虎眼万年青总皂苷的毒理实验研究.doc

1虎眼万年青总皂苷的毒理实验研究作者：金星林， 杜希臣 千昌石【摘要】 目的观察虎眼万年青总皂苷对幼鼠的急性毒性作用方法按 Bliss 法，根据所提取的虎眼万年青总皂苷不同剂量一次性灌胃后，逐日观察小鼠 7 d，并记录动物毒性反应、死亡数，计算 LD50 和 SLD50结果 Wistar 幼鼠的 LD50 为 3.2 g/kg；SLD50 为（3.2±0.196） g/kg结论虎眼万年青总皂苷有一定的毒性 【关键词】 虎眼万年青 总皂苷 实验 毒理Abstract：ObjectiveTo observe the acute toxic effect of total saponin from Ornithogalum caudatum Ait in mice.MethodsBy Bliss method，Wistar mice were selected and intragastrically administered with different concentration of total saponin from Ornithogalum caudatum Ait ．Then the mice were observed for 7 d with toxic reaction，death, and autopsy conditions recorded.ResultsMedial lethal dose(LD50)of the total saponin from Ornithogalum caudatum Ait for mice was 3.2 g/kg and 95％ confidence interval SLD50(3.2±0.2)g/kg.ConclusionThe total saponin has some toxic effect on mice.Key words：Ornithogalum caudatum Ait； Total saponin； Mice； Toxic test虎眼万年青 Ornithogalum caudatum Ait 为百合科多年生球根植物，原产于非洲南部，民间全草入药，用于抗炎、抗肿瘤等治疗。

虎眼万年青球茎中含有大量的生物碱及化学成分，其中虎眼万年青皂苷（OSW-1）抗 P338 淋巴细胞白血病活性，是常见抗癌药物喜树碱、阿霉索、紫杉醇抗癌活性的 10～100 倍，而对正常细胞没有毒性［1］由于 OSW-1 提取、合成工艺复杂且成本昂贵，给广泛的实验、应用研究工作带来一定困难为了进一步开发和利用虎眼万年青植物，本实验拟对虎眼万年青总皂苷的急性毒性进行观察1 材料与仪器2虎眼万年青药材购自吉林省长白县农业局Wistar 幼鼠，体重 18～22 g，雌雄各半购自延边大学医学院动物实验中心薄层层析板，德国 Merck 公司生产的硅胶板(Kiesel-gel 654)；大孔吸附树脂：商品号 AB-8 树脂、商品号 D-280 树脂，南开大学化工厂生产；其他试剂均为分析纯2 方法2.1 虎眼万年青总皂苷的提取取植物虎眼万年青，在自然条件下干燥，粉碎成粉加入 95%的乙醇浸泡 24 h，纱布、滤纸过滤后，收集滤液，滤渣继续加入乙醇浸泡，同上方法循环 3 次，收集滤液，将 3 次所得滤液合并滤液经减压浓缩为原来体积的 1/5，再用 1/3 体积的石油醚萃取脱脂，保留水相，再次减压蒸馏后，加水稀释上 AB-8 柱吸附，反复吸附 3 次，6～8 倍柱体积水洗掉糖后用 5 倍柱体积95％乙醇洗脱皂苷。

