第三讲免疫细胞功能测定.ppt

医学免疫学实验病原生物学与免疫学教研室sqjcbwm@Tel:03733831083第三讲第三讲: :免疫细胞功能测定免疫细胞功能测定 主要内容中性粒细胞吞噬功能实验E花环形成实验淋巴细胞转化实验单个核巨嗜细胞吞噬功能实验实验一一中性粒中性粒细胞吞噬功能胞吞噬功能实验【实验目的】 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法 通过本实验理解机体的非特异性免疫机制【实验原理】吞噬作用（phagocytosis）：是指细胞从周围环境摄取固体颗粒（如：微生物或较大的细胞残片）的活动血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分【实验原理】吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细胞（neutrophil）和单核吞噬细胞（mononuclear phagocyte）两类大吞噬细胞吞噬细胞的吞噬细胞的分类分类小吞噬细胞小吞噬细胞 大吞噬细胞来源： 单核巨噬细胞存在部位： 血液（单核细胞)、全身结缔组织及小血管的基底膜组织（巨噬细胞）功能基础： 富含溶酶体及线粒体功能： 吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞反应时间及寿命：反应时间长（48h），寿命长小吞噬细胞来 源： 血液的中性粒细胞存在部位： 血液、炎症部位（全身）功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质功 能：主要吞噬化脓菌反应时间及寿命：反应时间短，数分钟到几小时，寿命短，平均数小时吞噬过程示意图吞噬过程示意图 中性粒细胞的吞噬作用吞噬过程吞噬过程 【实验器材】1、无菌肉汤，白葡菌液，PBS缓冲液，瑞氏-姬姆萨染液2、注射器,解剖器材,玻片,显微镜等【实验方法】1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲形进针)无菌淀粉肉汤2ml，诱导浆液渗出2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，轻揉腹部，让小鼠活动3.取样：注射后30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片4.干燥：室温或者放温箱中完全干燥标本5.瑞氏-姬姆萨染液染色：滴加3滴A液于标本上，以完全盖住标本为宜，染色40秒。

滴加8滴B液，用洗耳球吹出微风使液面产生涟漪，使两液充分混匀，染色5分钟水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）吸水纸拍干水分，干燥6.油镜镜检油镜使用镜油的原理光光线线丢丢失失光线保留光线保留光线保留光线保留油镜的使用方法低倍镜找到视野后，下降载物台，滴加香柏油，调节物镜使用油镜镜头，从侧面观察，用“粗调节器”上升载物台至物镜镜头浸入油内（有些镜头可以伸缩）；从目镜观察，用粗调节器下降载物台，在此过程中可能会有比较清晰的视野一闪而过，此时，立即停止并调节“细调节器”倒回，调整后就可以看到比较清晰的视野 前后左右调节载物台，寻找满意视野 下降载物台，去载玻片，用擦镜纸和擦镜液擦油镜镜头 油镜找视野油镜找视野油镜找细胞油镜找细胞收显微镜收显微镜低倍镜找视野低倍镜找视野 【实验结果】小吞噬大吞噬实验二E花环形成实验实验原理CD2是人T细胞独特的表面标志在一定的条件下，绵羊红细胞（SRBC）与T细胞表面的CD2结合，使SRBC环绕在T细胞的周围，形成玫瑰花样的细胞团 E花环实验原理示意图+ 油镜下油镜下E花环形态花环形态E花环电镜照片【临床意义】E花环形成实验可作为人外周血T细胞的鉴定和计数，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标，也是分离T细胞的常用方法之一 。

E花环形成实验应用最广泛的是总E花环实验（Et）以及活性E花环实验（Ea）【临床意义】E花环形成率= E花环阳性细胞数/总T细胞数×100%正常值为68±9.9%E花环降低：免疫缺陷性疾病、病毒感染 E花环增高：甲亢、慢性肝炎、移植排斥反应 实验三淋巴细胞转化实验 淋巴细胞在体外培养时，当受到非特异刺激物如植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）、美洲商陆（PWM）等有丝分裂原刺激后，转化为淋巴母细胞并且发生特征性的形态变化【【实验原理实验原理】】【实验原理】 转化和未转化淋巴细胞的形态特征体体积（直径（直径μm）：）：6-8；；胞核：不增大，多位于中央；致密胞核：不增大，多位于中央；致密团聚；无核仁；聚；无核仁；无有无有丝分裂；分裂；胞胞浆；；较少；无空泡；无少；无空泡；无伪足足体体积（直径（直径μm）：）：12-16；；胞核：增大，多位于中央或稍偏；胞核：增大，多位于中央或稍偏；较疏松；有或无疏松；有或无核仁；无有核仁；无有丝分裂；分裂；胞胞浆；；较多；有或无空泡；有或无多；有或无空泡；有或无伪足足体体积（直径（直径μm）：）：12-20；；胞核：增大，多偏向一胞核：增大，多偏向一侧；疏松；；疏松；1-4个核仁；偶个核仁；偶见有有丝分裂；分裂；胞胞浆；丰富；有空泡；有；丰富；有空泡；有伪足足淋巴母细胞 lymphocytoblast淋巴细胞转化率转化率转化率＝＝已转化的淋巴细胞数已转化的淋巴细胞数淋巴细胞总数淋巴细胞总数××100100％％临床意义 【正常参考值】 形态学检查法：70%左右 LTT 50%～60%为转化偏低； LTT ＜50%为转化低下。

由PHA刺激而测得的淋巴细胞转化率可反映受试者T细胞总体水平的应答功能临床意义LTT＞正常值，见于Down综合症LTT＜正常值，见于细胞免疫缺陷或功能低下者，如运动失调性毛细血管扩张症、恶性肿瘤、何杰金氏病、淋巴瘤、淋巴肉芽肿等实验报告实验原理实验方法实验结果：绘出大吞噬、小吞噬、E花环、转化后的淋巴细胞镜下图思考题：免疫细胞功能测定的意义有哪些?。