甾体皂苷类成分提取分离方法.docx

甾体皂苷提取分离方法调研报告甾体皂苷( steroidal saponins) 是天然产物中一类重要的化学成分,大多 都具有一定的生理活性,在天然产物化学研究中日趋活跃据不完全统计,超过90 个科的植物含有甾体皂苷,尤以单子叶植物的百合科、石蒜科、薯蓣科和龙舌兰 科等植物报道最多由于含甾体皂苷成分的动植物药有相当的疗效所以,人们 在应用和研究方面越来越广泛例如: Dracaenadraco 被用于抗腹泻和止血［1］ , 蒺藜用于治疗眼病、浮肿、腹胀、高血压、皮癣和气管炎［2］, Chlorophytum malayense对肿瘤有潜在的细胞毒活性⑶，A gave american有通便和利尿的作 用⑷，Solanum nigrum在中国和日本用于对各种癌症的治疗⑸，白首乌民间用于 滋补药膳，是一种有前途的抗衰老药物［6］，虎眼万年青民间用于抗肿瘤［7］，西陵知 母用于治疗烦热消渴，骨蒸劳热，肺热咳嗽等［8］本文就甾体皂苷的提取分离方法 做一简单综述甾体皂苷类化合物由于连有糖残基， 一般有较强的极性， 易溶于水、甲醇、 乙醇等极性溶剂， 不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂甾体皂苷不易形成结晶(苷 元例外)， 且有时结构相似，给分离带来一定困难。

甾体皂苷提取分离基本步骤 为粗提、除杂、分离1、提取目前， 实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取也有用水作为溶剂的， 如：Jianying zhang 等用80 - 85°C 的水从Anemarrhena asphodeloides 的根状 茎中提取到六种甾体皂苷［9］也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草 药原料， 然后用乙醇为溶剂加热提取， 冷却提取液， 多数甾体皂苷由于难溶于 冷乙醇而作为沉淀析出［10］2、除杂方法 无论是用水还是醇作为溶剂提取所得到的皂苷，多还包含许多杂质， 如无机 盐、糖类、鞣质、色素等， 尚需要进一步精制2.1 液液萃取法这是一种最普遍的皂苷除杂方法， 利用皂苷一般极性较大， 易溶于水而其 中的一些杂质极性较小易溶于非极性溶剂的性质来去除一些脂溶性的杂质一般 的操作是将醇提取液减压浓缩得到的浸膏， 悬浮于水中， 依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇进行梯度萃取,甾体皂苷一般存在于正丁醇层, 减压回收正丁醇后得 总皂苷2.2 沉淀法在含甾体皂苷的甲醇或乙醇液中倒入大量的乙醚或丙酮, 可将皂苷类化合 物沉淀出来进一步利用过滤或离心的方法即得总皂苷, 反复利用这种沉淀法可 达到初步纯化的效果。

也可利用皂苷会与胆甾醇形成沉淀的特性进行初步纯化 皂苷溶于乙醇, 加胆甾醇的乙醇溶液沉淀,过滤, 沉淀干燥后置于索( soxhlex) 提取器中用苯回流, 不溶物为皂苷, 苯液浓缩后可回收胆甾醇2.3吉拉德(Girard)腙法吉拉德试剂T或P在一定条件下，可与含羰基的甾体皂苷元生成腙，而与 不含羰基的甾体皂苷元分离通常先将粗甾体皂苷元溶于少量乙醇, 再加入吉拉 德试剂T或P,并加乙酸使达10%的含量，水浴加热或室温下放置后，加水稀释， 加入乙醚萃取除去不含羰基的皂苷元， 在水相中加入盐酸使羰基皂苷元形成的 吉拉德腙水解， 即可得原羰基皂苷元2.4 大孔吸附树脂法大孔吸附树脂多为苯乙烯或2-甲基丙烯酸酯型， 理化性质稳定， 不溶于水、 酸、碱及常用有机溶剂根据其结构单元不同分为各种型号， 常用的如: D101 型、DA- 201型、Diaion HP- 20型、AB- 8型等［⑴舒孝顺等用大孔树脂分离 菝葜总皂苷，从HPD100、HPD300、HPD600、及D101四种大孔树脂中筛选出HPD100 非极性树脂， 研究结果表明该树脂对于本体系中的总皂苷具有吸附快解吸较易、 流体流动性能好、操作简单和周期短等优势［12］。

