促渗剂对青蒿琥酯贴剂体外经皮吸收的影响.doc

1促渗剂对青蒿琥酯贴剂体外经皮吸收的 影响作者：邱琳,王乃婕,杜丰,梁秉文,叶祖光【摘要】 目的 考察几种促渗剂对青蒿琥酯体外经皮吸收的影响,为青蒿琥酯贴剂的开发提供参考方法 采用 TK-6A 型透皮扩散仪,以 SD 大鼠腹部皮肤为透皮屏障,测定含有不同浓度促渗剂的青蒿琥酯贴剂的累计透过量和经皮渗透速率结果 各促渗剂对青蒿琥酯促渗作用大小依次为：油酸(OA)＞N-甲基吡咯烷酮(NMP)＞丙二醇(PG)＞氮酮(Azone)＞己二酸二异丙酯(IPA)NMP 和 OA 的促渗作用呈浓度依赖性,IPA 和 PG 的促渗效果不随浓度的升高而增强,处方中高浓度的 IPA 和PG 反而会抑制青蒿琥酯的透皮吸收结论 10%OA 对青蒿琥酯的促渗作用最显著 【关键词】 青蒿琥酯；贴剂；经皮吸收；促渗剂；大鼠Abstract：Objective To investigate the effect of penetration enhancers on the percutaneous absorption of artesunate, and provide a reference for the development of artesunate transdermal delivery systems. Methods Penetration enhancers (in different concentrations) were incorporated into a 25% w/w artesunate matrix patch formulation. Modified Franz diffusion chambers and SD rat abdominal skin were used for in vitro skin permeation studies, the transdermal flux and permeation rate of artesunate in vitro were determined by HPLC. Result The enhancing effectiveness of the enhancers decreased in the order：OA＞NMP＞PG＞Azone＞IPA. Skin permeation was significantly enhanced by increasing the loading concentration of OA or NMP, larger IPA amount (8%) or PG amount (20%) could inhibit the permeation of artesunate. Conclusion Oleic acid was found to be the most efficient enhancer for artesunate, 10% is the most effective concentration.Key words：artesunate；transdermal delivery system；percutaneous absorption；penetration enhancers；rat青蒿琥酯(Artesunate)为常用的抗疟药,在临床上对抢救和治疗脑型疟和恶性疟等2疗效显著,目前研究还发现其具有平喘、治疗弓形虫病、抗肿瘤、免疫调节等作用。

青蒿琥酯多采用口服、肌肉注射、静脉注射给药,由于体内代谢迅速,消除半衰期很短,临床需要多次给药,才能有效降低复燃率,给患者带来很多不便,而透皮贴剂可以避免这些不利因素本研究考察了不同促渗剂对青蒿琥酯透皮行为的影响,为青蒿琥酯透皮贴剂的研究和开发奠定基础1 材料1.1 动物SD 雄性大鼠,体重 200 g 左右,北京维通利华实验动物技术有限公司1.2 药物和试剂青蒿琥酯,批号 061118,重庆华立武陵山制药有限公司；聚丙烯酸酯压敏胶(国民淀粉 5 号,美国国民淀粉公司提供)；氮酮(Azone,药用,湖北南星化工总厂)；油酸(OA,药用,德国 APPLICHEM)；丙二醇(PG,药用,云南省玉溪市天山化工有限公司)；己二酸二异丙酯(IPA,国际特品公司提供)；棕榈酸异辛酯(IOP,国际特品公司提供)甲醇为色谱纯,水为自制超纯水,其他试剂均为分析纯1.3 仪器涂布机(T2000L)；改良 Franz 扩散池(TK-20A)；安捷伦高效液相色谱仪(Agilent 110)2 方法与结果2.1 贴剂的制备3称取处方量丙烯酸酯类压敏胶,按处方量加入青蒿琥酯及促渗剂,混匀搅拌,真空脱气控制涂布厚度为 0.7 mm,使含药压敏胶均匀涂布在保护膜上,在 50 ℃下干燥 60 min,冷却后压覆背衬膜,备用。

2.2 贴剂的体外经皮渗透试验2.2.1 离体皮肤的制备SD 大鼠脱颈处死,剃除腹部皮肤毛,剥取腹部皮肤,小心去除皮下组织,生理盐水清洗后,用保鲜膜包好,置冰箱冷冻保存备用2.2.2 透皮试验将预处理皮肤置于扩散室与接受室之间(角质层面向扩散室),在角质层表面贴上药贴,固定好在接收室中加入 20%乙醇生理盐水约 6 mL,液面恰与皮肤内层接触,开动电磁搅拌器(约 400 r/min)和恒温维持在(37±0.5)℃,在设定的时间(2、4、6、8、24 h)取样,每次取完,补充相同体积的新鲜接收液样品 0.45 μm 微孔滤膜过滤,用紫外分析方法检测浓度,计算累计透过量：Q＝[Cn×V＋∑C(n-1)×V]/AQ：单位面积累积释放量；V：接收液体积；A：扩散池口面积；Cn：第 n 次取样的浓度以药物稳定透过皮肤时的累积透过量 Q 对时间 t 线性回归所拟合直线的斜率即为经皮渗透速率(dQ/dt)μg/(cm2·h)2.3 接收液样品处理和检测方法的建立[1-2]42.3.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.01 mmol/L KH2PO4(48∶52,稀磷酸调 pH 值至 3.0)；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：25 ℃。

