实验——总黄酮含量的测定.doc

《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定黄酮类化合物主要指以 2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物其主要结构式如图图 黄酮类化合物分子结构式黄酮类化合物主要结构类型见表表 黄酮类化合物主要结构类型原理黄酮母核中含有碱性氧原子 , 一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物 , 又加入亚硝酸钠和氢氧化钠 , 使在碱性溶液中呈红色，溶液在 510 nm 处有最大吸收，显色反应在 60 min 内稳定用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂， 吸光度与芦丁的浓度呈线形关系， 采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定仪器与试剂新锐 T6 型紫外可见分光光度计； Explrer 型电子天平（ 0.1mg）60%的乙醇溶液； 5%亚硝酸钠溶液； 10%硝酸铝溶液芦丁标准溶液的配制称量 13.2mg 芦丁，用 60%乙醇定容到 25ml 容量瓶作为标准溶液标准曲线的制作准确吸取 0， 0.4 ， 0.8 ， 1.2 ， 1.6 ，2.0 ml 芦丁标准溶液，放入 10 毫升容量瓶内（写明标记），分别加入 2.0 、1.6 、1.2 、0.8 、 0.4 、0 ml 的 60%乙醇溶液；再加入 5%亚硝酸钠溶液 0.5ml 摇匀，放置 6min；加入 10%硝酸铝溶液0.5ml ，放置 6min 后；加入 4%氢氧化钠溶液 4.0ml ，加 60%乙醇定容，摇匀后，放置 15min；（扫描找到最大吸收） 在 510nm处测定吸光度。

用 0.0ml 作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标， 纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度， 作标准曲线 总黄酮提取与测定和计算称取 0.6 —0.8g 样品粉末，加入 60ml60%乙醇放于 100ml 圆底烧瓶内，置于水浴锅上， 70℃条件下回流提取 60min过滤、定容于 100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整） 1.0ml ，放入 10 毫升容量瓶内（写明标记），用 60%乙醇加到 2.0ml ；加入 5%亚硝酸钠溶液 0.5ml 摇匀，放置 6min；加入 10%硝酸铝，溶液 0.5ml ，放置 6min 后；加入 4%氢氧化钠溶液 4.0ml ，摇匀后，加 60%乙醇定容，放置 15min；在 510nm处测定吸光度根据标准曲线计算总黄酮的含量总黄酮含量 =A100×稀释倍数MA 为标准曲线中的含量例如：测得的吸光度 =0.504 Y=0.0101x+0.0017A= Y 0.0017 = 0.504 0.0017 =49.730.0101 0.0101M为样品的质量 (mg)。