EB的危害及其实验室安全使用预防措施.doc

EB的危害及其实验室安全使用预防措施 在电泳实验或其他核酸分离实验中，常用EB（Ethidium bromide，EtBr）作非放射性的Marker，来识别和显示核酸条带EB是一种深红色不易挥发的晶体，微溶于水当被紫外线照射时能发出红褐色的荧光尽管EB是一种高效的显色剂，但它的高危险性要求特殊的安全管理和回收流程人体危害 EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处安全预防措施 良好的操作习惯可以降低危害接触在通风厨使用粉状或结晶EB时，或使用含EB的溶液或片剂时，为避免吸入EB，应避免与EB的直接接触为避免皮肤接触到溶液中的EB，应戴手套、实验服和防护镜，并勤换手套要告知ＥＢ使用者ＥＢ的危险性、正确使用及回收方法此外，经培训的才能通过实验室化学卫生管理计划，获得ＣＨＰ（the laboratory’s Chemical Hygiene Plan）的证书拥有该证书者才算是按标准操作使用ＥＢ在使用含ＥＢ类材料前需制订一份ＥＢ安全使用说明。

进入工作区域需佩戴防护镜并确认有可使用的洗眼及淋浴设施和其他化学药品一样，在ＥＢ的使用及放置房间内不准饮食使用后脱去手套及时洗手，彻底处理掉残留的ＥＢ在使用ＵＶ照射ＥＢ时，戴上紫外线防护镜或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽紧急处理措施误入眼睛措施：如果ＥＢ不慎落入眼睛，立即用大量的冷水冲洗至少１５分钟最好能用洗眼药水进行擦洗误接触措施：如果皮肤不慎接触到ＥＢ，立即脱去被污染的衣物再用肥皂清洗接触到的皮肤后，大量的冷水冲洗至少１５分钟误服措施：如果不慎误服或吸入ＥＢ，将受害者移至通风处，并及时送医救治泄漏污染处理：如果EB不慎洒落在水槽或者下水道，请立刻告知相关管理部门如果大量EB洒落，应立即通知在该工作域的所有人员，将人员疏散并开始清理被污染的区域在未清理好现场的同时，应竖牌警告他人勿入并为有关部门提供资料及协作若仅微量ＥＢ排入下水道并被及时发现，在确保安全的情况下可由实验室熟知EB危害的人员进行清理当然，清理EB的人员是必须经过安全培训，并有防范意识和相应的处理装置如果实验室的人员未经培训或没有处理装置，请联系相关部门进行处理净化处理：在清理微量洒落的ＥＢ时，需全程穿着防护服（按上文所描述的“安全预防措施”）。

用紫外灯照射确定污染的位置ＥＢ的荧光是很容易看到的如果洒落的EB是粉末状，用湿纸巾擦拭后并按程序清理如果洒落的是液体，用干纸巾吸干后再用UV光检查残余的ＥＢ，然后按程序清理当准备或使用除污剂时配戴全面防护装备（实验服、手套和防护镜）在用ＥB前，需预先准备好除污剂：4.2克亚硝酸钠（NaNO2, CAS # 7362-00-0）和20毫升的次磷酸（50％） （H3PO2, CAS # 6303-21-5），加入300毫升水１）用纸巾蘸取去污剂擦洗被污染的区域，再用纸巾加自来水清洗5次，每次实用的纸巾都必须是干净未污染的２）用紫外光检查已清洗的区域，以确保所有ＥＢ被清除必要时可重复步骤１如果酸可能损害被污染的表面，可用适量自来水稀释去污剂后再使用３）将所有使用过的纸巾用去污剂浸泡1小时，取出并将附着的去污剂拧干收回容器内被处理时使用的手套和其他物件可双层包裹再扔弃４）在去污剂的容器上标上EB去污剂，并注明成分将去污使用过的物件打包，后续处理程序如下1 Lunn, G. & Sansone, E.B., Destruction of Hazardous Chemicals in the Laboratory, John Wiley & Sons, New York, 1990, p. 119-120.在下表中明确了各类含EB废液的处理方法。

从管道排放EB溶液前，先用紫外灯照射是否还有荧光如果仍有荧光，那该溶液仍需处理后才能从管道中排放1）过滤，用木炭颗粒过滤器或ＥＢ回收器类似处理的装置有Schleicher & Schuell 的EB回收系统，以及EMD Biosciences的EB吸附器，这两样可在VWR公司购买到或可适用Fluka的EB/SYBR®Green 清除剂，或Sigma的EB回收器，这两个可在Sigma-Aldrich公司购买到注意该产品的指示，不要超过回收器的能力一旦超过它们的使用限度，过滤器或提取器必须经生物安全处理后抛弃2）吸收，现已有专门去除EB的“茶包”式产品，专门设计用于ＥＢ去污，如Qbiogene的GreenBag™ EB废弃处理套件和Amresco的脱色袋按照产品指示，确保有足够的茶包吸收溶液中大量的ＥＢ一旦已经用尽，“茶包”必须经相应部门安全处理后抛弃抛弃处理 将实验室处理废弃EB的方法和程序记录下来，并整合到实验室的标准作业程序中关于不同类型的EB物品的处理方法，请参阅下表废弃ＥＢ处理指南废液描述废弃处理方法缓冲液ＥＢ浓度较低（< 0.5mg/L）在排入下水道之前，缓冲液请先用过滤器或“茶包”处理。

确定缓冲液中在紫外灯下无荧光方可下排储备溶液，氯化铯溶液ＥＢ浓度较高（ 1-10mg/mL）浓度之高，使得处理EB的过滤和吸收方法都无法适用将这些储液交由相关部门专业人员处理处理用过的过滤器和“茶包”ＥＢ在（过滤/吸收过程）污染将已用的过滤器和茶包明确标记用过的过滤器和茶包交由相关部门处理凝胶ＥＢ浓度低（ 3-5mg/L）先将凝胶晾干，装入指定的袋子中做好标记后，再交由相关部门处理污染的物件手套，清理洒落EB用过的材料，以及实验室中污染ＥＢ的物品破碎的玻璃和锐器必须放入坚固的容器，其他材料可摆放整齐后装入袋中做好标记，交由相关部门处理晶体及粉末含有较纯或浓缩过的EB交由相关部门处理有效处理后的废液，再确保检测不到EB后方可排入下水道（核实荧光）处理EB的其他方法 可改用低毒性的其他材料来替代ＥＢ（ 例如，可用SYBR SafeTM 对DNA凝胶染色），以减少在实验室里可能发生的危险处置ＥＢ的替代品也需有相应部门决定其处理方法后再做废弃处理如有任何疑问，请联系该部门。