所得皂苷洗脱液，经 D-280 柱脱色后，减压浓缩后蒸干，即为虎眼万年青总皂苷［2］2.2 预实验按序贯法找出 0％估计致死量(Dn)和 100％估计致死量(Din)取 9只 Wistar 幼鼠，随机分 3 组，虎眼万年青总皂苷分别以 5，0.5，0.05 g/kg 剂量灌胃，结果死亡率分别为 3/3，0/3，0/3；再取 9 只小鼠，随机分 3 组，分别以 5，1.5，0.5 g/kg 剂量灌胃，结果死亡率分别为 3/3，0/3，0/3估计 Dm 为 5 g/kg，Dn 为 1.5 g/kg，Dm/Dn=3，查表取 K=0.8，N=52.3 正式实验按 Bliss 法设计，50 只 Wistar 幼鼠随机分 5 组，每组 10 只，雌雄各半，5 个剂量组分别为 5.0，4.0，3.2，2.56，2.05 g 虎眼万年青总皂苷，组间剂量比值为 1∶0.8给药前小鼠禁食 16 h，自由饮水，等容积不等浓度一次性灌胃，其3中 5.0 g/kg 可能是最大给予浓度给药后立即观察和记录中毒症状和死亡情况，观察期为 7 d,计算半数致死量（LD50）、平均致死量 95%平均可信限（SLD50） 3 结果急性毒性反应和死亡情况 给药第 1 天，均表现活动、进食减少，神情倦怠；5 g/kg 剂量组各有雌雄 3 只死亡；4.0 g/kg 剂量组有雄鼠 3 只，雌鼠 2 只死亡；3.2 g/kg 剂量组有雄鼠 1 只，雌鼠 2 只死亡；2.56 g/kg 剂量组雄鼠 1 只死亡；2.05 g/kg剂量组雌鼠死亡 1 只。

给药第 2 天，活动、进食、神情无改善；5.0 g/kg 组雄鼠 1 只死亡；4.0 g/kg 剂量组雌鼠死亡 1 只；3.2 g/kg 剂量组雌鼠死亡 1 只；2.56 g/kg 剂量组雄鼠死亡 2 只；2.05 g/kg 剂量组雌鼠死亡 1 只给药第 3 天，5.0 g/kg 剂量组雌鼠 1 只死亡；3.2 g/kg 计量组雄鼠 1 只死亡，其余小鼠活动、进食、神情均稍有改善给药第 4 天，4.0 g/kg 剂量组雌鼠 1 只死亡；其余小鼠活动、进食、神情明显改善给药第 5 天，再无小鼠死亡至第 7 天，小鼠活动、进食、神情、二便、被毛、肤色、呼吸均正常，除 2.05 g/kg 剂量组外，体重均有所下降结果见表 1～2表 1 小鼠经口灌胃虎眼万年青总皂苷 LD50 测定（略）表 2 小鼠经口灌胃虎眼万年青总皂苷死亡情况、体重变化（略）以上结果，按寇氏改良法计算 LD50 为 3.2g/kg；SLD50 约为（3.2±0.196）g/kg4 讨论虎眼万年青球茎中含有大量的生物碱及化学成分，已测出的化学成分有 27 种之多［3］，因此，是一种极具开发潜力的中草药虎眼万年青总皂苷提取工艺简单，但由于总皂苷是粗体物，其内含有大量的化学成分，势必有一定的毒性。

4LD50 是测定药物半数致死量毒性的一种实验方法，对中药制剂的安全性评价具有重要意义本次研究得到了虎眼万年青总皂苷 LD50 的剂量，为实验研究及应用奠定了基础同时，实验表明虎眼万年青总皂苷在大剂量灌服情况仍具有较大毒性和致死率，可见虎眼万年青总皂苷在应用中仍须把握一次性剂量，传统观念认为中药无毒、很安全的思想是错误的通过本研究表明小鼠的 LD50 为 3.2 g/kg；SLD50 约为（3.2±0.196）g/kg因此，作为医学中的施药剂量，无论是中药或西药必须有一个度，需要谨慎而切勿滥用，可谓既要能药到病除，又注重病除而药止本研究为开发利用虎眼万年青植物提供了强有力的证据，具有重要的参考意义参考文献】［1］Mimaki Y,Kuroda M,Kameyama A,et a1.Cholestane glycosides with potent cytostatic activities on various tumor cells from Ornithogalum saundersiae bulls［J］. Bioorg Med Chem Lett,1997,7(5):633.［2］肖 冲，鱼红闪．虎眼万年青皂苷的分离提取［J］．大连轻工业学院学报，2006，25(2)：93.［3］TANG Yuping, YU Biao.The chemical constituents from bulbs of ornithogalum caudatum［J］．Journal of Chinese Pharmaceuticeal Sciences,2001,10(4)： 26.。