红景天标准汤剂制备及质量标准研究.docx

红景天标准汤剂制备及质量标准研究 杨明爽 边雨 曲佳乐 高陆【摘 要】 目的：制备红景天标准汤剂，并建立其质量标准，为红景天配方颗粒的质量控制提供参考依据方法：按照标准汤剂的制备要求，制备十五批不同产地红景天标准汤剂以红景天苷作为定量检测指标，计算其出膏率及转移率，采用高效液相色谱法建立标准汤剂指纹图谱，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》 软件进行指纹图谱分析结果：红景天标准汤剂平均出膏率为24.82 %;红景天苷平均转移率为48.45%，红景天标准汤剂指纹图谱共有11个共有峰，指认出红景天苷、酪醇2种成分十五批红景天标准汤剂相似度均大于0.90結论：红景天标准汤剂制备规范，建立的指纹图谱方法简便有效，为红景天标准汤剂质量控制提供了较全面的信息关键词】红景天标准汤剂;红景天苷;指纹图谱;转移率;出膏率R917 【文献标志码】 A 1007-8517（2021）19-0022-05Study on Preparation and Quality Evaluation of Rhodiola crenulata Standard DecoctionYANG Mingshuang BIAN Yu QU Jiale GAO Lu*Jilin Modern Chinese Medicine Engineering and Research Center Co.，Ltd.，Changchun 130012，ChinaAbstract：Objective To prepare Rhodiola crenulata standard decoction and establish the quality standard， and provide reference for quality control of Rhodiola crenulata formula granules. Methods Fifteen batches of Rhodiola crenulatas tandard decoction were prepared according to the standardization method. With salidroside as the detection index， the transfer rate and extractum rate were calculated and the HPLC chromatograms was established. Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM （2012） was used to analyze and compare the fingerprint. Results The average extractum rates of Rhodiola crenulata standard decoction were 24.82%， and average transfer rates were 48.45%，eleven common peaks were determined and two were identified. The similarity evaluations were carried out on 15 batches of Rhodiola crenulata standard decoction， and their similarities were all greater than 0.90. Conclusion The preparation method of Rhodiola crenulata standard decoction is standart， the established fingerprint method is simple and effective， and provides comprehensive information for the quality control of Rhodiola crenulata sformula granules.Key words：Rhodiola crenulata Standard Decoction; Salidroside; Fingerprint; Transfer rate; Extractum Rate红景天是景天科植物红景天Rhodiola crenulata（Hook. f. et Thoms. ）H. Ohba的干燥根和根茎。

主要分布西藏、四川、云南等西部地区[1]中国古代第一部医学典籍《神农本草经》，将红景天列为药中上品化学成分主要有酚类、萜类、黄酮类、苷类、木质素类等，其中酪醇和红景天苷被认为是红景天的主要药理活性成分[2]红景天具有很高的药用价值，具有抗辐射、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力等功效[3-4]传统汤剂存在服用、存储、携带不便等问题中药配方颗粒和传统汤剂相比具有质量稳定、疗效可靠、便于携带、服用方便、便于保管等优势[5-7]依据国家药典委员会发布的《中药配方颗粒质量控制与标准汤剂技术要求（征求意见稿）》，将标准汤剂作为衡量中药配方颗粒是否与汤剂基本一致的标准参照物，以保障临床用药的准确性和剂量的一致性[8-9]本研究旨在开展红景天标准汤剂制备及质量标准研究，为配方颗粒后续生产及质量控制提供参考依据1 材料1.1 仪器 Ultimate3000型高效液相色谱仪（美国Thermo公司）;JY2003电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）;JY-8多锅煎药机（山东青州精诚医药设备制造有限公司）;Scientz-30F冷冻干燥机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;SB-1200D 型超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）1.2 药品与试剂 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，来自Fisher公司，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