在用大孔树脂获得较为精致的总 皂苷后， 为进一步获得皂苷单体， 一般还需采用其他的色谱方法3、分离方法甾体皂苷亲水性较强， 有些皂苷极性非常接近， 以上述方法分离纯化， 难以 获得单体化合物， 所以皂苷经过一定的纯化后， 常采用不同的色谱法分离甚至 反复经过色谱法分离， 才能获得单体成分总皂苷的分离主要是采用柱色谱技 术填料以硅胶为主，另外有葡聚糖凝胶(如Sephadex LH-20)，烷基键合硅胶 (ODS)等Sephadex LH-20适合于分子量相差大的化合物的分离,ODS对极性大 的化合物分离效果较好在柱分离模式上，有常压色谱、中压色谱(MPLC)和高 压色谱（HPLC）HPLC法用于分离高极性、大分子量及结构相似的甾体皂苷有着 突出的优点3.1 制备薄层层析法方法与薄层层析相同, 只是增加薄层吸附剂厚度来增加其载药量,与柱层析 相比,分离效果更好,能用来制备较纯的皂苷,但制备量最大仍只能达到几百毫 克3.2 硅胶柱层析法硅胶柱层析是一种传统的分离方法, 目前在甾体皂苷的分离工作中仍被广 泛应用如: 陈梦菁通过多次硅胶柱层析, 从四川蜘蛛抱蛋中分离到了三种甾体 皂苷［13］林厚文等运用反复硅胶柱层析从中药玉竹中分离到了四个甾体皂苷［14］。

分离时经常采用氯仿- 甲醇- 水三元溶剂体系在氯仿- 甲醇溶剂体系中加入适 量的水, 可克服皂苷类化合物进行硅胶色谱分离时产生的拖尾现象, 获得更好 的分离效果3.3 反向硅胶柱层析法 近年来反向键合相得到广泛应用使用最多的预填充反向硅胶柱主要Lichroprep Rp- 8 （Merck,60-80%甲醇洗脱）和 Lobar Rp- 8（Merck,60- 80%甲 醇 洗脱），常使用的反向多孔聚合物有DIAI0NHP-20、KogelBG4600（以不同比例的 甲醇和水洗脱）陈昌祥等从云南大理产的蜘蛛抱蛋根茎甲醇提取物中, 先经硅 胶柱层析，再经硅胶H柱层析，洗脱部分经Rp- 8反向柱层析得到两种甾体皂 苷［15］Toshihiro Inoue 等从Dichelostemma Multiflorum 的块茎中通过ODS 反 向硅胶柱层析和硅胶柱层析得到三种新的甾体皂苷和两种已知的皂苷［16］3.4 葡聚糖凝胶色谱法葡聚糖凝胶是由平均分子量一定的葡聚糖及交联剂（ 如含氧氯丙烷） 以醚 桥的形式互相交联聚合而成的三维空间网状结构利用凝胶吸水后能形成凝胶粒 子, 在其交联键的骨架中有许多大小的网眼, 使进入凝胶内部的分子和不能进 入凝胶内部的分子进行分离。

常用的凝胶有sephadexLH-20、G- 10、G- 25等 Robson,R.B 等从Smilax Officinalis 的根状茎中应用Sephadex LH- 20 成功得 到三种甾体皂苷［17］周小平等由分蘖葱头的乙醇提取物经葡聚糖凝胶和硅胶柱色 谱分离得到四个甾体皂苷类化合物［18］3.5高效液相层析法(HPLC)中压液相层析(MPLC)和低压液相层析(LPLC)采用不同的压力，调整流动相的流速，具有很 好的分离效果HPLC在甾体皂苷的分离工作中应用得最为广泛Mitsue Haraguchi 用硅胶柱层析、MPLC、HPLC 法从Cestrum sendtenerianum 的叶中得 到了五种甾体皂苷［19］董梅、吴立军等从黄山药的根茎95%乙醇提取物通过硅胶 柱色谱和HPLC分离得到三个甾体皂苷a3.6 其它柱色谱法除硅胶柱色谱外，目前也有采用中性氧化铝、氧化镁为吸附剂，用混合溶剂 洗脱，可以精制皂苷，高伟华等用氧化镁吸附杂质后，再用氧化铝-大孔树脂混 合柱净化处理样品，再用硅胶柱色谱进行分离纯化，得到较纯的皂苷3.7 结晶法Masaki Itabashi从Furcraea foetida的干燥叶片中用结晶法得到了一种 具有生物活性的甾体皂苷［21］。

