临床科研选题与科研设计.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床科研选题与科研设计,（,做科研型医生）,中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础医学院,以几个案例作例子来阐述,Idea,（新鲜）（创新点）,Design,如何,(,从哪几方面,),来验证，它们的逻辑关系,Methods,（逻辑，内在联系）,新发,SLE,患者（创新点）,调节性,T,细胞的研究,(,表面标志,CD25,与转录因子,Foxp3,的,表达、细胞的抑制作用、其临床意义）,国外的,SLE,患者绝大多数有激素或细胞毒药物治疗的经历,案例一,自身免疫应答靶抗原的的“暴露”或形成（隐蔽抗原）,微生物感染激活自身反应性淋巴细胞（分子模拟）,协同刺激分子的异位表达,多克隆淋巴细胞的非特异性活化（超抗原）,免疫调节紊乱（包括,调节性,T,细胞,数量减少或功能减弱）,其它,自身免疫病发病的免疫学因素,CD4+CD25+,调节性,T,细胞（其抑制功能需,Foxp3,转录因子表达）,调节性T细胞,案例一涉及的3项研究,研究,新发,SLE,患者周围血中,CD4+,T,细胞的,CD25与FoxP3,表达，及,Glucocorticosteroid/cyclophosphamide,治疗对,CD25,与,FoxP3,在,CD4+,T,细胞表达,的影响。

研究对象为,24,例新发活动期,SLE,患者,、,20,例新发非活动期,SLE,患者,、,21,例年龄性别相合的正常志愿者分离周围血的单个核细胞，用流式细胞仪检测,CD4 T,细胞,CD25,与,FoxP3,的表达发现,FoxP3,在,新发,SLE,患者,CD4+CD25+T,细胞的表达下降，在,CD4+CD25-T,细胞,的,表达增强还检测了,Glucocorticosteroid,与,cyclophosphamide,治疗对,FoxP3,在,CD4+CD25+,和,CD4+CD25-T,细胞表达,的影响,第1项研究：Reduction of Foxp3 levels in CD4+CD25high T cells in patients with,new-onset systemic lupus erythematosus.,Clin Exp Immunol.2008;153(2):182-7.,研究,新发,SLE,患者,周围血,CD4+CD25-Foxp3+,T,细胞的临床意义,检测10例活动期、11例非活动期新发,SLE,患者、及11例健康志愿者用流式细胞仪分析,Foxp3,与,CD25,在,CD4 T,细胞的表达。

分离,CD4+CD25+与CD4+CD25-T,细胞，检测它们对T细胞增殖的影响G,检测,CD4+CD25-T,细胞与其他临床指标（如抗,dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI,）的相关性,这个故事并不复杂，内容较简单，文内仅2张图与1个表格但创新点明显，文章发表于Ann Rheum Dis.2008;67(7):1037-40.Impact fector 7.188第2项研究：,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with,new-onset systemic lupus erythematosus,第3项研究:,Are CD4,+,CD25,Foxp3,+,cells in untreated new-onset lupus patients regulatory T cells?Arthritis Res Ther 2009;11(5):R153,研究新发,SLE,患者周围血中的,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞与,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同，及,CD4+CD25-Foxp3+,T细胞,有否抑制。

检测,22,例新发,SLE,患者用流式细胞仪分析比较,CD4+CD25-Foxp3+,细胞与,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异检测,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞对,T,细胞增殖有否调节作用新发,SLE,患者其它免疫细胞有什么特点,新发其它自身免疫病免疫细胞有什么特点,新发其它自身免疫病,其它免疫学指标有什么特点,从案例一能得到的启发,案例二,新型抗流感药,DAS181,的研发,A,型流感病毒的生活周期,已批准上市的抗流感药物,M2,离子通道阻滞剂,盐酸金刚乙胺（,1993,年美国,FDA,批准上市）,金刚烷胺（,1966 FDA,年批准为预防药，,1976,年确认其为治疗药）,神经胺酸酶（,NA,）抑制剂,达菲（,1999,年美国,FDA,批准上市）,扎那米韦（,1999,年,5,月首先在澳大利亚获准上市）,除了毒副作用外，,主要的问题是流感病毒产生抗药性，因为病毒基因突变,研发中的抗流感药物,流感病毒的,NA,与,HA,相互作用感染靶细胞,Neu5Ac,(2,3)-Gal,与,Neu5Ac,(2,6)-Gal,分子就是流感病毒的受体人流感病毒主要识别,(2,6)-Gal,唾液酸，禽,流感病毒与马流感病毒主要识别,(2,3)-Gal,唾液酸。

