亚临床甲状腺功能减退症稽留流产患者绒毛蜕膜组织中MMP-9、TSP-1的表达及临床意义分析.docx

    亚临床甲状腺功能减退症稽留流产患者绒毛蜕膜组织中MMP9、TSP1的表达及临床意义分析    文丽　杨小燕　张桂丽　张汉英[摘要]目的 探讨亚临床甲状腺功能减退症稽留流产患者绒毛蜕膜组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）的表达及临床意义方法 选择2016年7月～2017年7月在我院妇产科门诊就诊的亚临床甲状腺功能减退稽留流产患者25例为研究组，选择同期于我院就诊的正常妊娠并自愿行人工流产的早孕患者25例为对照组回顾性分析两组的临床资料，比较两组绒毛蜕膜组织中MMP-9阳性表达情况和TSP-1阳性区的积分光密度值（IOD）差异结果 研究组绒毛蜕膜组织中MMP-9表达阳性率为64.00%，低于对照组（88.00%），TSP-1阳性区IOD值（165.48±8.69），高于对照组（123.71±6.23），差异均有统计学意义（P[关键词]亚临床甲状腺功能减退症；稽留流产；绒毛蜕膜；基质金属蛋白酶-9；血小板反应蛋白-1[] R737.9 [] A [] 1674-4721（2018）6（a）-0108-03[Abstract]Objective To investigate the expression and clinical significance of matrix metalloproteinase-9（MMP-9） and thrombospondin-1 （TSP-1） in chorionic and decidual tissues in missed abortion patients with subclinical hypothyroidism.Methods 25 cases of missed abortion patients with subclinical hypothyroidism treated in Department of Obstetrics and Gynecology clinic of our hospital from July 2016 to July 2017 were selected in the study group，and other 25 cases of early pregnant patients for voluntary induced abortion at the same period in our hospital were enrolled in the control group.The clinical data of two groups were retrospectively analyzed，and the MMP-9 positive expression in chorionic and decidual tissues and the integral optical density （IOD） in TSP-1 positive region were compared between the two groups.Results The MMP-9 positive expression rate in the chorionic and decidual tissues in the study group was lower than that in the control group，while the IOD value in TSP-1 positive region was higher than that in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion In missed abortion patients with subclinical hypothyroidism，the expression of MMP-9 in chorionic and decidual tissues decreases significantly while the expression of TSP-1 increases significantly.The above two indexes can inhibit the neovascularization，reduce the invasiveness of trophoblasts and affect the embryo implantation，leading to the occurrence of missed abortion.[Key words]Subclinical hypothyroidism；Missed abortion；Chorionic and decidual；MMP-9；TSP-1稽留流產指妊娠20周内子宫内出现死胎或胎儿死亡后未能及时排出体外的现象，是一种特殊的流产类型[1]。

造成稽留流产的常见原因包括宫内感染、内分泌紊乱、染色体异常、免疫抗体等因素妊娠期亚临床甲状腺功能减退症患者存在代谢异常，可增加不良妊娠结局的发生风险，与流产有一定关联[2]相关文献报道[3]，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）低表达会影响胚胎正常着床和生长发育而血小板反应蛋白-1（TSP-1）高表达则影响胚胎种植，两者在绒毛蜕膜组织中的表达与流产密切相关本研究旨在探究亚临床甲状腺功能减退症稽留流产患者绒毛蜕膜组织中MMP-9、TSP-1的表达水平和临床意义，现报道如下1资料与方法1.1一般资料选择2016年7月～2017年7月在我院妇产科门诊就诊的亚临床甲状腺功能减退稽留流产患者25例为研究组，选择同期于我院就诊的正常妊娠并自愿行人工流产的早孕患者25例为对照组纳入标准：年龄24～35岁，月经基本规律，妊娠天数49～70 d；均为单胎妊娠；经宫腔镜或子宫输卵管造影证实宫腔形态正常，无宫腔粘连等器质性疾病；自愿签署知情同意书排除标准：合并糖尿病、甲亢、肾上腺功能异常等全身疾病者；合并衣原体、支原体等宫腔感染者研究组年龄（28.46±5.47）岁；孕龄（7.36±2.48）周对照组年龄（27.86±5.82）岁；孕龄（7.13±2.27）周。

两组的年龄、孕周等资料比较，差异无统计学意义（P﹥0.05），具有可比性1.2方法①标本采集及处理：两组均在行人工流产手术时收集绒毛蜕膜组织，用0.9%氯化钠溶液冲洗后即刻放置于10%的甲醛溶液中，12～36 h后包埋于石蜡中，4 μm厚度切片，常规HE染色②免疫组化法：将组织切片置于60℃恒温箱中烤片20 min，用二甲苯将切片脱蜡；梯度乙醇脱水后用蒸馏水浸泡，行抗原修复；滴加3%过氧化氢室温孵育20 min以消除内源性过氧化物酶活性；二抗使用免疫组化试剂盒，进行DAB显示，苏木素复染，常规脱水，透明封片③MMP-9阳性评判标准[4]：显微镜下拍照，每张切片于400倍镜下随机选择5个视野，每个视野计数100个细胞；以细胞质中出现明显棕黄色颗粒为阳性细胞，无着色或背景颜色一致则判定为阴性细胞；计算阳性细胞数目，换算成百分数取平均值；根据百分比计分，0%为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分；根据细胞着色强度计算强度得分，无着色为0分，浅棕色为1分，棕褐色为2分，深棕褐色为3分；阳性得分和强度得分相乘得总分，0分为阴性（-），1～3分为弱阳性（+），4～8分为中度阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。

