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染色方法总结AgNOR染色法:1、试剂配制：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存2）AgNOR工作液取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合2、步骤：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2次（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次（5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状B鞭毛染色法:１．试剂配制：甲液：丹宁酸 ５克氯化铁（ＦｅＣｌ3） １．５克福尔马林（１５％） ２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％ １．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3） ２克蒸馏水 １００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。

２．染色方法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色３．注意事项：（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏３）防止水及培养物沾有氯化物４）切忌用接种环涂抹培养物５）载玻片一定要洗净先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀概述：大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase；ß-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。

因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl-ß-D-Galactopyranoside） 是生物化学中常用的一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将X-Gal转化为蓝色的产物，由此用它作为生色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定原始组织β-半乳糖苷酶的活性，从而通过光学显微镜鉴别转染后组织细胞报告基因的存在与否和强弱表现全组织（WHOLE MOUNT或EN BLOC）原位染色第一时间真实反应转染效果，组织形态维持良好，同时后续使用石蜡切片存档保存成为可能主要用途：全组织β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过组织内表达的外源性细菌β-半乳糖苷酶的催化所生成的深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的组织细胞分布，藉此建立一种简单的目测颜色来识别报告基因阳性组织细胞的权威而经典的技术方法该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究其适用于转基因后的人体和动物组织产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳 β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。

β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀X-gal可以做为组织染色剂，可以在所有表达β－半乳糖苷酶（lacz）的植物和动物组织上产生颜色应该是可以用来病毒感染组织切片染色的CCAE染色步骤1、试剂配制：（1）A液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中2）4％副品红液：取盐酸副品红(EM级)1g，溶于蒸馏水20ml内，再加入10m1／L的HCl 5m1，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下于使用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测试，瞬间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的亚硝酸盐3）B液：o．1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml，加入新配制的副品红液3滴，用1moI／L HCl使PH值调至6．3 2、染色步骤：（1）将A.、B二液混合，过滤，加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.（2）切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)（3）流水冲洗。

4）苏木素复染5）空气干燥后封固GGrimelius硝酸银反应法（嗜银反应）: 1、试剂配制：硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升 蒸馏水 87毫升0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升 还原液: 对苯二酚 1克 亚硫酸钠 5克 蒸馏水 100毫升2、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）60℃硝酸银液内3小时（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗（4）入45℃的还原液处理1分钟（5）蒸馏水洗（6）5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)（7）水洗,脱水,透明,封固3、结果：嗜银颗粒呈棕黑色正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断HHID染色法1、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟（3）蒸馏水洗（4）Schiff液中染10分钟（5）自来水洗15分钟至细胞核红色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）（6）蒸馏水洗（7）高铁二胺液 18～24 小时（8）爱先蓝液(pH2.5)染10～20分钟（9）蒸馏水洗（10）脱水,透明,封固2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，此法多用于确定肠化的分型。

HP（硝酸银法）1、试剂配制：（1）醋酸缓冲贮备液，PH3.60.2N醋酸缓冲液，PH3.6 10 ml蒸馏水 240 ml以下各液均用此液配制（2）1 %硝酸银液硝酸银 1 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml （3）2 %硝酸银液硝酸银 0.2 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml（4）5 %明胶液明胶 5 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅 拌5）3 %对苯二酚液对苯二酚 0.3 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml（6）明胶对苯二酚液3 %对苯二酚液 1 ml5 %明胶液 15 ml（7）显影液明胶对苯二酚液 16 ml2 %硝酸银液 3 ml在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用2、操作方法：（1）组织脱蜡至蒸馏水（2）醋酸缓冲贮备液洗2次（3）入1 %硝酸银液中，56℃，1小时（4）切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止5）倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟（6）水洗（7）脱水，透明，封固3、结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色Highman甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）1、试剂配制：甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml2、染色步骤:（1）切片脱蜡至水（2）甲醇刚果红染液染10～20分钟（3）用碱性乙醇分化液分化数秒（4）水洗（5）苏木素复染2分钟（6）水洗（7）脱水,透明,封固3、结果：淀粉样物呈桔红色。

4、类淀粉染色的应用：确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织，后者在刚果红法染色后呈淡桔色，常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等L六胺银染色法1、试剂配制：六胺银液配制：3%六次甲基四胺水溶液 5 ml2.5%硝酸银水溶液 0.5 ml摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5~2 ml加蒸馏水至30~40 ml2、步骤：（1）切片脱蜡至水，蒸馏水洗（2）0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗（3）六胺银液60℃，1-2小时，（或六胺银液80-90℃，半小时左右）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）（4）0.2% 氯化金调色数秒（5）丽春红淡染（6）水速洗（7）烘干，透明，封片3、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色MMallory 三色法1、步骤（1）切片脱蜡至水（2）0.5%酸性复红水溶液1 min（3）蒸馏水洗（4）入下液1-2min苯胺蓝0.5g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸 1g，蒸馏水100ml5）蒸馏水洗（6）95%乙醇分色（7）脱水，透明，封片2、结果：胶原纤维蓝色， 红细胞桔黄色，核红色Mallory磷钨酸～苏木素染色法（PTAH） 1、试剂配制：苏木素 0.1 g 磷钨酸 2.0 g 蒸馏水 100 ml 先将苏木素加热溶于20毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80毫升蒸馏水。

等苏木素冷却后，加入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可使用如急用，可加入0.2 g高锰酸钾,加速其成熟2、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水2）放入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟3）蒸馏水洗4）2.5%草酸漂白5分钟5）蒸馏水洗多次6）置于磷钨酸苏木素溶液12～24小时7）95%酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精，置60℃温箱中烘干8）二甲苯透明，封固3、结果：纤维胶质，肌胶质，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝色胶原，网状纤维和骨基质着黄色或砖红色在工作中常用于观察横纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征Masson 三色染色法、1、试剂配制：丽春红酸性品红液： 丽春红 0.7 g 酸性品红 0.3 g蒸馏水 99ml 冰醋酸 1 ml 苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g 蒸馏水 98 ml 醋酸 2 ml 亮绿液： 亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液 20 ml,加95%酒精10 ml2、染色步骤：（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）苏木素染5～10分钟 （3）盐酸酒精分化（4）流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)（5）丽春红酸性品红液中染5～8分钟（6）蒸馏水洗（7）1% 磷钼酸中染1～3分钟（8）不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)（9）水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固3、结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。

4、注意： （1） 此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的鉴别，也为肾组织活检，观察肾小球病变的重要染色法，常用于观察缺血病变。