第十五章杂环类药物的分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,第五节 苯并二氮杂卓类药物的分析,环庚三烯,草,卓,,,,,硝西泮,,氯硝西泮,,奥沙西泮,,盐酸氟西泮,,艾司唑仑,,阿普唑仑,,一、结构与性质,,1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性，UV,,2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物二、鉴别试验,,（一）化学鉴别,,1. 沉淀反应,,氯氮卓或阿普唑仑的盐酸溶液遇碘化铋钾成色氯氮卓 ChP（2000）,,【鉴别】（2）取本品约 10mg，加盐酸溶液（9→1000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀阿普唑仑 ChP（2000）,,[鉴别] （1）取本品约 5mg，加盐酸溶液（9→1000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀2. 水解后重氮化—偶合反应,,水解后成芳伯胺的反应 氯氮卓、艾司唑仑、奥沙西泮,,氯氮卓 ChP（2000）,,[鉴别] （1）取本品约 10mg，加盐酸溶液（1→2）15ml，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，加亚硝酸钠和碱性β-奈酚。

溶液显芳香第一胺类（芳伯胺）的鉴别反应，成橙红色沉淀附录Ⅲ）3. 硫酸—荧光反应 地西泮 ChP（2000）,,[鉴别] （1）取本品约 10mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光氯氮卓——黄色,,艾司唑仑——亮绿色,,硝西泮——淡蓝色,,4. 分解产物的反应 氯,地西泮与三唑仑 ChP（2000）,,[鉴别] （2）取本品 20mg，用氧瓶燃烧法（附录 Ⅶ C）进行有机破坏，以 5% 氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 Ⅲ）二）UV 和 IR,,（三）TLC,,药物发展快，品种不断增多， TLC方法比较适合1 常用5种，稀硫酸喷雾，紫外灯检视荧光2 酸水解产物的TLC法,,此类药物有的经酸水解可产生二苯甲酮衍生物有的不产生，可鉴别二苯甲酮衍生物对照品的制备：取本类药物25 mg，溶于盐酸，置沸水中1h，用氢氧化钠调pH10，氯仿提水洗，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂TLC法,,此类药物溶于甲醇，点样，加点硫酸液盖上玻璃烘（水解）滴加氨水，空气吹干紫外光检测三、特殊杂质的检查,,（一） 有关物质的检查,,1. 地西泮中有关物质的检查,,地西泮的原料及片剂中可能引入N-去甲基苯甲二氮卓。

TLC 高低浓度对比法,,供试品溶液：取本品，加丙酮100mg/ml溶液，对照品： 0. 3mg/ml乙酸乙酯：己烷展开供试品的杂质斑点与主斑点比较不得更深2. 氯氮卓中有关物质的检查USP（24） TLC 杂质对照品法； 高低浓度对比法,,分解产物 氨基物（2-氨基-5-氯-二苯甲酮）（结构式参考P186图）含量不得超过0.01%，中间体 氧化物（ 7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮-4-氧化物） （结构式参考P186图）含量不得超过0. 1%检查方法：,,加丙酮振摇，取上清，TLC，与对照品比对，斑点不得更大更深3. 氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法,,（二）降解产物的检查,,地西泮注射液,,分解产生2-甲氨基-5-氯二苯甲酮,,HPLC 主成分自身对照法,,第六节、含量测定,一 非水溶液滴定法 特别是对弱碱性药物及其盐的含量测定由于多为弱减，在水溶液中用标准酸直接滴定没有明显的突跃而冰醋酸可以使碱性增强使滴定顺利进行应用实力之一,,硫酸盐类药物测定（P191）,,二元酸，再水溶液中完成二次解离，但在非水溶液中只作一次解离在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定只到硫酸氢盐为止。

