从槐花米中提取芦丁.doc

1现代化学实验技术现代化学实验技术实验实验 1 1 从槐花米中提取芦丁从槐花米中提取芦丁一、目的要求一、目的要求（1）学习从天然产物中提取黄酮苷的原理和方法2）学习重结晶提纯固体物质的原理和方法3）掌握黄酮苷的纸色谱检验操作 二、实验原理二、实验原理芦丁又称芸香苷，广泛存在于植物中，其中槐花米中的含量达 12%～16%芦丁有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床用作毛细血管止血药，也作为高血压症的辅助治疗药物芦丁是糖苷类化合物，常含三分子结晶水，呈淡黄色针状结晶，熔点为 174～178C，无水物的熔点为 188C芦丁在冷水中的溶解度为 1:10000，沸水中为 1:200；冷乙醇中为 1:650，沸乙醇中为 1:60；易溶于碱性水溶液，难溶于酸性水溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等本实验是利用芦丁易溶于碱性水溶液、酸化后又析出的性质进行提取，并利用它在冷水中和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶提纯芦丁是糖苷类化合物，其糖苷键在酸性条件下可水解产生对应的甙元——槲皮素，所以芦丁的分离鉴定可用纸色谱进行，常用乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）或正丁醇:冰醋酸:水（4:1:5）作展开剂 三、主要仪器和试剂三、主要仪器和试剂1. 主要试剂槐花米、石灰乳、浓盐酸、pH 试纸、质量分数 95%乙醇、展开剂（乙酸乙酯:甲酸:水=6:1:3） 、显色剂（质量分数 2%三氯化铝） 、饱和芦丁标准品乙醇溶液、饱和槲皮素标准品乙醇溶液。

2. 主要仪器250mL 烧杯、500mL 烧杯、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、表面皿、毛细管、铅笔、直尺、色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 、色谱缸、烘箱、电炉、台平 四、操作步骤四、操作步骤1. 芦丁的提取取 10g 槐花米，置于 250mL 烧杯中，加入 100mL 水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH=8～9，在此 pH 下保持微沸 20～30min，趁热抽滤，残渣再加 50mL 水，同上法再煎一次，趁热抽滤合并滤液，在 60～70C 下用浓 HCl 调至 pH=4～5，使沉淀完全，抽滤，沉淀用少量蒸馏水洗涤，抽干，60C 干燥得粗芦丁2. 芦丁的精制用水重结晶：将粗芦丁置 500mL 烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，趁热抽滤滤液静置，充分冷却，析出芦丁晶体，抽滤，产品用蒸馏水洗涤，70～80C 烘干，称重，得芦丁产品3. 芦丁的纸色谱检验样品：饱和芦丁自制品乙醇溶液对照品：饱和芦丁标准品乙醇溶液和饱和槲皮素标准品乙醇溶液支持剂：色谱滤纸（中速，20cm×7cm） 展开剂：乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3） 显色剂：质量分数 2%三氯化铝喷雾2五、实验结果五、实验结果1、粗芦丁为土黄色粉末，精制后的芦丁产品为淡黄色粉末。

2、产率：3、芦丁纸色谱显色中：在色谱中，对照品饱和槲皮素标准品乙醇溶液有明显显色现象，饱和芦丁标准品乙醇溶液显色不明显；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液有显色，但其显色最高点和槲皮素显色点高度不一致，最低点显色不明显 六、分析与讨论六、分析与讨论1、芦丁颜色正常，因为粗芦丁中海混有杂质，所以颜色较精制后芦丁深2、精制芦丁产率较低，可能是因为：乘热抽滤时溶液温度下降，芦丁析出留在滤纸上；还有部分芦丁未从槐花米中煮出；芦丁转移过程中损失等等3、实验所需槐花米粉碎太细，导致抽滤十分缓慢，因而本实验后来用纱布代替滤纸4、本来还应有一个粗产率，但因为实验考虑不周全，没有测定粗芦丁质量，所以芦丁粗产率无法计算得到 5、纸色谱显色：饱和芦丁标准品乙醇溶液所有组都没有显色，可能是制备标准溶液时芦丁浓度太低；槲皮素显色正常，没有问题；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液显色不明显，可能是精制芦丁混有杂质实验实验 2 2 分光光度法测定蔬菜总铁量分光光度法测定蔬菜总铁量 一、目的要求一、目的要求（1）学习邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法，掌握分光光度计的使用2）掌握标准曲线的绘制方法3）掌握样品的灰化方法及高温炉的使用。

