食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程.doc

食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程 一、菌种分级　　食用菌的菌种分为三级，即母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)　　1、母种(一级种)　通过孢子或组织分离培养获得，并经鉴定为种性优良，遗传和生理性状相对稳定的在试管斜面上生长和保存的纯菌丝体也有人称之为试管种　　2、原种(二级种)　由母种转接到天然基质(培养基)上经培养而成的菌种这是菌丝体和天然基质的混合体　　3、栽培种(三级种)　由原种转接在天然基质(培养基)上扩大繁殖而成的菌种栽培种也是菌丝体和天然基质的混合体栽培种常作为栽培用菌种，或直接出菇也有人称之为生产种　　二、菌种生产的基本工艺流程　　作为栽培用的菌种，国内外均采用固体培养，使用固体菌种其大致工艺流程为：　　母种→母种扩繁(培养基制备→接种→培养检查→成品)↓↓←原种成品←(培养检查←冷却接种←灭菌←配料分装)原种制作栽培种制作(配料分装→灭菌→冷却接种→培养检查) →栽培种成品　　三、母种(一级种)制作　　母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品　　(一)、常用培养基及配方　　培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5第四，经过严格灭菌，保持无菌状态这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH这一点必须在配制时就考虑到这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH　　目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。

　　1、通用培养基　　通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：　　①、PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升　　②、综合马铃薯培养基　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　③、马铃薯麦麸综合培养基　　马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　④、马铃薯蛋白胨综合培养基　　马铃薯200克，葡萄糖20克，蛋白胨2～3克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　⑤、马铃薯酵母粉综合培养基　　马铃薯200克，葡萄糖20克，酵母粉4～6克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　2、双孢蘑菇培养基　　①、马铃薯麦芽汁培养基　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，麦芽汁100毫升，琼脂10或20克，水900毫升(与麦芽汁总计1升)　　②、堆肥浸汁蔗糖培养基　　堆肥(干)50克，蔗糖15克，琼脂10或20克，水1升　　③、改良堆肥PDA培养基　　马铃薯(去皮)200克，堆肥100～150克，葡萄糖20克，硫酸钙1克，琼脂10或20克，水1升。

　　④、堆肥浸汁玉米粉培养基　　堆肥(干)150克，玉米粉30克，琼脂10或20克，水l升　　⑤、玉米粉葡萄糖培养基　　玉米粉20～30克，葡萄糖20克，蛋白胨O．5克，琼脂20克，水1升　　⑥、马铃薯麦芽汁蛋白胨培养基　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，麦芽汁粉12克，蛋白胨3克，琼脂10或20克，水1升　　3、平菇培养基　　①、麦麸(米糠)综合培养基　　麦麸(米糠)50克，葡萄糖5～10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0．2克，琼脂10或20克，水l升　　②、葡萄糖棉籽壳浸汁培养基　　葡萄糖20克，棉籽壳100克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　4、香菇培养基　　①、麦麸蛋白胨培养基　　麦麸100克，蛋白胨2克，蔗糖或葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升　　②、菇木汁培养基　　菇木或人造菇木渣200克，麦麸或米糠100克，葡萄糖20克，硫酸铵l克，琼脂10或20克，水1升　　②、酵母粉葡萄糖培养基　　葡萄糖20克，酵母粉5克，琼脂10或20毫升，水1升　　③、葡萄糖麦芽糖酵母粉培养基　　葡萄糖10克，麦芽糖10克，酵母粉5克，琼脂10或20克，水1升。

　　5、木耳培养基　　①、黄豆粉培养基　　黄豆粉20克，葡萄糖20克，硫酸镁0.1克，过磷酸钙1.5克，琼脂10或20克，水1升　　②、木屑浸出汁综合PDA培养基　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，木屑50～1 o()克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水l升　　6、草菇培养基　　①、稻草汁培养基　　碎稻草200克，葡萄糖20克，硫酸铵3克，琼脂20克，水1升　　②、稻草汁综合PDA培养基　　碎稻草200克，马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，硫酸镁0．5克，磷酸二氢钾2克，琼脂20克，水1升　　③、综合PDYA培养基　　马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，酵母粉5克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁l克，琼脂10或20克，水1升　　(二)、培养基制作　　培养基制作的步骤为：　　材料选择→准确称量→萃取→配制定量→分装→灭菌→斜面摆放　　1、材料的选择　　组成食用菌母种培养基的材料中，有些材料浓度、成分都相对稳定，如葡萄糖、磷酸二氢钾等，有些天然营养材料就没有那么稳定了，往往由于对这些材料的选择直接影响培养基使用效果，影响食用菌菌丝的生长如马铃薯、麦麸挑选不好时，制成培养基后，食用菌菌丝就不能很好地生长。