硫酸阿托品的测定（只举一个例子）,,阿托品是碱性较强的一元碱测定方法：0.5g，称定，加冰醋酸与醋酐各10ml溶解，加结晶紫1-2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/l）至溶液显纯蓝空白校正1ml相当于67.68mg的硫酸阿托品二 铈量法,,是常用的氧化还原的方法之一，硝苯地平和吩噻嗪类可采用利用这些药物的还原性，在酸性介质中用硫酸铈滴定硝苯地平用邻二氮菲指示终点，吩噻嗪类用药物的自身变化指示终点自身指示终点或电位法、永停法指示终点,,（一） 硝苯地平的测定,,方法：取本品0 .4 g，称定，加无水乙醇50ml，微热溶解加高氯酸溶液，邻二氮菲指示液3滴用硫酸铈滴定至橙红色消失每1ml硫酸铈相当于17.32mg的硝苯地平二） 吩噻嗪类药物的测定,,原理：滴定开始，先失去一个电子形成红色自由离子，达到化学计量点时，再失去一个，红色消退方法：取本品0 .2 g，称定，加水20ml与稀硫酸10 ml溶解，用硫酸铈滴定至红色消失每1ml硫酸铈相当于17.77mg方法：盐酸氯丙嗪片的测定,,取本品20片，称定，严细，称出适量（相当于盐酸氯丙嗪0.2g），加水20ml与稀硫酸10 ml溶解，按上述方法测定。

优点：,,硫酸铈作滴定剂具有高的氧化电位，且为一价还原；不存在对环取代基的副反应，专属性高本法既可用于原料，亦可用于片剂的测定二） 钯离子比色法,反应在 pH2±0.1 的缓冲液中进行,,测定方法：,,盐酸氯丙嗪含量测定：,,取氯化钯溶液，光比色优点： 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定四 紫外分光光度法,,（一）直接分光光度法 不需提取分离，溶于适当溶剂中即可测定1 奥沙西泮测定 取本品15 mg，精 密称定，置200ml量瓶中，加乙醇溶后（温热），定溶取5ml，稀释至100ml，299nm，测另取对照品15ml，测定，计算2 盐酸异丙嗪片剂测定,,盐酸异丙嗪片剂10片去糖衣，称定严细称取适量（相当于盐酸异丙嗪12.5g），在200ml量瓶中加盐酸适量，溶解后至刻度片剂测定波长为249nm，吸收系数为9103盐酸异丙嗪注射液测定,,（1）测定波长选择 为了消除抗氧剂维生素C（,,max,243nm）对测定的干扰，测定波长由249改为299nm吸收系数为108）同理，盐酸氯丙嗪片剂测定波长为254nm，吸收系数为915；注射液测定波长改为306nm，吸收系数为115。

2）测定方法,：取本品2ml，100ml容量瓶稀释，精取10ml， 100ml容量瓶稀释299下测按标准,吸收系数为108计算二） 萃取后分光光度法,,盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，除上述采用选择299nm波长，直接法消除处方中维生素C的干扰外，还可用萃取后测定法2）测定方法：取本品适量，相当于盐酸氯丙嗪100ml，盐酸稀释至500ml，加氨水，用乙醚提取再用盐酸液提乙醚，并测定254nm，按标准吸收系数为915计算三） 萃取—双波长分光光度法,,（1）原理 在待测组分（a）的最大吸收波长（测定波长，,,1,）处测定待测组分和干扰组分b）吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，,,2,）测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即 ，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大2）定量依据 样品在二波长下吸收度差值（,,A,）：,,,即，吸收度差值（,,A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除3）必要条件,,① 干扰组分在两个波长处吸收度相等,,② 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大,,,（4）应用,,①萃取 除去抗氧剂的干扰,,②双波长分光光度法测定,,排除氧化产物的干扰,,测定波长 254nm,,参比波长 277nm,,对照法定量,,（2）测定方法：取本品适量，相当于盐酸氯丙嗪100ml，盐酸稀释至500ml，加氨水，用乙醚提取。

