细胞培养基本方法.doc

1.操作台基本要求：2. 随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20℃或-80℃冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低3.细胞污染：（1）细菌污染（2）酵母污染（3）霉菌污染初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊4）病毒污染一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染5）支原体污染唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影4.抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出5．适合贴壁的细胞和悬浮的细胞 6.基础培养基，减血清培养基，无血清培养基7.PH值：大多数正常哺乳动物细胞系PH为7.4； 成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7） Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长8.温度： 大多数人和哺乳动物细胞系在36℃至37℃最佳 昆虫细胞在27℃为最佳禽类细胞在38.5℃最佳 冷血动物（15℃-26℃）9.动物细胞形态划分：l 成纤维细胞，贴附生长l 上皮样细胞呈多角形，贴附l 淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附l 特殊形态：² I型有长突触² Ⅱ型没有轴突10.细胞增长模式11.何时传代？l 哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（）0.1-0.2PH单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。

l 昆虫细胞PH值会上升但不超过6.412．贴壁细胞的解离13.贴壁细胞的传代 14.贴壁昆虫细胞传代：15.悬浮细胞传代流程 16.细胞冻存：17.冷冻细胞解冻方案：18.利用血球计数器进行细胞计数：19.台盼蓝拒染法：。