蚕豆根尖微核测试.doc

蚕豆根尖诱变物质的微核测试一、实验目的了解微核测定的方法和意义二、实验原理微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样致变因素——化学因素：药物（环磷酰胺、氮芥、白硝安、甲氨喋呤、阿糖胞苷等抗癌药物；农药（有机磷农药）；工业毒物（苯、甲苯、铝、砷、二硫化碳、氯丁二稀、氯乙烯单体等）；食品添加剂（食品的防腐剂、色素等）物理因素：电离辐射，微小剂量的射线能不断积累生物因素：生物体产生的生物类毒素；某些生物体（如杂色曲霉等）母体因素：因年龄等三、实验材料1.蚕豆——根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对诱变因子反应敏感。

2. 器具和药品显微镜、手动计数器、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯6mol/L盐酸、甲醇、冰醋酸、醋酸洋红、K2Cr2O7四、实验内容 实验选取蚕豆50粒，平均10粒分5组进行实验，ABCDE,100mg/LK2Cr2O7 100ml稀释到600ml，除E组外平均每组150ml浸泡，时间梯度增加，观察时间单位上相同因素对细胞的影响 A组浸泡24h B组浸泡24+4h C组浸泡24+4+4h D组用浸泡24+4+4+4h E组蒸馏水浸泡24h 五、实验步骤（1）浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25℃下浸泡24小时，此间至少换水两次，所换水应25℃预温种子吸胀后，用纱布松散包裹置瓷盘中，保持温度，在25℃温箱中催芽12～24小时，待初生根长出2～3mm时，再取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的瓷盘中，25℃继续催芽，经约36-48小时，大部分初生根长至1～2cm左右，根毛育良好，此时可用来进行实验2）检测因子处理根尖：选取初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可3）根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分钟。

洗净后再置入辅有混润滤纸的瓷盘中，25℃下再恢复培养22～24h4）固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用甲醇：冰醋酸（3：1）液固定24小时固定后的根如不及时制片，可换入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用5）解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸净蒸馏水，加入6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分钟，幼根软化即可6）染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟截下1～2mm左右长的根尖，滴加醋酸洋红染液，染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察六、实验结果首先在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察微核大小在主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为该处理的MCN%，即微核千分率，以此可作一个检测指标污染指数（PI）=样品实测MCN%平均值/对照组（标准水）MCN%平均值鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数污染指数在0～1.5区间基本没有污染1.5～2区间为轻度污染2～3.5区间为中度污染3.5以上为重度污染。