再用盐酸液提乙醚，并测定254nm，按标准吸收系数为915计算四）. 二阶导数分光光度法,,盐酸氯丙嗪注射液,,抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定P197因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰,266nm,～谷,254nm,距离，标准曲线法定量,,五 气相色谱法,,六 液相色谱法（,HPLC）,,,1. 地西泮注射液的 HPLC 法,,内标法加校正因子定量,,2. 三唑仑的 HPLC 法,,内标法加校正因子定量,,复习题,,盐酸氯丙嗪的含量测定方法有,,A. 中和法,,B. 非水滴定法,,C. 紫外法,,D. 旋光法,,E. 铈量法,,,中国药典（1995年版）对盐酸异丙嗪注射液的含量测定，选用299nm波长处测定，其原因是,,A. 299nm处是它的最大吸收波长,,B. 为了排除其氧化产物的干扰,,C. 为了排除抗氧剂的干扰,,D．在299nm处，它的吸收系数最大,,E. 在其他波长处，因其无明显吸收,,,有氧化产物存在时，吩噻嗪类药物的鉴别或含量测定方法为,,A. 非水溶液滴定法,,B. 紫外分光光度法,,C. 荧光分光光度法,,D. 钯离子比色法,,E. pH指示剂吸收度比值法,,,中国药典(2000年版)中地西泮原料药中2-甲氨基-5-氯二苯酮的检查法为,,A. TLC,,B. HPLC,,C. GC,,D. 沉淀法,,E. 显色法,,,检查盐酸氯丙嗪中“有关物质”时，采用的对照溶液为,,A. 杂质的标准溶液,,B. 标准“有关物质”溶液,,C. 供试品溶液,,D. 供试液的稀释溶液,,E. 对照溶液,,,某药物于酸性溶液中，加硫酸铈试液则产生红色，继续滴加硫酸铈试液，红色由浅变深，继由深又变浅直至红色消失，该药物应为,,A. 雌二醇,,B. 氯丙嗪,,C. 诺氟沙星,,D. 硫酸镁,,E. 苯巴比妥钠,,,吩噻嗪类药物与钯离子反应，需在以下哪种酸性条件下进行,,A. pH4,,,,D. pH1,,E. pH5,,,A. 氯氮卓（利眠宁）B．地西泮（安定）,,C．两者均能 D. 两者均不能,,分子母核属于苯并二氮杂卓,,用氧瓶燃烧法破坏后，显氯化物反应,,水解后呈芳伯胺反应,,与三氯化锑反应生成紫红色,,溶于硫酸后，在紫外光下显黄绿色荧光,(C),（C）,（A）,（D）,（B）,,硫酸—荧光反应为地西泮的特征鉴别反应之一。

地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下显,,A. 红色荧光 B. 橙色荧光,,C. 黄绿色荧光 D. 淡蓝色荧光,,E. 紫色荧色,,,某药物经酸水解后呈茚三酮反应，溶液显紫色，该药为,,A. 氯氮卓,,B. 地西泮,,C. 盐酸普鲁卡因,,D. 阿司匹林,,E. 尼可刹米,,某药物经酸水解后可用重氮化—偶合反应鉴别，此药物是,,A. 盐酸氯丙嗪,,B. 氯氮卓,,C. 地西泮,,D. 醋酸氢化可的松,,E. 维生素C,,能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为,,A. 对乙酰氨基酚,,B. 异烟肼,,C. 尼可刹米,,D. 地西泮,,E. 维生素E,,,经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为,,A. 葡萄糖,,B. 皮质酮,,C. 维生素C,,D. 土酶素,,E. 异烟肼,,,溴酸钾法测定异烟肼含量的方法是,,A. 属于氧化还原滴定法,,B. lmol溴酸钾相当于3/2mol的异烟肼,,C. 采用永停滴定法指示终点,,D. 在HCl酸性条件下进行滴定,,E. 还可以用于异烟肼制剂的含量测定,,,异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质,,A. 间氨基酚,,B. 水杨酸,,C. 对氨基苯甲酸,,D. 游离肼,,E. 其他甾体,,,可用于异烟肼鉴别的反应有,,A. 与氨制硝酸银的反应,,B. 戊烯二醛反应,,C. 坂口反应,,D. 硫色素反应,,E. 二硝基氯苯反应,,,下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应,,A. 地西泮,,B. 阿司匹林,,C. 异烟肼,,D. 苯佐卡因,,E. 苯巴比妥,,,用于吡啶类药物鉴别的开环反应有,,A. 茚三酮反应,,B．戊烯二醛反应,,C．坂口反应,,D. 硫色素反应,,E．二硝基氯苯反应,,ChP（2000）异烟肼的测定方法为,,A. 溴酸钾滴定法,,B. 溴量法,,C. TLC,,D. NaNO,2,,E. 比色法,,,能和2,4一二硝基氯苯发生呈色反应的药物是,,A. 异烟腙,,B. 硫酸奎宁,,C. 阿莫西林,,D. 四环素,,E. 炔孕酮,,,参考素材,,比色法,,（一） 酸性染料比色法,,（三）比色法,,1. 地西泮经水解后氯仿提取液的比色测定法,,2,. 地西泮水解产物甘氨酸与茚三酮反应后比色测定法,,3,. 氯氮卓经酸水解后的重氮化偶合比色测定法,,（2）弱酸性 非水酸量法,,鉴别或氧化还原滴定法含量测定,,鉴别或比色法含量测定,,酰胺键易水解引入特殊杂质游离肼，可用于吡啶类药物的鉴别,,（3）,丙硫异烟胺,,,位上硫代甲酰胺基,易水解，,加酸水解后，释放出硫化氢，能使湿润的醋酸铅试纸显黑色，故可以此进行鉴别。