因此，要认真选择，根据我们的经验，选材时要注意：①、发芽的马铃薯不能用，因为芽眼处有较大量的龙葵碱，对菌丝生长有毒害作用；②、表皮颜色变绿的马铃薯不能用；③、麦麸、米糠、豆粉、玉米粉等农产品发霉、发过霉，生虫或生过虫的不能使用总之，要使用新鲜洁净的材料　　2、准确称量　　各种食用菌菌丝的生长都要求一定的养分浓度，因此，使用配方的各种养分的配比不可随意更改，称取时要准确　　3、制备原则　　①、植物性材料先行煮沸萃取　凡植物性材料均先单独煮沸萃取(两种或两种以上时可混合煮沸萃取)，煮沸萃取时间为30分钟，煮沸30分钟后，取其上清液或滤液如麦麸、米糠、木屑、棉籽壳、稻草、堆肥、马铃薯等　　②、生物制剂如酵母粉、蛋白胨，需事先用冷水溶化，然后加入但不需煮沸　　③、化学试剂最后加入　凡属化学试剂类营养物质，如葡萄糖、麦芽糖、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁等，均在配制的最后一步加入，并不断搅拌以使其快速溶解，不可与植物性材料一起煮沸　　④、以1升为配制单位　各培养基配方所列材料的用量均以最终配制成1升为单位，即每升培养基中的含量因此，当某种培养基中加入较大量的某种汁液或某种浸提液时，要注意计算培养基的最终容量。

当水煮萃取过程中使培养基水量不足时，可中途加水或最后补足水至l升　　4、制作方法　　食用菌母种用培养基均含有天然植物材料的浸出液，如最常用的马铃薯、麦麸、米糠等的浸出液这类材料均先用清水煮沸萃取，取其滤液，用滤液再煮琼脂下面以通用培养基中的马铃薯酵母粉综合培养基为例讲述培养基的制作方法　　①、准备材料　选取没有发芽的马铃薯，洗净去皮，称取200克，并将其切成l厘米左右见方的小块同时准确称量好其他成分：葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，酵母粉4～6克(溶于少量水中)　　②、煮沸　将切好的马铃薯小块放入1200毫升左右(煮沸过程中会蒸发200～300毫升水，故煮沸萃取之初要多加水200毫升左右)水中，用铝锅煮沸30分钟煮沸中不要搅动，以免打碎马铃薯而使培养基沉淀物过多　　③、过滤　煮沸30分钟后，用2～4层纱布过滤　　④、用滤液融化琼脂　琼脂使用前可剪成2厘米左右长的小段，这样融化会快些，如果琼脂不太干净，最好水洗2～3遍去除杂质如果使用琼脂粉，最好事先溶于少量冷水中煮琼脂时，要多搅拌，边煮边搅，直至完全融化煮沸后要文火，以防溢出　　⑤、加入全部组分后定容　琼脂完全融化后，将各组分完全加入，并定容至1升，用玻棒搅拌，使其均匀。

　　⑥、调节pH　加入全部组分定容后，用pH试纸测定培养基的pH，若不适，可用柠檬酸或食醋调低，用氢氧化钠、碳酸钠或石灰调高在我国多数地区，使用自然水制备培养基时，自然pH多在6.2～6.8，不需再格外调节　　⑦、分装调好pH后，即开始分装　食用菌母种常用的试管规格是18～20厘米(长)×18～20毫米(口径)分装试管的装置可用带铁环架和漏斗的分装架(图3—10)，也可自行设计和制作分装装置自行制作的分装装置是一只1升的大烧杯或量杯，杯中插入一支“V”形玻璃管，没有“V”形玻璃管时，可用与容器等高长度的直玻璃管，管的一头插至杯底，另一头接乳胶管，乳胶管处夹一止水阀，下端再接一10厘米左右长的玻璃管　　 使用自制分装装置分装时，将培养基倒人大烧杯或大量杯后，先将吸耳球插入外端最末端的玻管内，将培养基从容器中吸人玻管，直至流人止水阀处分装时注意玻管末端的水平一定低于培养基的水平面，否则，培养基不能自动流出　　分装时，要注意流出的培养基不可沾在近试管口的壁上，以防日后生霉一旦管口内沾有培养基，待凝固后用接种钩取出，并用潮湿洁净的纱布擦拭干净　　一般将培养基装至试管的1/5～l/4处，尔后加盖棉塞。

棉塞要用干净的梳棉制作，不可用脱脂棉，因为脱脂棉在灭菌中极易吸水，日后易滋生霉菌棉塞要上下粗细均匀，松紧适度，以塞好手提时不掉为宜棉塞长度以塞入试管内1.5～2.0厘米长，外露1.5厘米左右为宜然后7或10支捆成一捆，管口一端用牛皮纸包好扎紧　　⑧、灭菌试管　分装打捆后，直立放于灭菌锅中灭菌灭菌是培养基制备的重要步骤灭菌是否彻底，是培养基制备成功与否的关键初次使用高压灭菌锅时，要事先认真阅读使用说明，并严格按说明操作　　使用高压锅时，先加足水，然后将试管竖立于套桶中，加盖拧好，加热，压好放汽阀当压力表指针升至0．05兆帕时，打开放汽阀，放汽3～5分钟，然后关闭当压力达到0．10～0.12兆帕时，开始计时，并保持这一压力30分钟之后，关闭热源，使锅内压力自然下降当锅内压力降至0后，打开放汽阀放汽放净汽后，打开盖，即可将试管摆成斜面　　⑨、摆放斜面　一般情况下，打开锅后，不宜立即摆放斜面，以免形成过多的冷凝水高温季节开锅自然降温30～40分钟较好，低温季节则20分钟左右为宜　　试管斜面的大小以上限距棉塞3厘米左右为宜斜面摆成后不宜再行摆动斜面固定后，抽取20支试管置于28℃培养箱内恒温培养24～48小时，以检查灭菌效果。

培养后若培养基上无微生物长。