物药代动力学试验资料及文献资料（四）临床研究资料（四）临床研究资料2828、国内外相关的临床研究资料综述国内外相关的临床研究资料综述2929、临床研究计划及研究方案临床研究计划及研究方案3030、临床研究者手册临床研究者手册3131、知情同意书样稿、伦理委员会批准件知情同意书样稿、伦理委员会批准件3232、临床研究报告临床研究报告 质量标准研究的意义和要求质量标准研究的意义和要求Ø制定药品质量标准的意义制定药品质量标准的意义 达到安全、有效、可控的目的达到安全、有效、可控的目的 Ø对药品质量标准方法学的要求对药品质量标准方法学的要求 药物分析、分析化学的各种方法药物分析、分析化学的各种方法 但应成熟、可靠、可操作性强但应成熟、可靠、可操作性强 ICH Quality GuidelinesØNDA/MAA componentsØQuality (CMC)ØSafetyØEfficacyØICH Quality GuidelinesØQ1:Stability(3) ØQ2:Analytical method(2)ØQ3:Impurities (3)ØQ4Pharmacopoeia monographs(none published)ØQ5Biotechnology (4)ØQ6Specifications (2)ØQ7Good manufacturing Practice (1)新药研究的主要技术要求和指导原则新药研究的主要技术要求和指导原则ICH 人用药品注册技术要求国际协调会人用药品注册技术要求国际协调会 International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use 在在1990年由美国、日本、欧盟三方政府的药品监督管理部门和制药年由美国、日本、欧盟三方政府的药品监督管理部门和制药企业联合发起成立的。

企业联合发起成立的新药研究指导原则（我国）新药研究指导原则（我国） 主要内容主要内容Ø性状及理化性质性状及理化性质Ø鉴别鉴别Ø检查检查Ø含量测定含量测定Ø稳定性研究稳定性研究性状及理化性质性状及理化性质Ø溶解度溶解度Ø熔点熔点Ø油水分配系数油水分配系数Ø紫外吸收光谱和吸收系数紫外吸收光谱和吸收系数Ø旋光度旋光度溶解度溶解度 硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在水水中中极极易易溶溶解解，，在在冰冰醋醋酸酸、、甲甲醇醇、、乙乙醇醇、、丙丙酮酮、、二二甲甲亚亚砜砜、、N,N-二二甲甲基基甲甲酰酰胺胺、、氯氯仿仿中中几几乎乎不不溶溶，，在在0.1mol/L盐盐酸酸溶溶液液、、0.1mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液中中极极易溶解易溶解 这这是是由由于于胍胍丁丁胺胺以以硫硫酸酸盐盐的的形形式式存存在在，，且且分分子子含含有有易易于于质质子子化化的的氨氨基基和和胍胍基基，，具具有有极极强强的的亲亲水水性性，，这这一一性性质与硫酸胍丁胺油水分配系数的研究结论是一致的质与硫酸胍丁胺油水分配系数的研究结论是一致的熔点熔点Ø毛细管法毛细管法 按按照照中中国国药药典典(2000年年版版二二部部) 的的方方法法测测量量其其熔熔点点。

实实验验中中随随温温度度升升高高，，硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺的的颜颜色色开开始始呈呈棕棕黄黄，，然然后后逐逐渐渐变变棕棕褐褐色色，，固固相相消消失失不不明明显显，，无无法法获获得得本本品品的的准准确熔点 Ø 差示扫描量热法（差示扫描量热法（DSC）） 熔点熔点 DSC曲曲线线记记录录了了维维持持样样品品和和参参比比物物温温度度相相同同所所需需的的能能量量差差随随温温度度的的变变化化DSC曲曲线线有有助助于于熔熔点点的的确确定定，，同同时时从从DSC曲曲线线上上的的吸吸热热或或放放热热峰峰的的位位置置、、形形状状、、数数目目可可以以估估计计样样品品的的纯纯度度，，而而峰峰面面积积与与反反应应热热焓焓有有关关，，可可用用来来测测定定反反应应热、比热容等热化学参数热、比热容等热化学参数DSC测定熔点测定熔点油水分配系数油水分配系数 采采用用正正辛辛醇醇-水水体体系系，，研研究究了了不不同同浓浓度度硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在两两相相中中的的分分配配情情况况，，研研究究表表明明硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺几几乎乎全全部部存存在在于于水水相相中中，，这这是是由由于于硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺具具有有极极强强的的亲亲水水性性；；由由于于其其游游离离碱碱不不能能稳稳定定存存在在，，故故无无法法求求取取其其游游离离碱的油水分配系数。

