WATERS髙效液相的标准操作规程（SOP）.docx

WATERS髙效液相的标准操作规程（SOP）适用于所有使用此仪器者1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前•定要用0.5pm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制 流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片木实验室 有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相吋（如甲醇/ 水），先用1・2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤1.2保持储液瓶的淸洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后•次应用HPLC级的水或溶剂 清洗，不能在清洗过程中留下污迹1.3保证溶剂的质量•沱要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要便用高纯度的缓冲盐1.4故障及解决方法1.4.1流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合吋会有气体产生，气泡进入泵内引起斥力波动， 增加噪音，色谱图上出现毛刺对试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效 的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合1.4.2流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵床力不稳应经常观察储液器中流动相的杲，加足 流动相保证所有的样品分析完毕输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留…小孔止 好夹住进液管，使英不能上下移动。

过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，斥力不稳过滤器被微粒所阻塞或长芻，去掉过滤器 后如果系统运转止讯，说明己找出问题，换上新的过滤器则可°有吋候换上新的过滤器 仍然不畅，那就需耍查杳流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器不管如何，流动 相都需要重新过滤流速过高、阻力大，造成空化现彖，这是山于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度 等引起的如果流速大于10ml/min,常会出现这种现象使用下列方法解决：（1）使 用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加圧储液 器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内 形成真空，打出的流动相不连续应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻 塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的其它问题包括渗漏或接头松动、 泵部件损坏等，都能引起供液不正常1.4.3流动相和储液器被污染山于污染，噪音越來越大，检测器基线上升污染物町能被泵以稳定的浓度打入系统， 而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰用梯度洗脱时弱流动相可以 使污染物聚在柱顶，流动柑强度增加后污染物町能被洗脱出來•个大的伪峰有时基线 噪音突然増大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造 成的。

新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌脏的储液器会污染淸洁的流动相每种流动和备有专用的储液器，或者定期报废储液器流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制 流动相吋操作不当等因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂玻璃器皿按规肚淸 洗丁净为防止微生物生长，每天耍用甲醇淸洗系统怀疑系统内生长了微生物，对用 稀硝酸冲洗既可（注意不要损坏柱和管道系统）真空脱气时防止泵油带入流动相用淸洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流 动相己经污染的流动相一定要废弃掉2仪器组成及电源本系统可进行多达四元溶剂的梯度洗脱操作2.1仪器组成 本系统ill Waters 600E多溶剂输送系统，四通道过滤，7725i进样 器，996型二极管阵列检测器，联想品牌机等虹元组合而成° 2.2电源仪器使用时按 泵、检测器、打印机和计算机的顺序,依次接通电源3 600E高压输液泵的操作3.1液相色谱系统泵的流速在0.1-10.0ml/minZfn],要保持泵的良好操作性能，必须维 护系统的淸洁，保证溶剂和试剂的质呆，流动相的过滤和流动相的脱气下而列出预防 泵故障的注意出项：（1）用高质虽的试剂和HPLC级溶剂；（2）过滤流动相和溶剂;（3）脱气：（4）工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇冰的混合溶剂冲洗柱塞 杆；（5）不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中；（6）定期更换垫圈；（7）加润滑油。

处 于良好操作状态的泵，应该使色谱图上的基线平稳，保留时间的重复性良好等度洗脱 时压力波动小于±2%o梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的3.2常规准备工作包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除气泡及泵的出动3.2.1接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令3.2.2溶剂瓶脱气打开四通道过滤器，脱气15mino3.2.3系统中气泡的排除泵启动时，调节所需要的通道流速为1ml/min,该通道如A 调节为100%将抽液阀旋至draw位，用针筒抽A液10ml,将抽液阀旋至inject位， 并推出针筒中的液体，将抽液阀旋至run fto此时参比阀排出的液体应连续，如不连续 则重复以上抽液排液操作重复以上操作分别抽取B, C, D液10mlo将流速减小至0. 2ml/min,将参比阀关闭柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接的情况下， 提高流速至9ml/min,数分钟后将流速减至1 ml/mirio ）3.3等度（Isocratic）操作 按direct键，进入isocratic菜单依次设定流路配比，M 气流速，柱温设定方法如下：按光标移动键，至闪烁光标出现在所需设定位置上。

用 数宁键设定数值，按enter键确认，注意每个流动相英纽.成之和应为100%,设定流速 为0.1ml/min,逐渐増加流速至实验所需的流杲，待系统平衡后开始实验3.4梯度（Gradient）洗脱操作梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件（Program even t）表,在OPERATE GRADIENT屏幕时运行按program method键，进入梯度编 辑窗口移动光标键至table #处，输入数字键（1-15）,按enter键，将光标移至梯度衣 第…行，依次输入流速和流量配比，分别按enter键确认°光标移至第二行，依次输入 梯度时间，流速，配比及曲线号（1-11）,重复以上操作，至梯度衣全部编完，按显示屏 对应功能键save,并记住table #按Program event键，进入程序事件表的编制， 移动光标键金table#处，输入数字键（1-15）,按enter键，将光标移至事件农第-行， 依次输入事件号(1-10)和开关，按enter键确认，光标移至第二行，依次输入事件吋间， 事件号，和开关，按enter键确认，重复以上过程至事件表完成，按save键储存3.5梯度程序的运行 按operate methods键，进入梯度方法运行窗口，将光标移至ta ble处，输入欲运行的表号(1-15),按显示屏对应功能键start run,运行。

