IC50曲线测试实验流程.doc

IC50即半抑制率，标准曲线就是一个 S型曲线IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的 浓度,半数抑制越低，说明药物对细胞的毒性越高实验操作步骤如下：1. 细胞准备：A. 细胞状态检测：从培养箱中取出细胞，显微镜下观察状态描述：观察结果，细胞汇合度：B. 细胞处理：将细胞培养基吸出后，加入2ml PBS缓冲液洗一次，加入1ml 0、25% Trypsin-EDTA放入培养箱中静置数分钟 直至细胞完全离壁悬浮，加入5ml含10%FBS的培养基（无抗生素）终止酶活，混匀后液体转移至 15ml离心管,1000rpm 离心3min,弃去液体C. 细胞计数：于15ml离心管中加入1ml含10%FBS的培养基（无抗生素）,充分混匀取40ul计数，公式如下：细胞浓度（数/ml）=（4大方格细胞数之与/4）x 104x稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表，根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释细胞数/孔起始浓度（/ml）所需体积（ml）需 20%FBSDMEM (ml)总体积终浓度（/ml）细胞株名D. 稀释细胞2. 将稀释好的细胞用排枪加至 96 / 384孔板：置于培养箱37 C 5%CO2条件下培养24小时，待细胞贴壁后加药。

3. 药物稀释:将药物进行3倍倍比稀释Fig孑倍倍比稀释圏1111尹 尹 評 訂丢弃初始浓度药物潯滋訂培养基4. 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上 ，37C 5%CO2培养箱培养72h5. 荧光素酶检测：将 Celltiter-Glo 与 ddH20 以 1:1 混合，加入细胞板(96 板:20ul/well; 384 板:10ul/well),静置 10min 后,TECANinfiniteF200酶标仪读值6. 分析数据 绘制IC50曲线，寻找IC30,IC50等值7. 验证 IC50:根据IC50曲线找出IC50理论值，分别取1/2倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证附录：Materials for Experime ntNameCorporati on96-well plateCorni ng384-well plateGrei nerCe ntrifugeTube (15ml)BD Falco nPipets(10ml)Grei nerT-25 FlaskCorni ngTips,EP TubeAxyge n, MatrixReage nts for Experime ntNameCorporati onFBSExcellDPBSHyclone0、25%Trypsin-EDTAGIBCOMediumHycloneCell-Titer Glo ?PromegaIn strume nts for Experime ntNameModelCorporatio nInv erted MicroscopeTS100Niko nCO2 In cubatorBB16UVHeraeusBechtopZHJH-1109ZHCHENGCen trifuge5200KUBOTAMicroplate Readerinfinite F200TECANDispe nserpFillBio-Tek。