碱的油水分配系数紫外吸收光谱紫外吸收光谱 紫外最大吸收波紫外最大吸收波长和吸收系数和吸收系数仪器型号器型号测定室温定室温(℃)λ(max)nmE原液原液稀稀释一倍一倍水溶水溶剂25±1℃218±2 岛津津UV-250219520.8528.9 岛津津UV-260218520.7530.6 岛津津UV-160A219520.6531.3 岛津津UV-160A218520.4532.8 惠普惠普HP-8453218520.0529.7Ex=525.6SD=5.45RSD=1.04%紫外吸收度比紫外吸收度比值测定定仪器型号比值325nm/218nm 325nm/234nm 岛津UV-250 1.350 1.778 岛津UV-260 1.353 1.790 岛津UV-160A 1.353 1.790 岛津UV-150 1.349 1.790 惠普HP-8453 1.352 1.790平均平均值 1.351 1.788RSD(%) 0.13 0.30鉴鉴 别别Ø化学鉴别法化学鉴别法ØHPLC方法方法Ø红外光谱法红外光谱法Ø紫外光谱法紫外光谱法 化学鉴别化学鉴别o取本品约取本品约10 mg，加甲醇，加甲醇1 mL，滴加三氯化铁试液，滴加三氯化铁试液二滴，摇匀后，呈绿色溶液。

即本品中的酚羟基与二滴，摇匀后，呈绿色溶液即本品中的酚羟基与三氯化铁形成绿色络合物三氯化铁形成绿色络合物HPLC方法方法a.硫酸胍丁胺（购自硫酸胍丁胺（购自Sigma））b.硫酸胍丁胺硫酸胍丁胺精制品精制品红外光谱法（紫外光谱法类似）红外光谱法（紫外光谱法类似）检检 查查Ø无机杂质检查无机杂质检查 a. 干燥失重干燥失重 b. 灼烧残渣灼烧残渣 c. 重金属重金属 d. 砷盐砷盐Ø酸度酸度Ø溶液颜色与澄清度溶液颜色与澄清度Ø热原等等热原等等Ø 有机杂质检查有机杂质检查 a. 有机溶剂残留量有机溶剂残留量 b. 有关物质有关物质 高效液相色谱法高效液相色谱法 薄层色谱法薄层色谱法ICH Guidance on Impurities in Drug SubstanceImpurities in Drug Substance (ICH) Q3A (R)Classification of impuritiesOrganic Impurities (Process and drug related)Starting materialBy-productsIntermediateDegradation ProductsReagents, ligands, and catalystsInorganic ImpuritiesReagents, ligands, and catalystsHeavy metals or other residual metalsInorganic saltsOther materials (eg. Filter aids, charcoal)Solvents: Organic or inorganic liquids used as vehicles for the preparation of solutions or suspensions in the synthesis无机杂质检查无机杂质检查批批 号号干燥失重干燥失重炽灼残渣灼残渣重金属重金属砷砷盐酸度酸度0401120.21%0.015%10ppm<2ppm4.240401130.06%0.028%10ppm<2ppm4.970401150.13%0.080%10 20ppm<2ppm 4.90按药典常规方法进行按药典常规方法进行有机溶剂残留量的检查有机溶剂残留量的检查•分类分类 (risk based assessment)•1类类: 避免使用的溶剂避免使用的溶剂 (should not be used)•2类类: 限制使用的溶剂限制使用的溶剂 (0.1 mg/day, or 10 ppm)•3类类: 低毒性溶剂低毒性溶剂 (50mg/day or 0.5 %)残留溶剂限量（ppm）o1类：苯（类：苯（2）、四氯化碳（）、四氯化碳（4）、）、1,2-二氯乙烷（二氯乙烷（5）、）、1,1-二氯乙烷（二氯乙烷（8）、）、1,1,1-三氯乙烷（三氯乙烷（1500））o2类：甲苯（类：甲苯（890）、乙腈（）、乙腈（410）、氯仿（）、氯仿（60）、二氯甲烷）、二氯甲烷（（600）、正己烷（）、正己烷（290）、甲醇（）、甲醇（3000）、吡啶（）、吡啶（200）等）等等等o3类：醋酸、丙酮、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、甲酸、苯甲醚、类：醋酸、丙酮、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、甲酸、苯甲醚、丁醇、醋酸丁醇、四氢呋喃、正庚烷、丙醇、甲乙酮、戊丁醇、醋酸丁醇、四氢呋喃、正庚烷、丙醇、甲乙酮、戊烷（烷（5000））o无足够毒性数据的溶剂：异辛烷、石油醚、三氯乙酸、三无足够毒性数据的溶剂：异辛烷、石油醚、三氯乙酸、三氟乙酸、氟乙酸、2,2-二甲丙烷等二甲丙烷等有机溶剂残留量检查有机溶剂残留量检查 仪器及主要色谱条件仪器及主要色谱条件美国美国 HP 5890型气相色谱仪型气相色谱仪色谱柱：色谱柱：DB-624，， 30 m×0.32 mm×1.8µm载气：载气：N2进样方式：进样方式：250 C（（柱前压柱前压50 kPa分流进样）分流进样）柱温：柱温：50 C，，20 C /min至至230 C。