在该条件下青蒿琥酯与其他成分能达到基线分离,色谱图见图 1 2.3.2 溶液的制备①对照品溶液：取青蒿琥酯对照品 50 mg,精密称定,置 50 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液Ⅰ(每 1 mL 含青蒿琥酯 1.04 mg)精密吸取 1.0 mL贮备液Ⅰ于 10 mL 量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液Ⅱ(每 1 mL 含青蒿琥酯 104 μg)；②供试品溶液：取青蒿琥酯贴剂,按“2.2.2”项下方法进行体外透皮试验,取接收液,用 0.45 μm 微孔滤膜滤过,既得供试品溶液2.3.3 阴性对照试验取不含青蒿琥酯的空白贴片,按照“2.3.2”项下供试品溶液制备方法操作,得阴性对照溶液对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液在“2.3.1”色谱条件下进样分析结果表明,阴性对照液在青蒿琥酯色谱峰位置处无相应峰出现见图 12.3.4 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液Ⅱ,用接收液定容,配置一系列不同浓度的溶液(20.8、41.6、62.4、83.2、104 μg/mL)分别吸取上述溶液各 20 μL,按“2.3.1”项色谱条件进样分析,记录峰面积以青蒿琥酯峰面积为纵坐标,浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：Y＝0.921 2X－0.28(r＝0.999 9,n＝3)。

结果表明,青蒿5琥酯在 20.8～104 μg/mL 范围内线性关系良好2.3.5 精密度试验精密吸取供试品溶液 20 μL,注入液相色谱仪,测定青蒿琥酯峰面积值,并重复进样 6 次结果 RSD 为 0.54%2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于 0、4、8、12、24 h 进样测定结果表明,样品供试液在 24 h 内稳定2.3.7 回收率试验用阴性对照溶液配制低、中、高浓度(41.6、62.4、83.2 μg/mL)3 种水平的青蒿琥酯溶液,每种浓度各做 3 个样品精密吸取上述溶液 20 μL,注入液相色谱仪,测定青蒿琥酯峰面积积分值以下述公式计算回收率9 份平均回收率为98.59%,RSD＝3.53%,说明本法回收率符合规定2.4 己二酸二异丙酯对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 25%,调节压敏胶用量,使IPA 在系统中的含量分别为 2%、4%、6%、8%,考察 IPA 用量对青蒿琥酯透皮的影响结果 4%IPA 对青蒿琥酯的促渗效果最好,处方中高浓度 IPA(8%)对青蒿琥酯的透皮有抑制作用见表 1表 1 IPA 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)62.5 N-甲基吡咯烷酮对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 25%,调节压敏胶用量,使 N-甲基吡咯烷酮(NMP)在系统中的含量分别为 2%、4%、6%、8%,考察 NMP 用量对青蒿琥酯透皮的影响。

结果 NMP 对青蒿琥酯有明显促渗作用,且其对青蒿琥酯的促渗作用随着浓度的升高而增强见表 2表 2 NMP 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)2.6 油酸对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 25%,调节压敏胶用量,使OA 在系统中的含量分别为 5%,10%,考察 OA 用量对青蒿琥酯透皮的影响结果OA 对青蒿琥酯促渗作用明显,其对青蒿琥酯的促渗作用随着浓度的升高而增强见表 3表 3 OA 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)2.7 卡必醇对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 15%,调节压敏胶用量,使卡必醇(Transcutol)在系统中的含量分别为 10%、20%,考察 Transcutol 用量对青蒿琥酯透皮的影响结果 Transcutol 对青蒿琥酯没有明显促渗作用,甚至有抑制作用见表 4表 4 Transcutol 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)2.8 丙二醇对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 15%,调节压敏胶用量,使 PG在系统中的含量分别为 10%、20%,考察 PG 用量对青蒿琥酯透皮的影响。

结果7PG10%对青蒿琥酯的促渗作用明显,而当 PG 浓度从 10%提高到 20%,PG 的促渗作用变弱见表 5表 5 PG 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)2.9 其他促渗剂对青蒿琥酯透皮的影响以丙烯酸酯类压敏胶作为基质,固定青蒿琥酯含量为 25%,调节压敏胶用量,使系统中含 Azone 3%,IOP 5%,考察这 2 种促渗剂对青蒿琥酯透皮的影响结果3%Azone 对青蒿琥酯的促渗作用较好见表 6表 6 Azone 和 IOP 对青蒿琥酯累计透过量和经皮渗透速率的影响(略)3 讨论综合比较各促渗剂对青蒿琥酯经皮渗透速率的影响, 10%OA 对青蒿琥酯的促渗作用最强,各促渗剂对青蒿琥酯促渗作用大小依次为：OA＞NMP＞PG＞Azone＞IPA,NMP 和 OA 的促渗作用呈浓度依赖性IPA 和 PG的促渗效果不随浓度的升高而增强,处方中高浓度的 IPA 和 PG 反而会抑制青蒿琥酯的透皮吸收可能由于青蒿琥酯在 IPA 和 PG 中溶解性较好,低浓度的 IPA和 PG 能提高药物在基质中的溶解度,药物被动扩散的浓度梯度提高而使药物透皮速率增加；而高浓度的 IPA 和 PG 改变了药物在基质和皮肤两界面的分配系数,使基质对药物的亲和性增加,皮肤表面药物浓度下降,从而药物透皮速率下降。

同理,Trancutol 会抑制青蒿琥酯的透皮也可能是类似的原因参考文献】[1] 侯海霞,周莉玲,李 锐.经皮给药系统对青蒿琥酯吸收的影响研究[D].广州：广州中。