二、实验原理二、实验原理在紫外-可见区电磁辐射的作用下，多原子分子的价电子发生跃迁，从而产生分子的吸收光谱各种物质的分子都有其特征的吸收光谱，以此来获得定性的信息而在选定波长下测量吸光度A与物质浓度c的关系，可对物质进行定量测定分光光度法测定的基本原理是依据朗伯-比尔定律，即KclIITA0lglg式中T为透光率；I0为入射光强度；I为透射光强度；l为吸收池厚度；c为浓度；K为吸光系数当入射光波长及吸收池厚度一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度由小到大的标准溶液，在指定条件下依次测量各标准溶液的吸光度，在一定浓度范围内，溶液的吸光度与其浓度呈直线关系以溶液的浓度c为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线测定未知试样时，操作条件与标准曲线上的相同，根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，就可计算m(槐花米)/gm(芦丁)/g产率/%100.35503.53出试样中被测物的含量测定时通常以试剂空白溶液为参比溶液，调校仪器的吸光度零点，即 100%透光率邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量铁（Ⅱ）的灵敏度高的显色剂，在 pH=2～9 的溶液中，邻二氮菲与 Fe2＋生成稳定的橙红色配合物。

该配合物的 lgK稳=21.3，在 508nm 处有最大吸收，摩尔吸光系数为 1.1×104Lmol-1cm-1在 pH=2～9 之间，颜色深度与酸度无关，且在有还原剂存在的条件下，颜色深度可保持数月不变当铁（Ⅱ）浓度在 5.0mgL-1以内时，吸光度与 Fe2＋浓度呈直线关系Fe3＋与邻二氮菲能生成淡蓝色配合物，lgK稳=14.1，因此在 Fe2＋显色前应先用盐酸羟胺（或抗坏血酸、对苯二酚等还原剂）将 Fe3＋还原为 Fe2＋，以测定总铁量 三、主要仪器及试剂三、主要仪器及试剂1.1.主要试剂主要试剂（1）铁标准溶液：准确称取 0.345g 分析纯硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)212H2O]置于烧标中，加入60mL6molL-1HCl 和少量水，溶解后用蒸镏水定容至 lL，其浓度为 40.0gmL-12）盐酸羟胺（NH2OHHCl）溶液：质量分数为 10%，新鲜配制，两周内有效3）邻二氮菲溶液：质量分数为 0.20%，配制时先用少量乙醇溶解，再用水稀释（避光保存） ，两周内有效，若出现红色则不能使用4）醋酸钠溶液（1.0molL-1） ，HCl 溶液(0.1molL-1和 6molL-1)。

2.2. 主要仪器主要仪器分光光度计、lcm 比色皿、25mL 比色管、10mL 吸量管、5mL 吸量管、2mL 吸量管、lmL 吸量管、l00mL 容量瓶、蒸发皿、坩埚、电炉、高温炉、分析天平 四、操作步骤四、操作步骤1. 蔬菜样品的灰化及灰分液的制备将蔬菜样品切碎，称取 20g 置于蒸发皿中，在电炉上慢慢加热炭化至无烟，然后转入坩埚并置于高温炉中，在 550C 下灰化至无炭粒称取灰分 0.1g（称准至 0.001g）于小烧杯中，加入2mL6molL-1HCl，使灰分溶解，再加入 6mL0.1molL-1HCl，搅匀，抽滤，再用适量 0.1molL-1HCl 洗涤烧杯和滤纸，合并滤液和洗涤液，最后用蒸馏水定容至 100mL，所得灰分液浓度为 0.001gmL-12. 标准曲线的绘制用 25mL 比色管按下表顺序配制铁标准系列并记录测量数据（注意：加入盐酸羟胺后需摇匀，放置 2 分钟，再进行下一步操作） ，以空白液为参比，在 508nm 波长下测定各溶液的吸光度在坐标纸上以铁的质量浓度（gmL-1）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线编号项目12345空白铁标准溶液/mL0.501.001.502.002.500.00质量分数 10%盐酸羟胺/mL0.50质量分数 0.20%邻二氮菲/mL1.001.0molL-1NaAc/mL2.00蒸馏水稀释至 25mL4吸光度 A0铁标准溶液质量浓度/(gmL-1)0.003. 灰分液的测定在洁净的 25mL 比色管中，加入 10.00mL 灰分液，再加入 0.50mL 盐酸羟胺，摇匀，放置 2 分钟后加入 1.00mL 邻二氮菲和 2.00mLNaAc 溶液，用蒸馏水稀释至 25mL 刻度，摇匀。

以空白液为参比，在 508nm 波长下测定吸光度根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，按下式计算该蔬菜样品铁的含量[g(g 干灰)-1]])([1040 25001. 016干灰铁的含量ggVx Vx 五、实验结果五、实验结果1.标准曲线的绘制：编号项目12345空白铁标准溶液/mL0.501.001.502.002.500.00吸光度 A0.1680.3400.4960.6630.8260铁标准溶液质量浓度/(gmL-1)0.80061.61322.41983.22644.03300.000123450.00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.0Y=0.00375+0.20429X R=0.99993Absorbancemass concentration of Fe2+图 铁标准曲线2、灰分测定：5六、分析及讨论六、分析及讨论A（灰分）铁质量浓度)/g.mL-1蔬菜样品铁含量/g(g 干灰)--10.1930.92642316。