检测器：检测器：FID 250 C 硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在合合成成和和提提取取过过程程中中曾曾用用甲甲醇醇、、乙乙醇醇，，因因此此我我们们对对样样品品中中甲甲醇醇、、乙乙醇醇两两种种溶溶剂剂的的残残留留量量采采用用气气相色谱法进行检查相色谱法进行检查分离图及最低检出限量图分离图及最低检出限量图 最低检出限量图最低检出限量图（甲醇（甲醇0.1‰，乙醇，乙醇0.1‰））分离图分离图方法分析特性方法分析特性甲醇甲醇乙醇乙醇线性范性范围19.6~491 μg/ml20.2~505μg/ml线性方程性方程Y=- 0.00309+0.0102x r=0.9964Y=-0.278+0.0155x r=0.9968精密度精密度(RSD)(n=5)49.1μg/ml,4.54%50.5μg/ml,4.39%98.2μg/ml,3.88%101μg/ml,4.38 %344μg/ml,4.17%354μg/ml,4.02%准确度准确度(回收率回收率%)49.1μg/ml,82.0%50.5μg/ml,114%98.2μg/ml,112%101μg/ml,117 %344μg/ml,107%354μg/ml,104%定量限定量限最小最小检出限量出限量<5.0 μg/ml<5.0μg/ml<0.1‰ 0.1‰限量图和样品检查图限量图和样品检查图 限量图限量图甲醇甲醇0.3%,乙醇乙醇0.5%样品检查图样品检查图有关物质检查有关物质检查HPLC方法方法GC方法方法TLC方法方法LC-MS/MS、、GC-MS、、NMRICH Guidance on Impurities in Drug SubstanceØReporting and control of Impurities in Drug Substance (ICH) Q3A (R)ØOrganic ImpuritiesMaximumDaily DoseReporting ThresholdIdentification ThresholdQualification threshold≤2g /day0.05%0.1% or 1mg /day0.15 % or 1mg /day≥2g/day0.03%0.05%0.05%ØInorganic ImpuritiesNormally detected and quantified using pharmacopoeial or other appropriate proceduresØSolvents Refer to ICH Q3C ICH Guidance on Impurities in Drug Product ICH Q3B(R)ØImpurities in Drug ProductØClassification of Impurities in the Drug ProductØDrug Substance Related (Process Impurity, degradation Product)ØExcipient Related ImpuritiesØResidual SolventsØImpurities derived from packaging/content closure componentsICH Guidance on Impurities in Drug Product ICH Q3B(R) ØReporting and control of Impurities in Drug ProductØReporting Threshold: Maximum Daily Dose Threshold ≤ 1g 0.1% > 1g 0.05%ØIdentification Threshold Maximum Daily Dose Threshold <1 mg 1% or 5ug TDI 1-10 mg 0.5 % or 20 ug TDI >10mg -2g 0.2 % or 2 mg TDI > 2g 0.1%ØQualification Threshold Maximum Daily Dose Threshold 10 mg – 1 g 0.2 %IPAC-RS Proposed Extractables Reporting ThresholdsØExtractable Level in Component ( g/g) Assignment Category > 100  g/g Structure Confirmed 20 – 100  g/g Confident < 20  g/g TentativeStructure confirmed: Identification categories A, B (or C), and D (or E) are positive.Confident: sufficient data to preclude all but the most closely related structures. Tentative: data is consistent with a class of molecule only有关物质o对原料药进行有关物质检查，主要应考虑反对原料药进行有关物质检查，主要应考虑反应过程中涉及的应过程中涉及的中间体、付产物、降解物中间体、付产物、降解物等。

