大肠杆菌o157：h7pcr检测方法的建立及初步应用.doc

预防兽医学专业毕业论文预防兽医学专业毕业论文 [ [精品论文精品论文] ] 大肠杆菌大肠杆菌 O157O157：：H7H7 PCRPCR 检检测方法的建立及初步应用测方法的建立及初步应用关键词：大肠杆菌关键词：大肠杆菌 多重多重 PCRPCR 反应体系反应体系 食品检测食品检测摘要：大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食 源性致病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ， 还可在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡EHEC0157：H7 的感染因具 有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等 特点，已经成为全球性的公共卫生问题我国已将肠出血性大肠杆菌列为 21 世 纪可能对国人卫生健康有重大影响的 12 种病原微生物之一同时，0157：H7 菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军 事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂。

美国疾病预防控制中心（CDC）已将 EHEC0157：H7 菌列为 B 类生物恐怖病原体严加防范近 20 年来给世界各国带 来了巨大影响 本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链 式反应（PCR）以及运用其技术进行检测的研究 首先对其进行微生物学培 养和检测，熟悉大肠杆菌 0157：H7 的基本生物学特性，并掌握用山梨醇麦康凯 培养基（SMAC）初步鉴定 0157：H7 的方法 其次，针对其特异性致病基因 stx1，stx2 和特异性鞭毛基因 flic 设计 3 对引物，建立多重 PCR 反应体系， 进行 PCR 检测，结果表明 3 对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性通过 优化试验条件确定其最适退火温度为 57℃，反应的最佳引物浓度为 1umol/l，DNA 模板 3ul ，并且 6 小时就可以检测出样本是否含有 O157： H7 第三，通过已建立的多重 PCR 检测技术，检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场， 共检测肉类样本 180 份，牛奶样本 72 份，鸡蛋样本 20 份，共检测出肉类样本 5 份，其中春季一份，夏季 4 份，牛奶，鸡蛋，品牌猪牛肉均没有发现 O157： H7 的污染。

正文内容正文内容大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食源 性致病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ， 还可在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡EHEC0157：H7 的感染因具 有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等 特点，已经成为全球性的公共卫生问题我国已将肠出血性大肠杆菌列为 21 世 纪可能对国人卫生健康有重大影响的 12 种病原微生物之一同时，0157：H7 菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军 事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂美国疾病预防控制中心（CDC）已将 EHEC0157：H7 菌列为 B 类生物恐怖病原体严加防范近 20 年来给世界各国带 来了巨大影响 本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链 式反应（PCR）以及运用其技术进行检测的研究。

首先对其进行微生物学培 养和检测，熟悉大肠杆菌 0157：H7 的基本生物学特性，并掌握用山梨醇麦康凯 培养基（SMAC）初步鉴定 0157：H7 的方法 其次，针对其特异性致病基因 stx1，stx2 和特异性鞭毛基因 flic 设计 3 对引物，建立多重 PCR 反应体系， 进行 PCR 检测，结果表明 3 对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性通过 优化试验条件确定其最适退火温度为 57℃，反应的最佳引物浓度为 1umol/l，DNA 模板 3ul ，并且 6 小时就可以检测出样本是否含有 O157： H7 第三，通过已建立的多重 PCR 检测技术，检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场， 共检测肉类样本 180 份，牛奶样本 72 份，鸡蛋样本 20 份，共检测出肉类样本 5 份，其中春季一份，夏季 4 份，牛奶，鸡蛋，品牌猪牛肉均没有发现 O157： H7 的污染 大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食源性致 病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ，还可 在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。

EHEC0157：H7 的感染因具 有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等 特点，已经成为全球性的公共卫生问题我国已将肠出血性大肠杆菌列为 21 世 纪可能对国人卫生健康有重大影响的 12 种病原微生物之一同时，0157：H7 菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军 事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂美国疾病预防控制中心（CDC）已将 EHEC0157：H7 菌列为 B 类生物恐怖病原体严加防范近 20 年来给世界各国带 来了巨大影响 本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链 式反应（PCR）以及运用其技术进行检测的研究 首先对其进行微生物学培 养和检测，熟悉大肠杆菌 0157：H7 的基本生物学特性，并掌握用山梨醇麦康凯 培养基（SMAC）初步鉴定 0157：H7 的方法 其次，针对其特异性致病基因 stx1，stx2 和特异性鞭毛基因 flic 设计 3 对引物，建立多重 PCR 反应体系， 进行 PCR 检测，结果表明 3 对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性通过 优化试验条件确定其最适退火温度为 57℃，反应的最佳引物浓度为 1umol/l，DNA 模板 3ul。

