磁珠偶联抗原方法.doc

磁珠偶联抗原活化移取0.5mL（10mg）的BioMagPlus羧基磁珠至15mL尖头离心管内，并放置在磁分离架上直到上清液变完全透彻后，用吸管小心移弃上清加5mLofMES缓冲液充分混匀洗涤.将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清重复Step2,三次.最后一次洗涤后,重悬磁珠于5mL的MES缓冲液中活化试剂（），剧烈振荡摇匀室温下，将离心管置于旋转混匀仪上活化反应30分钟反应过程中，注意不让磁珠沉淀聚积在一起将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清重复Step2,四次蛋白偶联计算需要偶联的蛋白，抗体量.一般地，每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白（抗体）可适量添加一些载体蛋白，如BSAFractionV,增加反应体系中的总蛋白量，从而可以起到一定的封闭作用保证抗体偶联的正确方向将蛋白加至5mLMES缓冲液中吸取50pL蛋白液于950pL的MES缓冲中.配成1：20的稀释液.标记为偶联反应前蛋白液•置于一旁用于后面的偶联率计算将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内，剧烈振荡混匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上偶联反应16-24小时。

将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后•用吸管小心收集上清.标记为偶联后蛋白液，用于计算偶联率重悬磁珠于5mLMES缓冲液中，振荡摇匀将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清重复Step6,一次加5mL的淬灭液，振荡摇匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上30分钟将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后•用吸管小心移弃上清洗涤和贮存偶联后的磁珠加5mL洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后•用吸管小心移弃上清重复Step1,三次最后一次洗涤后,重悬磁珠于2mL洗涤缓冲液内，此时磁珠的浓度约为5mg/mL.置于2-8摄氏度保存0.05MMES配方：2-（N-吗啉代）乙磺酸，用超纯水配制即可。