等o采用采用HPLC和和TLC进行本品原料药中有关物进行本品原料药中有关物质的检查质的检查 胍胍丁丁胺胺是是我我所所合合成成的的 类类新新药药，，具具有有增增强强阿阿片片类类药药物物镇镇痛痛作作用用、、抑抑制制阿阿片片类类药药物物所所致致耐耐受受和和身身体体依依赖赖等等药药效效为为了了对对该该药药物物进进行行有有效效地地质质量量控控制制，，研研究究建建立立符符合合新新药药报批要求的杂质检查和含量测定方法存在以下技术难题：报批要求的杂质检查和含量测定方法存在以下技术难题：Ø胍胍丁丁胺胺的的紫紫外外吸吸收收在在200nm以以下下，，无无法法采采用用常常规规的的高高效效液相色谱液相色谱-紫外检测的方法对该药进行有效地质量控制紫外检测的方法对该药进行有效地质量控制Ø胍胍丁丁胺胺及及其其共共存存杂杂质质结结构构相相似似，，研研究究建建立立两两种种不不同同的的杂杂质分离及检查方法具有相当的难度质分离及检查方法具有相当的难度胍丁胺及其共存杂质胍丁胺及其共存杂质胍丁胺胍丁胺丁二胍丁二胍丁二胺丁二胺甲基异硫脲甲基异硫脲OPA柱前衍生化高效液相色谱法柱前衍生化高效液相色谱法-紫外检测紫外检测 衍生化的反应原理衍生化的反应原理OPA柱前衍生色谱分离图柱前衍生色谱分离图1. 丁二胺衍生物；丁二胺衍生物；2. 硫酸胍丁胺衍生物硫酸胍丁胺衍生物 衍生物的稳定性考察衍生物的稳定性考察OPA衍生化方法的不足之处衍生化方法的不足之处1.通过研究表明衍生物的稳定性不好，这一特点要求操通过研究表明衍生物的稳定性不好，这一特点要求操作必须尽量平行以获得好的重现性。