④TSP-1水平测定：计算机图文系统随机选择切片的10个视野（400倍镜下），分析阳性区积分光密度值（IOD）1.3观察指标[5]比较两组绒毛蜕膜组织中MMP-9阳性表达情况和TSP-1阳性区的IOD值1.4统计学方法用统计学软件SPSS 21.0进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义2结果2.1两组绒毛蜕膜组织中MMP-9表达阳性率的比较研究组绒毛蜕膜组织中MMP-9表达阳性率为64.00%，低于对照组（88.00%），差异有统计学意义（P<0.05）（表1）2.2两组TSP-1在绒毛蜕膜组织中表达的比较采用计算机图文系统随机选择绒毛蜕膜组织切片的10个视野（400倍镜下），发现研究组TSP-1阳性区IOD值为165.48±8.69，高于对照组的123.71±6.23，差异有统计学意义（t=19.532，P<0.05）3讨论妊娠期亚临床甲状腺功能减退症患者由于发生内分泌、代谢紊乱可导致流产等不良妊娠结局发生随诊断技术的发展，流产的发现和报道逐渐增多，稽留流产作为一种特殊的流产类型，其发生率也呈上升趋势。

近年来，对于MMP-9、TSP-1与胚胎植入、胚胎发育的关联逐渐引起了临床重视，本研究也就此展开了探讨相关文献表明[6-7]，MMP-9作为一种可参与组织创伤修复、促进新生血管形成的蛋白酶，在人体内分布较为广泛其作为一种活性物质，可与TIMPs这类抑制物结合，共同维持一个动态平衡，参与胎盘形成、植入、宫颈扩张等一系列生殖过程[8]胚胎植入过程与滋养层细胞对子宫内膜的侵入作用息息相关，而MMP-9可降解内膜组织中细胞外基质（ECM），促进胚胎顺利种植[9]ECM组分中存在不同类型的糖蛋白、胶原蛋白等，MMP-9即通过对其的消化作用达到降解ECM，并加强滋养细胞侵袭能力[10]本研究结果显示，研究组绒毛蜕膜组织中MMP-9表达阳性率低于对照组，与蒋德菊等[11]的研究结果基本一致该学者认为，MMP-9及其抑制物均在胚胎滋养层及蜕膜组织合成，两者的平衡和相互调控对基质重建和侵入控制有关键作用相关文献报道称，稽留流产患者的MMP-9在絨毛蜕膜组织中的低表达可降低滋养细胞侵袭力，不利于胚胎着床[12-13]TSP-1作为粘附蛋白家族的成员之一，在抑制血管生成中有重要作用[14-15]胚胎种植及妊娠维持过程中，血管生成素和血管内皮生长因子（VEGF）通过促进血管生成达到稳定妊娠的作用[16]。

而TSP-1可通过对VEGF合成的抑制作用破坏妊娠过程，影响胚胎种植[17]在正常子宫内膜组织中，TSP-1主要存在于血管内皮细胞、腺上皮细胞的胞浆中，在妊娠第1～3 天持续表达，通过激活TGF-β1推动蜕膜化和胚胎种植；至妊娠第6天，TSP-1分泌减少，对血管生成的抑制作用也降低[18]本研究中，研究组TSP-1阳性区IOD值高于对照组，提示稽留流产患者绒毛蜕膜组织中TSP-1表达明显升高，通过抑制血管生成，破坏胚胎植入，进而增加流产风险综上所述，亚临床甲状腺功能减退症稽留流产患者绒毛蜕膜组织中MMP-9表达明显下降，TSP-1表达明显升高，上述两指标变化抑制新生血管形成，降低滋养细胞侵袭力，影响胚胎种植，进而增加稽留流产发生的风险[参考文献][1]李永红，生秀杰.血清VEGF、PAPP-A及P联合测定对早期诊断异位妊娠及稽留流产的临床价值[J].海南医学，2017， 28（19）：3150-3152.[2]夏书琴，贾海琴，王蔼明，等.稽留流产发病因素的研究进展[J].中国医药，2017，12（9）：1438-1440.[3]林秀芝，杨赛敏，冯泽蛟，等.益母草对药物流产引起的子宫异常出血患者蜕膜组织基质金属蛋白酶水平的影响[J].中国生化药物杂志，2016，36（8）：98-100.[4]郭雯娓，李博，肖西峰，等.不明原因早期复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞对滋养层细胞系侵袭功能的影响[J].中华生殖与避孕杂志，2017，37（5）：378-383.[5]冉旭，赖志文.复发性流产蜕膜组织中细胞凋亡与侵。