【最新】保健食品中α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯含量的测定.doc
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中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB xxxx—xxxx2010-××-××发布 1.1.1.1 2010-06-01 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布xxxx-xx-xx 发布 xxxx-xx-xx 实施食品安全国家标准保 健 食 品 中 α -亚 麻 酸 甲 酯 、 二 十 碳 五 烯 酸 甲酯 、 二 十 二 碳 五 烯 酸 甲 酯 和 二 十 二 碳 六 烯 酸甲 酯 含 量 的 测 定GB xxxx—xxxxI前 言本标准为首次发布GB xxxx—xxxx1食品安全国家标准保 健 食 品 中 α -亚 麻 酸 甲 酯 、 二 十 碳 五 烯 酸 甲 酯 、 二 十 二 碳 五 烯 酸 甲酯 和 二 十 二 碳 六 烯 酸 甲 酯 含 量 的 测 定1 范围本标准规定了保健食品中 α-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯（简称 EPA 甲酯，下同） 、二十二碳五烯酸甲酯（简称 DPA 甲酯，下同）和二十二碳六烯酸甲酯（简称 DHA 甲酯，下同）的气相色谱测定方法本标准适用于保健品食品中 α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯含量的测定，不适用于以脂肪酸乙酯为有效成分的保健食品中 α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯含量的测定。
注 1：脂肪酸乙酯型油类制品的物理鉴别见附录 B2 原理样品经酸水解后提取脂肪，其中 α-亚麻酸、二十碳五烯酸（EPA） 、二十二碳五烯酸（DPA） 、二十二碳六烯酸（DHA）经酯交换生成甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量3 试剂和材料除特别规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的二级水3.1 试剂3.1.1 氢氧化钾（KOH） 3.1.2 盐酸（HCl） 3.1.3 无水乙醚（C 2H5OC2H5） 3.1.4 乙醇（CH 3CH2OH）：体积分数≥95％3.1.5 石油醚：沸程 30℃～60℃3.1.6 正己烷（CH 3(CH2)2CH3）：色谱纯3.1.7 甲醇（CH 3OH）：色谱纯3.1.8 无水硫酸钠（Na 2SO4） 3.2 试剂配制3.2.1 氢氧化钾甲醇溶液（0.5 mol/L）：称取2.8 g氢氧化钾，用甲醇溶解并定容至 100 mL，混匀3.3 标准品3.3.1 α-亚麻酸(C 18:3n3)甲酯，纯度≥99.0％3.3.2 EPA(C 20:5n3)甲酯，纯度≥98.5％ GB xxxx—xxxx23.3.3 DPA(C 22:5n3)甲酯，纯度≥98.0％。
3.3.4 DHA(C22:6n3)甲酯，纯度≥98.5％ 3.4 标准溶液的配制3.4.1 脂肪酸甲酯标准储备液：浓度分别为 4.0 mg/mL准确称取 100.0 mg α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、 DHA 甲酯标准物质于 25.0 mL 容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀此溶液应贮存于-18℃冰箱中3.4.2 脂肪酸甲酯混合标准中间液：浓度分别为 1.0 mg/mL分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液 2.50 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀亦为标准曲线最高浓度；临用时配制3.4.3 脂肪酸甲酯标准工作液：分别吸取脂肪酸甲酯中间液 0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、 4.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用正己烷定容此浓度即为 0 mg/mL、0.040mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、1.0 mg/mL 的标准工作液，临用时配制4 仪器与设备4.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID） 4.2 天平：感量为 1 mg 和 0.1 mg。