对照品：红景天苷对照品（批号110818-20160705，纯度：98.8%），酪醇对照品（批号 111676-200602）均来自中国食品药品检定研究院;样品：共收集红景天饮片十五批，其中西藏7批;新疆4批;甘肃2批;河北2批;包含了红景天的道地产区和主产区2 方法与结果2.1 标准汤剂的制备 按照《中药配方颗粒质量控制与标准汤剂技术要求（征求意见稿）》的技术要求确定制备方法：取红景天饮片100 g，加水煎煮2次，第一次加9倍水浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸60 min，用200目濾布过滤，第二次加7倍水煎煮，武火煮沸，文火保持微沸40 min，过滤，合并滤液;采用减压浓缩方法进行低温浓缩，温度不超过50 ℃，浓缩至100 mL;将浓缩液置于培养皿，-56 ℃冻存12 h 后冷冻干燥，即得红景天标准汤剂干粉2.2 红景天苷含量测定 参照2015版《中国药典》[10]红景天药材项下红景天苷含量测定方法中流动相体系，进行了供试品溶液制备及相关方法学考察，确定检测方法如下2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水溶液（15∶85）为流动相;检测波长为275 nm。

色谱图如图1所示2.2.2 对照品溶液的制备 取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含红景天苷0.50 mg的溶液2.2.3 供试品溶液的制备 取红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得2.2.4 方法学考察2.2.4.1 线性关系的考察 精密称取红景天苷对照品4.68 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.4680 mgmL-1的红景天苷对照品贮备液量取六份对照品贮备液各1 mL，分别加入0 、1 、2 、3 、4 、5 mL甲醇，摇匀，配制成浓度分别为0.4680、0.2340、0.1560、0.1170、0.0936、0.0780 mgmL-1的对照品溶液，精密吸取5 μL，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=21.666 x+0.2354，r=0.9993，结果表明，红景天苷进样量在0.39 ～2.34 μg范围内线性良好2.2.4.2 精密度试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL。

按“2.2.1” 项下色谱条件测定，连续进样6次，结果红景天苷峰面积RSD=0.85%，表明仪器精密度良好2.2.4.3 重复性试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备6份供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL按“2.2.1” 项下色谱条件测定，测得同一批标准汤剂干粉中红景天苷的含量均值为1.59 %，RSD =1.29%（n=6），表明方法重复性良好2.2.4.4 稳定性试验 取同一批（编号S1）红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL按“2.2.1” 项下色谱条件测定，分别在制备后放置0、4、8、12、16、20 h进样检测，结果红景天苷峰面积RSD=1.04%（n=6），表明供试品溶液在20 h内是稳定的2.2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的红景天苷标准汤剂干粉（编号S1），约0.125 g（共6份），精密称定，分置25 mL容量瓶中，分别精密加入一定量的红景天苷对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.2.1”色谱条件进行液相分析。

结果，平均回收率为101.41%，RSD为1.54%（n=6），表明本方法准确度良好2.2.5 指标成分含量测定 按照“2.2.1”项下色谱条件测定十五批标准汤剂中红景天苷的含量，并计算红景天苷转移率结果见表2结果，十五批标准汤剂平均出膏率为24.82%，按照均值加减30%的范围浮动为17.37%～32.27%;标准汤剂中红景天苷平均含量为1.81%，按照均值加减30%的范围浮动为1.26%～2.35%;红景天苷平均转移率为48.45%，按照均值加减30%的范围浮动为33.92%～62.99%，本研究的十五批标准汤剂出膏率、红景天苷含量及转移率均在此范围内，表明制备工艺规范，稳定、可行2.3 指纹图谱研究2.3.1 色谱条件 色谱柱为Aglient C18（4.6 mm150 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）为流动相;梯度洗脱，0～20 min，5%～10%乙腈;20～75min，10%～20%乙腈;75～120 min，20%～30%乙腈检测波长为275 nm，流速为1.0 mLmin-1，柱温为25 ℃此色谱条件下，各色谱峰的分离度良好，峰形对称色谱图如图2所示。

2.3.2 混合对照品溶液的制备 取红景天苷、酪醇对照品适量，加入甲醇制成每1 mL含红景天苷0.500 mg、酪醇0.686 mg，即得混合对照品溶液2.3.3 供试品溶液的制备 称取红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得2.3.4 方法学考察2.3.4.1 精密度试验 取同一批红景天标准汤剂干粉约0.25 g，精密称定，按照“2.3.3”方法制备供试品溶液。