作必须尽量平行以获得好的重现性2.胍丁胺及其共存物中仅胍丁胺、丁二胺可以与胍丁胺及其共存物中仅胍丁胺、丁二胺可以与OPA衍衍生试剂发生衍生化反应，丁二胍和甲基异硫脲均未能生试剂发生衍生化反应，丁二胍和甲基异硫脲均未能检出，这是由于其结构中没有可以发生衍生化反应的检出，这是由于其结构中没有可以发生衍生化反应的基团3.该方法对原料丁二胺的相对检出限为该方法对原料丁二胺的相对检出限为1%，尚不能满足，尚不能满足一类新药质量标准的要求一类新药质量标准的要求4.衍生化的步骤较为烦琐衍生化的步骤较为烦琐离子对高效液离子对高效液相色谱法相色谱法–示差折光检测示差折光检测 硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺及及其其共共存存物物（（丁丁二二胍胍、、丁丁二二胺胺、、甲甲基基异异硫硫脲脲））在在酸酸性性条条件件下下均均显显示示正正电电荷荷，，若若在在流流动动相相中中添添加加离离子子对对试试剂剂樟樟脑脑磺磺酸酸钠钠，，与与上上述述化化合合物物通通过过静静电电作作用用生生成成离离子子对对，，采采用用通通用用型型检检测测器器——示示差差折折光光检检测测器器进进行行检检测测，，可可以以对对胍胍丁丁胺胺及及其其共共存存物物均均产产生生响响应应，，从从而而克克服服衍衍生生化化方方法法存在的缺陷。

存在的缺陷色谱条件的选择色谱条件的选择 对对离离子子对对试试剂剂浓浓度度、、温温度度、、 pH、、甲甲醇醇比比例例、、三三乙乙胺胺浓浓度度、、等因素进行逐步优化，研究表明：等因素进行逐步优化，研究表明：Ø离离子子对对试试剂剂的的浓浓度度 研研究究表表明明不不含含离离子子对对试试剂剂的的流流动动相相对对硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺及及其其共共存存杂杂质质的的保保留留很很弱弱，，出出峰峰很很早早，，无无法法实实现现四四种种物物质质良良好好的的色色谱谱分分离离离离子子对对试试剂剂浓浓度度较较低低时时，，色色谱谱峰峰前前伸伸；；浓浓度度过过高高，，色色谱谱峰峰拖拖尾尾另另外外，，离离子子对对试试剂剂的的适适宜宜浓浓度度与与硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺的的上上样样量量有有关关，，为为保保持持色色谱谱峰峰的的对对称称性性，，增增大大硫硫酸酸胍丁胺的上样量，应适当提高离子对试剂的浓度胍丁胺的上样量，应适当提高离子对试剂的浓度色谱条件的选择色谱条件的选择Ø温温度度 柱柱温温和和示示差差检检测测器器温温度度升升高高，，柱柱压压降降低低，， tR 减减小小，，色色谱峰面积略有增大，其对称性明显提高。

谱峰面积略有增大，其对称性明显提高ØpH 根根据据离离子子对对生生成成的的原原理理，，流流动动相相必必须须在在酸酸性性条条件件下下才才能能与与胍胍丁丁胺胺及及其其共共存存物物生生成成离离子子对对在在较较高高的的pH条条件件下下，，tR较较小小，，色色谱谱峰峰拥拥挤挤，，分分离离效效果果差差，，考考虑虑到到色色谱谱柱柱自自身身的的酸酸度度适适用范围，我们选择用范围，我们选择pH为为3.0Ø甲甲醇醇比比例例和和三三乙乙胺胺浓浓度度 通通过过改改变变有有机机相相甲甲醇醇的的比比例例调调节节tR，，同时通过改变三乙胺的比例不断改善峰形同时通过改变三乙胺的比例不断改善峰形色谱条件的选择色谱条件的选择胍丁胺及其共存物的色谱分离图胍丁胺及其共存物的色谱分离图1 甲基异硫脲；甲基异硫脲；2 丁二胺；丁二胺；3 胍丁胺；胍丁胺；4 丁二胍丁二胍色谱分离机理色谱分离机理tR= 4.010min tR= 5.462mintR = 6.265mintR = 8.002min方法学考察方法学考察线性方程性方程Y=-59.39+2374X, r=0.9999精密度精密度RSD（（n=5））0.50mg/ml, 2.49%1.0mg/ml, 0.379%5.0mg/ml, 0.867%准确度准确度回收率（回收率（ n=5 ））0.50mg/ml, 100.3%1.0mg/ml, 101.8%5.0mg/ml, 95.20%检出限出限0.062  g重现性重现性高效液相色谱高效液相色谱Thermo Separation Product Spectrasystem P2000示差折光检测器：示差折光检测器：Waters 410 Differential Refractomer其它条件同其它条件同 限量图及样品检查图限量图及样品检查图丁二胺丁二胺0.5%,丁二胍丁二胍0.5%样品检查图样品检查图薄层色谱法薄层色谱法Ø展开剂的选择展开剂的选择 对对展展开开剂剂的的种种类类和和配配比比进进行行优优化化选选择择，，通通过过实实验验确确定定最最终终的的展展开开剂剂条条件件为为：：甲甲醇醇:正正己己烷烷:冰冰醋醋酸酸:氨氨水水=10 : 1.0 : 0.2 : 1.0。