，并且 6 小时就可以检测出样本是否含有 O157： H7 第三，通过已建立的多重 PCR 检测技术，检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场， 共检测肉类样本 180 份，牛奶样本 72 份，鸡蛋样本 20 份，共检测出肉类样本 5 份，其中春季一份，夏季 4 份，牛奶，鸡蛋，品牌猪牛肉均没有发现 O157： H7 的污染 大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食源性致 病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ，还可 在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡EHEC0157：H7 的感染因具 有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等 特点，已经成为全球性的公共卫生问题我国已将肠出血性大肠杆菌列为 21 世 纪可能对国人卫生健康有重大影响的 12 种病原微生物之一。

同时，0157：H7 菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军 事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂美国疾病预防控制中心（CDC）已将 EHEC0157：H7 菌列为 B 类生物恐怖病原体严加防范近 20 年来给世界各国带 来了巨大影响 本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链 式反应（PCR）以及运用其技术进行检测的研究 首先对其进行微生物学培 养和检测，熟悉大肠杆菌 0157：H7 的基本生物学特性，并掌握用山梨醇麦康凯 培养基（SMAC）初步鉴定 0157：H7 的方法 其次，针对其特异性致病基因 stx1，stx2 和特异性鞭毛基因 flic 设计 3 对引物，建立多重 PCR 反应体系， 进行 PCR 检测，结果表明 3 对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性通过 优化试验条件确定其最适退火温度为 57℃，反应的最佳引物浓度为 1umol/l，DNA 模板 3ul ，并且 6 小时就可以检测出样本是否含有 O157： H7 第三，通过已建立的多重 PCR 检测技术，检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场， 共检测肉类样本 180 份，牛奶样本 72 份，鸡蛋样本 20 份，共检测出肉类样本 5 份，其中春季一份，夏季 4 份，牛奶，鸡蛋，品牌猪牛肉均没有发现 O157： H7 的污染。

大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食源性致 病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ，还可 在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡EHEC0157：H7 的感染因具 有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等 特点，已经成为全球性的公共卫生问题我国已将肠出血性大肠杆菌列为 21 世 纪可能对国人卫生健康有重大影响的 12 种病原微生物之一同时，0157：H7 菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛，使之极有可能作为未来军 事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂美国疾病预防控制中心（CDC）已将 EHEC0157：H7 菌列为 B 类生物恐怖病原体严加防范近 20 年来给世界各国带 来了巨大影响 本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链 式反应（PCR）以及运用其技术进行检测的研究。

首先对其进行微生物学培 养和检测，熟悉大肠杆菌 0157：H7 的基本生物学特性，并掌握用山梨醇麦康凯 培养基（SMAC）初步鉴定 0157：H7 的方法 其次，针对其特异性致病基因 stx1，stx2 和特异性鞭毛基因 flic 设计 3 对引物，建立多重 PCR 反应体系， 进行 PCR 检测，结果表明 3 对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性通过优化试验条件确定其最适退火温度为 57℃，反应的最佳引物浓度为 1umol/l，DNA 模板 3ul ，并且 6 小时就可以检测出样本是否含有 O157： H7 第三，通过已建立的多重 PCR 检测技术，检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场， 共检测肉类样本 180 份，牛奶样本 72 份，鸡蛋样本 20 份，共检测出肉类样本 5 份，其中春季一份，夏季 4 份，牛奶，鸡蛋，品牌猪牛肉均没有发现 O157： H7 的污染 大肠杆菌 0157：H7（Escherichia coli0157：H7）为一种危害严重的食源性致 病菌，可使人感染患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC） ，还可 在 5～10％的病例中引发溶血性尿毒综合症（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，。