在设置时， 如有疑问，可用HELP提示每个设置的含义3.6实验结束对泵进行冲洗后,关闭流量,注意流速必须要逐步变化冲洗顺序:如果 使用有缓冲液的流动相，则停泵前-雄要用HPLC级纯水淸洗HPLC系统同吋用淸 水淸洗柱塞杆若停泵存放时间超过…天，则停泵前还需用水/甲醇淸洗系统3.7关闭电源开关仪器采购指南：液相色谱色谱柱 制备液相色谱关 键 词：waters高效液相sop标准操作规程啤支持:0 次 4感谢：0 次 32008-10-28 10:21:53以W1O|J|的微量进样器直接进样进样后，快速旋转进样器的把柄，立接把样品进到 色谱柱的柱头4.2在做标准曲线时，进样浓度应山低到高5信号检测及数据处理5.1本系统用996型二极管阵列检测器,波长范围在190-800nm,接受全波长光谱在分析过程中测定吸收信号山计算机进行处理，显示色谱图或光谱图，列出数据处理 结果测量结束时按规定退出程序后关机cA P {rSe5.2点灯，指示灯亮诊断，检杏校准状态灯点亮，处于准备状态稳定1小时后 可以用于采集数据5.3帘规准备工作 按色谱仪、检测器、打印机及计算机顺序接通电源5.4 进入 Millennium32 菜单,按 Login,输入 User Name and Pass Word Jh,按 0 Ko5.5 按 Configure System 进入子菜单，在建 New chromatography System,先删 III的，单击 Project ,建 New chromatography System,选择所需要的 W600,及检 测器(PDA or ELSD)，输入 System Name,按 Finisho5.5使用Run Sample窗口可采集处理和报告数据5.5.1 从 Millennium32 登录窗口,双击 Run Sample。

7 T[L5-g5.5.2从Run Sample对话框，选择色谱系统并中击确定，将建立BusLAC/E连接5.5.3从菜单条中选择Edit>New Method Set单击Yes5.5.4单击New Create以创建新仪器方法屏幕上显示Edit Instrument Method□ 单击各仪器以编辑仪器参数，然后选择File>Save As以命名、标记(约束应用环境)并保存方法然后选择File>Exit5.5.5出现Select Instrument Method对话框选择刚刚创建的方法，然后单击Next向导将提示用户输入适用于方法的信息5.5.6 Method Set Editor对话框将出现核实信息,然后选择File> Exit5.5.7在Run Sample对话框中，单击Sample选项卡,在样品表中输入样品信息 使用水平滚动条访问每行中的所有信息5.5.8单击工具条上的（Amounts）,为各标准样晶瓶输入纽份名称和浓度选择Fi le> Exit,返回 Run Sample5.5.9核实运行模式是否设置成Run And Process或Run And Reporto如有必要，使用下拉列表更改该条目。

5.5.10 选择 File> Save Sample Set Method 以保存方法5.5.11使用Intrument Method下拉列表选择仪器方法单击设置5.5.12要收集数据，请单击工具条上的（绿灯）5.6使用处理向导创建处理方法5.6.1 从 Millennium32 登录窗口，双击 Browse Project<> 选择耍使用的 Project5.6.2 W击通道选项卡，然后卩击工具条上的（Review）出现杳看屏幕.5.6.3单击工具条上的（Process Method Wizard），然后单击确定从下拉列表中选择适为的处理类烈，然后单击确定向导将引导您逐步完成积分和校止参数的设置5.6.4要在处理方法中输入某纽份的多个浓度，或给它添加高级积分，请选择View> 处理方法布局5.6.5选择File>Save As> Method Set,将该处理方法保存为方法组的•部分5.7查看结果5.7.1在Project窗口中，单击Result选项卡5.7.2加亮显示感兴趣的样品（未知样或标准样），然后单击Review图标查看窗口 显示色谱、保留时间和组份名称5.7.3单击窗口底部状态条中的Peak选项卡,显示峰信息。

对于PDA数据，如果在 处理方法中选择了 Peak Purity和Library,则会显示此两者的信息5.7.4要查看校止曲线，请选择Window> Calibration05.7.5要杏看结果的所有详细信息，请选择Window> Resulto 5.7.6要打印结果,请从Project窗口单击Result选项卡，然后选择要打印的结果。