钼锑抗比色法测定可溶性磷含量.docx

钼锑抗比色法测定可溶性磷含量试剂准备：钼锑贮存溶液:量取153ml浓硫酸（分析纯，密度1.84g/mi）,缓缓加入到400ml 蒸馏水中，不断搅拌，冷却另称取经磨细的钼酸®［（NH4）6Mo7O24 ・H20,分析 细10g溶于温度约60^300ml水中，冷却然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液 中再加入0.5%酒石酸锑钾［KSbOC4H4O6・1/2H20,分析纯］溶液100ml，冷却 后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1%，硫 酸 2.75mol/L钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有 效期不长，宜随配随用5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50°C烘干的磷酸二氢钾（KH2PO4分析纯）， 100ml水，加5ml浓硫酸（防腐），用水定容到1L,浓度为100mg/L磷（P）,此溶液 可以长期保存吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L 磷（P）标准溶液，此溶液不宜久存标准曲线的绘制：分别准确吸取5mg/L磷（K2HPO4）标准溶液（也可用摩尔浓度）0、2、4、 6、8、10ml于50ml容量瓶中，同时加入与显色测定所用的样品溶液等体积的空 白溶液，加入二硝基酚指示剂2~3滴，并用100g/L碳酸钠溶液或50ml/L硫酸溶 液调节至溶液刚呈微黄色，准确加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，即得 含磷（P）量分别为0.0、0.2、0.4、0.8、1.0mg/L的标准溶液系列。

摇匀，于室温 15C以上，放置30min在波长700nm处，测定其吸光度，以吸光度为纵坐标， 磷浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线可溶性磷测定（显色与比色）：将待测液体（细菌真菌培养液离心后取上清）适量（第一次做需摸索加入量） 移至50ml容量瓶中，用水稀释至总体积约3/5处，加入二硝基酚指示剂1~2滴， 并用100g/L碳酸钠（或氢氧化钠）溶液或50ml/L硫酸（或盐酸）溶液调节至溶 液刚呈微黄色，准确加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，室温15C以上， 放置 30min（8h 内）显色的样品溶液在 722 分光光度计上，以空白 （溶剂，细 菌真菌实验为不接菌体的空白培养基）为参比液调节仪器零点，进行比色测定， 读取吸光度OD7oonm，再从标准曲线上查得相应的含磷量Ml。