中药化学生物碱3概要.ppt

第6节 生物碱的提取与分离 l总生物碱的提取 l生物碱的分离 l提取分离方法对生物碱结构的影响 1.总生物碱的提取（） （1）生物碱盐－－水或酸水提取法 （2）生物碱盐、游离碱－－醇或酸性醇提取法 （3）游离碱－－有机溶剂提取法 （1）生物碱盐易溶于水 水或酸水提取法（盐酸 /硫酸/ 醋酸 /酒石酸） 浸渍 /渗漉/煎煮 酸水提取液（盐） 酸碱沉淀法a 离子交换树脂法 b 有机溶剂萃取法 c 总生物碱 中药酸水提取液（盐） 碱化、（盐析）、过滤 沉淀 水洗，干燥 总生物碱 a.酸碱沉淀法 盐酸小檗碱 (Berberine hydrochloride) 中药酸水提取液（盐） 通过阳离子交换树脂柱 流出液 （水性杂质） 树脂柱 氨液碱化（游离） 氯仿提取 回收溶剂 总生物碱 b.离子交换树脂法 一叶萩碱 (securinine) 中药酸水提取液（盐） 碱化（氨水、石灰水等） 碱水层 （水性杂质） 有机溶剂层 回收溶剂 总生物碱 c.有机溶液萃取法 游离生物碱 亲脂性溶剂萃取 醇（甲、乙）类溶剂提取法 渗漉/ 浸渍 /回流 醇提取液（盐 游离） 回收 总生物碱 酸碱处理d 较纯的总生物碱 （2）生物碱盐、游离碱均易溶于醇 提取浓缩液（水）或浓缩物 酸水处理，过滤 不溶物 （脂溶性杂质） 酸水液（盐） 碱化（游离） 氯仿萃取 碱水液 （水溶性杂质） （水溶性生物碱） 氯仿液（游离） 回收 较纯的总生物碱 d.酸碱处理法 3、游离易溶于有机溶剂 （原料须碱化） 亲脂性有机溶剂提取法（苯 /二氯甲烷/ 氯仿） 冷浸/ 回流 提取液（游离） 回收 总生物碱 （3）游离易溶于有机溶剂 （原料须碱化） 长春碱 (vinblastine) 长春新碱 (vincristine) 2.生物碱的分离（） （1）不同类别生物碱的分离 （2）生物碱单体的分离 v利用生物碱碱性差异分离 v利用生物碱或生物碱盐溶解度差异分离 v利用生物碱特殊官能团分离 v利用色谱法分离 （1）不同类别生物碱的分离 原理：按生物碱的碱性及是否含有酚羟基分类。

总生物碱的酸水液（盐） 氯仿萃取 氯仿层 （弱碱性） 酸水层 （中强、强碱性） 氯仿液 （弱碱性生物碱） 1~2%NaOH萃取 碱水液 CHCl3液 NH4Cl或CO2处 理，CHCl3萃取 CHCl3液 回收 酚性弱碱性生物碱 回收 非酚性弱碱性生物碱 酸水液 （强，中强碱性生物碱） 氨水碱化pH9~10 CHCl3萃取 CHCl3液 碱水液 1~2%NaOH萃取 雷氏铵盐沉淀e 有机溶剂萃取f 离子交换树脂g 水溶性生物碱 （强碱） 碱水液 CHCl3液 NH4Cl或CO2处 理，CHCl3萃取 回收 非酚性中强碱 性生物碱 CHCl3液 回收 酚性中强碱性生物碱 碱水液 用极性有机溶剂（正丁醇 /异 戊醇/氯仿—甲醇）萃取 水溶液 （水溶性杂质） 有机溶剂 回收 水溶性生物碱 有机溶剂萃取法 碱水液 阳离子交换树脂柱 游离生物碱 碱水洗脱 生物碱盐 离子交换树脂法 酸水洗脱 （2）生物碱单体的分离 v利用生物碱碱性差异分离 v利用生物碱或生物碱盐溶解度差异分离 v利用生物碱特殊官能团分离 v利用色谱法分离 逐步加碱,pH由低至高 分别用CHCl3萃取 回收CHCl3 混合总生物碱 酸水溶解 CHCl3溶解 酸水液（盐） 生物碱 （碱性由弱到强） CHCl3溶液（游离） 缓冲液萃取,pH由高至低 缓冲液分别碱化 CHCl3萃取 回收CHCl3 生物碱 （碱性由强到弱） 利用碱性差异分离（pH梯度萃取法） 利用溶解度差异分离 利用特殊官能团分离 £含酚－OH的生物碱在碱性条件下成盐溶于 水，可与一般生物碱分离。