在在此此条条件件下下，，硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺及及其其共存杂质获得良好分离，且具有较高的显色灵敏度共存杂质获得良好分离，且具有较高的显色灵敏度Ø薄层板的选择薄层板的选择 实实验验选选择择国国产产青青岛岛海海洋洋高高效效硅硅胶胶板板、、Merck DC-硅硅胶胶G60板板（（5721））、、 Merck HPTLC-硅硅胶胶G60板板（（5641）），，从从分分离离度度、、灵灵敏敏度度等等方方面面进进行行对对比比考考察察，，研研究究表表明明Merck DC-硅硅胶胶G60板板的的检检出出灵灵敏敏度度高高于于国国产产硅胶板一倍以上，本底干扰少硅胶板一倍以上，本底干扰少薄层色谱法薄层色谱法Ø显色方法的选择显色方法的选择 实实验验对对比比研研究究了了1-萘萘酚酚+NaOH+NaCl+双双乙乙酰酰、、碘碘蒸蒸汽汽熏熏、、碘碘化化铋铋钾钾等等三三种种显显色色方方法法，，研研究究表表明明碘碘熏熏显显色色具具有有更更高高的的灵灵敏敏度度，，干干燥燥的的环环境境以以及及烘烘过过的的薄薄层层板对显色有利板对显色有利薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱分离图薄层色谱分离图MERCK 硅胶板硅胶板青岛海洋硅胶板青岛海洋硅胶板两种薄层板灵敏度比较两种薄层板灵敏度比较灵敏度灵敏度Merck硅胶板硅胶板青青岛海洋硅胶板海洋硅胶板HPLC检出限出限( g)检出限量出限量（（%））检出限出限( g)检出限量出限量（（%））检出限出限( g)检出限量出限量（（%））胍丁胺胍丁胺0.25—0.50—0.062—丁二胺丁二胺0.0750.40%0.150.50%0.032 0.50%甲基异硫甲基异硫脲0.400.40%1.81.0%0.240.50%丁二胍丁二胍0.0750.24%0.150.50%0.10 0.50% 四批样品的纯度检查图四批样品的纯度检查图薄层板的左侧为薄层板的左侧为0.5%的限量图的限量图样品纯度检查样品纯度检查影响因素样品检查图影响因素样品检查图有关物质o发现本品溶液在光线照射下，会呈现三个发现本品溶液在光线照射下，会呈现三个色谱峰，为研究确证其是否为光互变异构色谱峰，为研究确证其是否为光互变异构体，试验采用体，试验采用HPLC、、LC-MS、、UV等技等技术手段进行研究。

