正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺.doc

正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺更新日期：2010-06-09 点击： 郭 澄 张 纯 邵元福 郑 越 提要 用正交实验法对菟丝子中总黄酮的提取工艺进行了探讨实验确定的最佳提取条件为：用 8 倍量 95%乙醇回流提取 6 h 关键词 正交试验； 菟丝子总黄酮； 提取工艺 Orthogonal Test for the Effect of Alcohol Extracting Process to Total Flavones Contents from Cuscuta Seeds Guo Cheng, Zhang Chun, Shao Yuanfu, et al Changzheng Hospital, SMMU, Shanghai 200003 Abstract Concentration of alcohol, reflowing time and amount of alcohol were tested in orthogonal analysis for alcohol extracting process. Experimental results showed that concentration of alcohol was the significant fact to total flavone content with P＜0.05. The best extracting process can be described as: the drug powder is reflowed 2 times, 3hrs each, 95% alcohol with 8 times of the amount to drug weight. key words Orthgonal test; Cuscuta australis; Extracting techniques 中药菟丝子为临床常用壮阳类中药，具有滋补肝肾、益精明目等功效。

菟丝子类生药含有黄酮、多糖和甾醇等成分［1，2］ ，具有多方面的补益活性(郭澄，第二军医大学博士学位论文，1993)［3，4］ ，其中黄酮类成分为主要的有效成分本文采取正交设计试验优选菟丝子类药材的主流品种南方菟丝子中总黄酮的提取工艺 1 实验材料 药材与试剂：菟丝子药材(购自上海市黄浦区药材公司，经郭澄鉴定为南方菟丝子 Cuscuta australis R. Br.)，芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)；岛津 UV-240 紫外分光光度仪 2 方法与结果 2.1 提取工艺的设计：先将生药粉碎成粉末，过 40 目筛，用石油醚加热回流脱脂 2 h，挥干石油醚，残渣以一定浓度的乙醇回流提取，分 2 次进行，合并提取液，定容，待测另精称 0.5 g 药材粉末置索氏提取器中加 100 ml 石油醚回流脱脂 2 h，再用 90 ml 甲醇提取 3 h，置 100 ml 容量瓶定容，待测 2.2 正交设计：根据生产实际及文献［5］ ，认为总黄酮成分提取与乙醇浓度(A)、倍数(B)、提取时间(C)有关，故选择该三者为 3 个考察因素，各取 3 个水平，进行 L9(34)正交表实验，见表 1每次试验药材用量为 50 g，以 500 ml 容量瓶定容液中总黄酮浓度为指标。

表 1 正交因素水平表 水平 乙醇浓度 A (%) 用量 B (倍) 时间 C (h) 1 50 8 2 2 70 12 4 3 95 16 6 2.3 总黄酮含量测定及结果：按文献方法［6］用芦丁作对照品，以吸收度 A 为纵坐标，浓度 C (μg/ml)为横坐标，得回归方程(5.5～44 μg/ml 线性范围)： C=80.258 A＋0.452， γ=0.9991药材提取供试液中总黄酮浓度(以 500 ml 定容提取液浓度计)直观分析表、方差分析表分别见表 2、表 3 表 2 直观分析表 序号 因 素 总黄酮含量 (μg/ml) A B C 1 1 1 1 753.796 2 1 2 2 1037.254 3 1 3 3 934.702 4 2 1 2 1377.483 5 2 2 3 1395.042 6 2 3 1 1029.883 7 3 1 3 1456.250 8 3 2 1 1226.950 9 3 3 2 1169.797 K1 2725.752 3587.529 3010.629 K2 3802.408 3659.246 3584.534 K3 3852.997 3134.382 3785.994 K1 905.504 1195.843 1003.543 K2 1267.469 1219.749 1194.845 K3 1284.332 1044.794 1261.998 R 375.828 174.955 258.455 表 3 方差分析表 变异来源 离差平方和 自由度 均 方 F P A 270269.85 2 135134.93 26.79 ＜0.05 B 53996.42 2 26998.21 5.35 ＞0.1 C 107904.89 2 53952.44 10.70 ＜0.1 3 讨论与结论 3.1 最佳提取方法：通过直观分析表，三因素主次顺序为 ACB，方差分析结果显示：A 为主要因素，其次为 C、B。

从平均得率和实际工作成本考虑优选方案为 A3B1C3，即：95%乙醇 8 倍量提取 6 h与甲醇提取总黄酮(理论值)相比该法得率为 92.1% 3.2 通过实验比较认为，采用水提法效果较差，只相当于优选方法的 50%左右 3.3 生药总黄酮提取工艺的报道较多，其中乙醇浓度影响较大一般认为乙醇浓度增高有利于总黄酮的提取，但提取侧柏叶总黄酮时，采用 50%乙醇回流 4 h 稀释 20 倍为最佳［6］ ，可能是由于黄酮甙含量较高所致 作者简介：郭 澄：男，1965 年生，副主任药师，博士 作者单位：郭 澄 张 纯 邵元福 郑 越 中国人民解放军第二军医大学长征医院 参考文献 1 郭 澄.南方菟丝子化学成分的研究.中国药学杂志，1997，32(1)∶8 2 郭 澄.菟丝子质量研究.中国中药杂志，1991，16(10)∶581 3 郭 澄.菟丝子生物学及其应用.成都：成都科技大学出版，1996∶35 4 宓鹤鸣.菟丝子补肾壮阳的研究.中草药，1991，22(12)∶547 5 刘重芳.银杏叶总黄酮提取工艺探讨.中成药，1992，14(7)∶7 6 程立方.侧柏叶总黄酮提取工艺与含量测定方法研究.时珍国药研究，1995，6(4)∶15。