如吗啡与可待 因的分离 £含内酯或内酰胺结构的生物碱在碱性溶液 中加热皂化开环生成溶于水的羧酸盐，而 与其它生物碱分离，加酸后又环合成原生 物碱而沉淀如喜树碱 吗啡和可待因混合物 CHCl3溶解 氯仿溶液 1~2% NaOH溶液萃取 碱水液 CHCl3液 弱酸酸化,CHCl3萃取 回收 可待因 CHCl3液 吗 啡 回收溶剂 利用色谱法分离 £吸附柱色谱：应用广泛吸附剂为硅胶、氧化 铝，洗脱剂为以亲脂性溶剂为主的混合系统 如花椒根中6种生物碱的分离 £分配柱色谱：适用于极性较大的生物碱或结构 相近的生物碱的分离如高三尖杉酯碱与三尖 杉酯碱的分离 £其他色谱法：干柱色谱、中压或低压柱色谱、 制备薄层色谱、HPLC等 Ⅰ：8－甲氧基白屈菜红碱 Ⅱ：去甲基白屈菜红碱 Ⅲ：花椒朋碱 Ⅳ：L－N－乙酰基番荔枝碱 Ⅵ：茵芋碱 Ⅶ：arnottianamide I 花椒根中的生物碱 3.提取分离方法对生物碱结构的影响 v溶剂的影响 v酸碱的影响 v色谱分离的影响 v其他影响 第7节 生物碱的色谱检识 l理化检识 形态、颜色、气味等 沉淀反应 显色反应 l色谱检识 薄层色谱 纸色谱 高效液相色谱 气相色谱 1.薄层色谱 （1）吸附薄层 适用于分离和检识脂溶性生物碱。

v吸附剂：硅胶、氧化铝 v展开剂：亲脂性溶剂为主一般以氯仿为基本溶剂，根据 色谱结果调整展开剂的极性加入适量碱性溶剂，分离效 果较好 v显色：有颜色的直接观察；有荧光的紫外下观察；多数用 改良的碘化铋钾试剂显色（桔红色斑点） v注意：Rf太小和复斑或拖尾时，可用碱液（0.1-0.5M NaOH ）制板；或用碱性展开剂（少许二乙胺或氨水）；或在层 析槽中放一盛有氨水的小器皿 （2）分配薄层 适用于极性较大或结构相近生物碱的分离 v支持剂：硅胶或纤维素粉 v固定相：甲酰胺（脂溶性生物碱） 水（水溶性生物碱） v展开剂：对于脂溶性生物碱，用甲酰胺饱和的亲脂 性有机溶剂为展开剂，如氯仿－苯对于水溶性生 物碱，以亲水性的溶剂为展开剂，如BAW（正丁醇- 乙酸-水=4:1:5，上层）系统 v显色：同吸附薄层 2.纸色谱 适用于水溶性生物碱、生物碱盐和亲脂性生物碱 的分离检识 v固定相：水、甲酰胺或酸性缓冲液 v展开剂：水做固定相，以亲水性的溶剂为展开剂， 如BAW系统，适用于分离生物碱盐以甲酰胺或酸性 缓冲液为固定相的，多以亲脂性溶剂为主的展开系 统，使用前用固定相饱和，适用于分离游离碱 v显色剂：同薄层法，含硫酸显色剂除外。

千金藤非酚性叔胺碱部分多缓冲纸色谱 3.高效液相色谱 （1）吸附色谱 （2）分配色谱：正相色谱 反相色谱 固定相：弱碱性的键合相硅胶 流动相：偏碱性较好 黄连根的HPLC图 C：黄连碱 B：小檗碱 P：巴马丁 J：药根碱 M：木兰碱 流动相：水-乙腈-乙酸-三乙胺(80:20:0.3:0.8) 4.气相色谱 适用于挥发性化合物，或遇热不分解化合物 的分离在生物碱检识中应用不多，如麻黄碱 1.去甲伪麻黄碱 2.去甲麻黄碱 3.麻黄碱 4.伪麻黄碱 5.甲基麻黄碱 IS: 内标二苯胺 色谱柱：DB-5MS （30m×250μm，0.25μm），程序升温 载气：氦气，流速为1mL•min-1 无分流进样；进样口温度为250℃，进样量1μL 质谱参数：离子源温度230℃，电离方式EI，电子能量70eV SIM：44、58、72和169的离子 。