4.3 旋转蒸发仪4.4 离心机：转速≥4000 r/min4.5 旋涡混合器4.6 恒温水浴锅5 分析步骤5.1 试样制备5.1.1 试样处理5.1.1.1 固体试样准确称取已粉碎混合均匀的待测试样 0.500 g～2.000 g（含待测组分约 5 mg/g～10 mg/g）加入 50 mL 比色管中，加 8 mL 水，混匀后再加 10 mL 盐酸将试管放入 70℃～80℃水浴中，每隔 5 min～10 min 以漩涡混合器混合一次，至试样水解完全为止，约需 40 min～50 min取出试管，加入10 mL 乙醇，混合冷却至室温后将混合物移入 100 mL 具塞量筒中，以 25 mL 无水乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中密塞振摇 1 min加入 25 mL 石油醚，密塞振摇 1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约 5 g）滤入浓缩瓶中再加入 25 mL 无水乙醚密塞振摇 1 min，25 mL 石油醚，密塞振摇 1 min，静置、分层，将有机层经过无水硫酸钠（约 5g）滤入浓缩瓶中，按“再加入 15 mL 无水乙醚……, 静置、分层、过无水硫酸钠”，将全部提取液用旋转蒸发仪于 45℃减压浓缩至有机溶剂挥发完毕。
用正己烷少量多次溶解浓缩物，转移至 25 ml 容量瓶并定容，按 5.1.2 步骤甲酯化处理5.1.1.2 油类制品准确称取混合均匀的油类制品 0.200 g～1.000 g（含待测组分约 10 mg/g～20 mg/g ）至 25 mL 容量瓶中，加入 5 mL 正己烷轻摇溶解，并用正己烷定容至刻度，按 5.1.2 步骤甲酯化处理5.1.2 甲酯化 吸取待测液（5.1.1.1，5.1.1.2）2.0 mL 至 10 mL 具塞刻度试管中，加入 2.0 mL 氢氧化钾甲醇溶液，立即移至漩涡混合器上振荡混合 5 min，静置 5 min，加入 6 mL 蒸馏水，上下振摇 0.5 min，静置分层（若有机相有乳化现象，以 4000 转/分钟离心 10 分钟） ，吸取正己烷层待上机测试用注 2：如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验GB xxxx—xxxx35.2 测定5.2.1 气相色谱参考条件5.2.1.1 色谱柱: 键合/交联聚乙二醇固定相，30 m×0.32 mm, 0.5 µm 或同等性能的色谱柱5.2.1.2 柱温升温程序：起始温度 180 ℃，10 ℃/min 升温至 220 ℃，再以 8 ℃/min 升温至 250 ℃，保持 13 min。
5.2.1.3 进样口：温度 250 ℃；进样量 1 µL，分流进样，分流比 1∶205.2.1.4 检测器：氢火焰离子化检测器（FID） ，温度 270℃5.2.1.5 载气：高纯氮气，流量 1.0 mL/min，尾吹 25 mL/min5.2.1.6 氢气：40 mL/min；空气 450 mL/min5.2.2 色谱分析分别吸取 1 µL 的标准系列各浓度溶液（3.3.3） ，注入气相色谱仪中，可测得不同浓度被测物的响应值峰面积或峰高，以浓度为横坐标，相应的峰面积或峰高为纵坐标，绘制标准曲线同样进样 1 µL 的试样待测液（5.1.2） ，保留时间定性，测得峰面积或峰高，根据标准曲线得到进样液中的组分浓度6 分析结果的表述试样中 α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯含量按式（1）计算………………………………………………………(1)10iiCVXm式中：—试 样 中 α-亚 麻 酸 甲 酯 、 EPA 甲 酯 、 DPA 甲 酯 、 DHA 甲 酯 的 含 量 ， 单 位 为 克 每 百 克 （ g/100g） ；i—由标准曲线查得测定样液中各脂肪酸甲酯的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL ） ；i— 被测定样液的最终定容体积，单位为毫升（mL） ；V— 试样的称样质量，单位为克（g） 。
m以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字各脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数如下：0.9520— α-亚麻酸甲酯与 α-亚麻酸的转换系数0.9557— EPA 甲酯与 EPA 脂肪酸的转换系数0.9592— DPA 甲酯与 DPA 脂肪酸的转换系数0.9590— DHA 甲酯与 DHA 脂肪酸的转换系数7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 8 线性范围和定量限标准浓度的线性范围 0.040～1.0 mg/mL ；当试样量为 0.5 g、定容体积为 25 mL，各脂肪酸的定量限分别为 α-亚麻酸甲酯 0.010 g/100g， EPA 甲酯 0.018 g/100g，DPA 甲酯 0.024 g/100g、DHA 甲酯 0.018 g/100gGB xxxx—xxxx4GB xxxx—xxxx5附录 A图 A.1 α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯标准溶液色谱图图 A.2 检出 α-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA 甲酯、DHA 甲酯的试样溶液色谱图GB xxxx—xxxx6附录 B称取 1 g 样品，加入 1.0 mL 无水乙醇，于漩涡混合器（ 2000 r/min）混匀 30 秒钟，静置，观察油在乙醇中的溶解情况。
如果油样不溶于乙醇，出现明显的油和乙醇分层的现象，则判断此产品为脂肪酸甘油酯型油类制品，可采用本标准进行分析；若静置后，看不见油状液滴，溶解完全且溶液清澈透明，可判断此产品为脂肪酸乙酯型油类制品，不能使用本标准进行分析。