在实验中， 通常是几种分离方法相互结合， 最终才 能得到纯度较高的甾体皂苷Mimaki,Y•等从Cordyline stricta新鲜叶中依次 经过硅胶柱层析、DiaionHP-20、0DS硅胶层析、分配型硅胶层析、HPLC和TLC, 最终得到了三个甾体皂苷［22］ Satou，tadaaki 利用硅胶柱层析、 TLC、 ODS 硅胶 柱层析、Sephadex LH- 20、Diadion HP-20> HPLC 从Lilium martaqon 的新鲜 茎中得到二种新的甾体皂苷［23］3.8 膜技术膜技术使用微滤膜、超滤膜、纳滤膜来分离得到物质，具有高效、过程基本 无相变、可在常温下运作及工艺简单、操作方便、投资省等优点，已成为一项新 兴的用于澄清、分离和浓缩等方面的绿色节能技术通过膜技术来分离纯化甾体， 可实现常规方法不能实现的分离效果3.9高速逆流色谱法(HSCCC) 高速逆流色谱是一种不用固态支撑体或载体的液液分离色谱和能实现连续 有效分离功能的实用新型分离技术液滴逆流层析法分离效能高，有时可将结构 极其相近的成分分开，近年来广泛用于分离纯化皂苷，其主要优点是没有固体吸 附剂，不存在被分离物质的不可逆吸附，因此对分离纯化微量且生理活性很强的 化合物尤其是极性化合物特别有意义。

结语综上所述,目前实际生产提取富集甾体皂苷类化合物采用的仍主要是煎煮、 回流提取，联合利用超滤技术或大孔吸附树脂等措施纯化近年来随着反相以及 中高压色谱的普遍使用，甾体皂苷提取分离技术取得了很大的进步,这些进展促 进了皂苷结构、药理、药效等方面的研究随着现代仪器分析的不断开发,提取 分离技术不断进步,甾体皂苷乃至皂苷类化合物的研究必将成为天然药物化学中 更加诱人和更有潜力的领域参考文献[1] Akihito Y, Yoshihiro M , Yutaka. Steroidal saponins from Dracaena surculosa [J ]. J Nat Prod , 2000 , 63 :1239-1243[2] Yi-Xin X,Hai-Sheng , Hua-Qing L ,et al. Three new Saponins from Tribulus terrest ris [J ]. Planta Med. 2000 , 66 (6) :545-550[3] Sheng-Xiang Q , Xing-cong L , Yansan X, et al . Isolation and Characteriza2 tion of Cytotoxic Saponin Chloromaloside A from Chlorophytum malayense [J ]. Planta Med , 2000 , 66 (6) :587-590[4] Akihito Y, Yoshihiro M , Minpei K, et al . A new steroidal saponin from the leaves ofA gave americana[J ]. Planta Med ,2000 , 66 (4) :393-396[5] Tsuyoshi I , Hidetsugu T , Toshihiro N. Steroidal Oligoglycosides from Solanum nigrum [J ]. Chem. Pharm. B ull , 2000 ,48 (7) :1062-1064⑹ 张如松，叶益萍，刘雪莉.白首乌甾体皂苷的体外抗肿瘤作用J ].中草药， 2000 ,31 (8) :599-601[7]徐暾海，徐雅娟，刘大有，等.虎眼万年青的化学成分J ].药学学报,2000,35 (1) :32-36⑻洪永福，张广明，孙连娜，等.西陵知母中甾体皂苷的分离与鉴定J ]•药学 学报， 1999 ，34 (7) :518-521[9] Jianying Zhang ， Zhiyun Meng ， Mei。