实验四无菌操作技术与细菌的简单染色.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,一、实验目的,1、熟练掌握无菌操作技术（从试管菌种中转接微生物到新的试管培养基中），体会无菌操作的重要性；,2、学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,二、实验原理,1、高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转接过程中，一般在酒精灯火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环（针、铲），以达到灭菌的目的2、简单染色：利用单一染料对菌体进行染色的方法实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,二、实验原理,发色集团：色原，赋予染料颜色特征,染料,助色集团：能够形成盐，与细菌细胞结合使着色碱性染料：包括美蓝（亚甲基）、结晶紫、,染料 碱性复红、沙黄（番红）及孔雀绿等,酸性染料：酸性复红、伊红和刚果红等实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,二、实验原理,微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而碱性染料电离后部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色；,当微生物细胞处于酸性条件下所带正电荷增加时，可采用酸性染料着色实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,三、实验仪器与用具,超净工作台、接种环、酒精灯、火柴、试管架、显微镜、擦镜纸、双层瓶、装有蒸馏水的滴瓶等,四、实验材料与试剂,大肠杆菌（,E.coli,）营养琼脂培养基,枯草芽孢杆菌（,B.subtilis,）营养琼脂斜面,金黄色葡萄球菌（,S.aureus,）营养琼脂斜面,实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,五、实验操作,（一）无菌操作技术（用接种环转接菌种）,1、手持试管,左手：拿细菌斜面培养物和营养斜面,右手：持接种环,2、拔棉塞,在火焰旁打开斜面培养物的试管棉塞，注意不能放在桌面上，并将试管口在火焰上灼烧一下。

实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,（一）无菌操作技术（用接种环转接菌种）,3、取菌,使用灼烧并冷却的接种环在细菌的琼脂斜面上轻轻刮取4、划线,从下到上划一直线，然后再从其底部开始向上做蛇形划线（或“之”字形）,实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,（一）无菌操作技术（用接种环转接菌种）,5、塞棉塞,6、灼烧接种环,7、作标记,使用记号笔在试管口部注明菌种名称、接种日期和接种人姓名实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,五、实验操作,（二）细菌的简单染色,1、涂片,在载玻片的中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜（直径约1cm）注意事项：1）载玻片要洁净无油迹；,2）滴生理盐水或取菌不宜过多；,3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,（二）细菌的简单染色,2、干燥,自然干燥,3、固定,涂面朝上，通过火焰23次固定的目的：1）使细胞质凝固变性，固定细胞形状；2）使菌体牢固附着在载玻片上注意：热固定温度不宜过高（以玻片背面不烫手为宜），否则会改变甚至破坏细胞形态实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,（二）细菌的简单染色,4、染色,滴加染液覆盖涂菌部位即可。

染色时间：吕氏碱性美蓝 1.5min；,草酸铵结晶紫或齐氏石炭酸复红 1min,5、水洗,倒去染液，用自来水冲洗，直至图片上留下的水无色为止注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端留下，水流不宜过急、过大，以免涂片薄膜脱落实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,五、实验操作,（二）细菌的简单染色,6、干燥,用吸水纸吸取多余的水分，自然干燥或电吹风吹干7、镜检,涂片必须完全干燥后才能用油镜观察实验四 无菌操作技术与细菌的简单染色,六、实验作业,1、根据观察结果，绘出两种细菌的形态图2、在进行细菌涂片时应注意哪些环节？,3、进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？,4、进行简单染色的目的及原理是什么？进行微生物制片时是否都需要进行染色？为什么？,。