3. UV和IR,,1. 峰面积归一化法,取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量注意溶剂峰不应计算在总峰面积内优点：不需杂质对照品，简便易行缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差2. 主成分自身对照法,,杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用方法,,分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差,,优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度,,3. 内标法测定供试品中杂质的总量限度,方法,供试品→供试品溶液,1,图1,,供试品+内标→供试品溶液,2,图2,,判断,若图1无与内标峰保留时间相同的杂质峰，则图2中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）,,若图1有与内标峰保留时间相同的杂质峰，则将图2上的内标峰面积减去图1中此杂质峰面积，,得内标物质峰的校正面积,；图2中各杂质峰面积加上图1此杂质峰面积，得各杂质峰的校正总面积；各杂质峰校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。

4. 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量,,准确测定杂质含量,方法,内标+杂质对照品→溶液，进样，测定，计算校正因子,,,供试品+内标→供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质量,,5. 外标法测定供试品中某个杂质的量,供试品→供试品溶液,,杂质对照品→对照品溶液进样，测定，计算杂质的含量,,,缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样,,,3. 水解后呈茚三酮反应 地西泮,,2. 丙硫异烟胺 ChP（2000）,,,【鉴别】（1）取本品约 50 mg，加盐酸溶液（9→100）3 ml ，缓缓加热，发生的气体可使湿润的醋酸铅试纸显黑色四、含量测定,,（一）异烟肼的含量测定,,1. 氧化还原滴定法,,（1）溴酸钾法,,ChP（2000）原料及制剂,,反应摩尔比 3∶2,,,6,H,7,N,3,O2）溴量法 反应摩尔比 1∶4,,（3）剩余碘量法 反应摩尔比 1∶4,,2. 非水溶液滴定法,,（1）非水酸量法,,（2）非水碱量法,,（二）尼可刹米的含量测定,,1. 非水溶液滴定法,,ChP（2000）原料,,2. 紫外分光光度法,,ChP（2000）注射液,,内容量移液管,,用内容量移液管精密量取本品1m1，置 100ml 量瓶中，用 0.5％ 硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加,,0.5％硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加0.5％硫酸溶液稀释成每1ml中约含尼可刹米20µg的溶液，在263nm的波长处测定吸收度，按C,10,H,14,N,2,O的吸收系数（ ）为292计算，即得。

三）异烟腙的含量测定,,,非水溶液滴定法 电位法指示终点,,ChP（2000）原料及片剂,,（四）丙硫异烟胺的含量测定,,,1. 非水溶液滴定法,,ChP（2000）原料,,2. 银量法,,ChP（2000）片剂,,取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙硫异烟胺0.3g）置具塞锥形瓶中，加丙酮20ml使丙硫异烟胺溶解，精密加入硝酸银滴定液（0.1mo1/L）50m1，摇匀，放置15min，加水50m1、硝酸3m1、硝基苯5ml与硫酸铁铵指示液2m1，用硫氰酸铵滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正每lml的硝酸银滴定液（0.1mo1/L）相当于,,9,H,12,N,2,S四、含量测定,（一） 非水溶液滴定法 原料药,,HClO4在冰醋酸溶液中，具强氧化性，可氧化吩噻嗪类药物产生红色的氧化物，干扰指示剂终点的观察排除方法：,,（1）改用中性溶剂,,（2）加抗坏血酸,,（3）电位法指示终点,,3. 含卤素,,。