术手段进行研究o手性异构体手性异构体 （手性柱分离、高效毛细管电泳）（手性柱分离、高效毛细管电泳）光互变异构体光互变异构体光照条件下，本品溶液的光照条件下，本品溶液的HPLC图图（不同时间连续进样）（不同时间连续进样）固体光照或加热固体光照或加热10天天光互变异构体光互变异构体自然光自然光避光避光精制品的研制精制品的研制o精制品（或标准品、对照品）精制品（或标准品、对照品）o如何说明精制品的纯度、含量如何说明精制品的纯度、含量 HPLC、、TLC、、DSC、、TA 含量测定（容量分析、重量分析等）含量测定（容量分析、重量分析等）化学药一般样品纯度要求大于化学药一般样品纯度要求大于99.0% 精制品纯度大于精制品纯度大于99.5%稳定性研究稳定性研究Ø破坏试验破坏试验Ø影响因素试验影响因素试验Ø加速试验加速试验Ø长期试验长期试验破坏试验破坏试验Ø酸、中、碱条件下破坏试验酸、中、碱条件下破坏试验 结论：硫酸胍丁胺在碱性条件不稳定，有新物质生成结论：硫酸胍丁胺在碱性条件不稳定，有新物质生成Ø氧化条件下的破坏试验氧化条件下的破坏试验 结论：硫酸胍丁胺在氧化条件不稳定，有新物质生成。

结论：硫酸胍丁胺在氧化条件不稳定，有新物质生成现代分析技术在质控研究中的应用现代分析技术在质控研究中的应用 GC-MS、、HPLC-MS、、HPCE-MS、、HPLC-NMR在在药药品质量控制、未知物的鉴定和结构确证等方面作用很大品质量控制、未知物的鉴定和结构确证等方面作用很大 HPLC–MS–(MS)技技术术对对主主要要杂杂质质、、光光互互变变异异构构体体、、中中药药复复方方的的有有效效成成分分等等进进行行结结构构确确证证；；手手性性HPLC、、HPCE技技术术检检查查药药物物的的光光学学纯纯度度，，对对药药品品中中低低效效或或无无效效的的异异构构体体进进行质量控制行质量控制碱性条件下的破坏试验碱性条件下的破坏试验一级质谱鉴定一级质谱鉴定m/z 89：：丁二胺丁二胺[M+H]+ m/z 111：：[M+Na]+ m/z 132：：4-氨基丁基脲氨基丁基脲[M+H]+ m/z 154：：[M+Na]+ 氧化条件下破坏试验氧化条件下破坏试验一级和二级质谱鉴定一级和二级质谱鉴定m/z 163：： (4-硝基硝基)–丁基丁基–氨基甲酸氨基甲酸[M+H]+ m/z 116：：[M-HNO2]+ (M1)m/z 98：： [M1-H2O]+ ；；m/z 74：：[M1-C3H6]+；；m/z 60：：[M1-C4H8]+ 影响因素试验影响因素试验 在在强强光光照照射射（（4500 ~ 5000lx））、、高高温温（（60 C））、、高高湿湿（（25 C、、RH92.5%））、、空空气气露露置置等等条条件件下下进进行行，，于于0、、5、、10天天进进行行稳稳定定性性考考察察，，采采用用HPLC、、TLC方方法法考考察察样样品品的的稳稳定定性性，，结结果果均均表表明明硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在强强光光照照射射、、高温、高湿条件中十分稳定，未观察到降解产物。

高温、高湿条件中十分稳定，未观察到降解产物长期试验、加速试验长期试验、加速试验 考考察察了了硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺长长期期（（25 C、、RH60% ））放放置置9个个月月，，加加速速条条件件（（40 C、、RH75% ））放放置置6个个月月的的稳稳定定性性，，试试验验结结果果表表明明硫硫酸酸胍胍丁丁胺胺在在上上述述期期限限内内稳稳定定，，未未检检出降解产物及其它杂质出降解产物及其它杂质Famous Industry QuotesØWork smarter, not harder!ØDo it cheap, do it twice!Ø充分理解，充分掌握充分理解，充分掌握Ø合理安排，事半功倍合理安排，事半功倍Thank you !。