流感病毒的,HA,与细胞表面含,(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal,唾液酸的糖蛋白相结合人,呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是,(2,6)-Gal,型，但也有,(2,3)-Gal,型，所以,禽,流感病毒也能感染人，尽管感染效率不高NA,的作用是破坏,HA,的受体它酶切呼吸道黏膜上诸如,mucin,等潜在抑制性分子的唾液酸，从而使之灭活，促进病毒在呼吸道传播;酶切病毒感染细胞表面的唾液酸，促进子代病毒释出，以助于病毒传播HA,的受体结合作用和,NA,的受体破坏作用相互相成，维持平衡，于病毒复制和传播十分重要呼吸道上皮细胞,唾液酸,流感病毒,HA,NA,以往有报道，体外实验中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染细胞因此学者欲研制一种融合蛋白，由唾液酸酶与能锚定于人呼吸道上皮细胞的蛋白组成,DAS181,的分子模式,报道已从微生物和真核细胞分离出,15,种底物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶从中选择,A.viscosus,唾液酸酶的催化功能域其理由为：底物特异性广；催化活性最大；人免疫系统对其耐受，因为人正常口腔和胃肠道细菌也产生此唾液酸酶DAS181,抗流感病毒作用的研究（细胞、小鼠与雪貂模型）,DAS181,的创新点,靶点在宿主细胞上，能避免产生病毒耐药,广谱抗流感病毒药物（,A,B,型流感、流感病毒耐药株、副流感病毒）,能酶切,SA,2,3Gal,和,SA,2,6Gal,，也能酶切,SA,2,8Gal,。

因此，对现有流感毒株、未来毒株、及重组变异毒株均有效,吸入给药，生物利用度高,药物作用持续时间较长：至少,2,天（,MDCK,),至少,7,天（,HAE,),，用于预防和治疗均可,案例三：与,IgA,肾病发病机制相关,聚糖,（glycan),核酸、蛋白质、聚糖和脂是所有细胞的4种基本大分子,核酸链基本上由,4,种核苷酸组成,肽链基本上由,23,种氨基酸组成,糖链十分复杂,脂质按生物学功能可分为三类：,储存脂质（包括甘油三脂和蜡）,结构脂质（构成生物膜脂双层的磷脂）,活性脂质（类固醇和萜）,案例四：几个病案分析及其它,XXX,等（301医院）：不明原因发热的病因分布及临床特征,2000年1月至2009年1月在301医院内科住院且符合不明原因发热的患者816例，病因分布，临床特征，老年患者与非老年患者之间的比较XXX,等（北京协和医院）：结石性急性胆管炎的治疗,急诊的,急性胆管炎患者,426例，随着介入技术（急性行经皮经肝胆道穿刺引流术）和内镜技术（急性行经内镜逆行胰胆管造影）的进展，,急性胆管炎患者由,急诊手术经保守治疗或介入治疗转为择期手术，可以大大减少手术并发症发生率，降低手术死亡率。

XXX,等（北京协和医院）：胰腺实性假乳头状瘤的CT诊断及鉴别诊断,对14例病理确诊的胰腺实性假乳头状瘤患者的,CT,资料作,CT,诊断及鉴别诊断(无功能性胰岛细胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊肿,）分析,XXX,等（北京协和医院）：细针穿刺技术在乳腺癌手术治疗中的应用价值,北京协和医院初诊考虑乳腺癌可能性大的530例女性患者作,细针穿刺细胞学（,FNAC,）检查FNAC,检查阳性,325,例，直接行,乳腺癌根治术，,术后组织病理学检查均为,乳腺癌FNAC,检查阴性,205,例，开放活检术，术后组织病理学检查,137,例,乳腺癌，,68,例非,乳腺癌表明,FNAC有助于,对怀疑,乳腺癌者选择适当的术式以中国医学科学院学报2011年第1期上的几篇论文为例,病案分析加检验科检测指标,也能发SCI文章,2009,确定,“,点,”,，要有新意,要有正常对照和其它对照（如阳性对照）,分析的指标不能单一，分析要有层次,正确的统计处理,最好能结合一点实验室检测,病案分析中需注意的几点,药剂科的人员一般做药代动力学和生物效性等的试验较多,对药剂师科研工作的建议,与临床大夫密切合作,参与新药研制,有效制剂的开发（如协和医院的健脑合剂等）,做一点药物作用机理的研究,科研工作中尚需注意的几点,每一步都要走得踏实，要核实试剂和仪器是否,OK,（以本人做,PCR,检测及研制,PSA,试剂盒失败为例说明）,表位可分成两类：,线性表位（,linear，,指肽链上由一段序列相连续的氨基酸残基所形成的抗原表位,）和构象表位（,conformation，,指多肽或多糖链上由空间位置相邻，而序列上不相连续的氨基酸残基或多糖残基所形成的抗原表位,）,严格实验操作，做好实验记录（包括病案记录）,随时分析实验结果，适时对研究目的和技术路线作调整,爱因斯坦有关如何做科学研究的名言,One percent inspiration and ninety nine percent perspiration,灵感来自哪里?临床实践与文献。

要找到和明确什么是你研究的“,点,”（,创新最关键,）Idea,Design,(切实可行的技术路线,从哪几方面说明这个“点”，它们的逻辑顺序怎样）,Methods,需要多一点分子生物学、免疫学、细胞生物学等的知识，需多读文献如何写科研论文,明确什么是这篇论文的“,点,”确定论文的题目画制图表（论文的,核心,）,材料与方法,查阅文献,引言（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨论（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）,摘要,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus,题 目,以前述案例一（2）为例,实验结果（图表的制作）,Fig 1.CD4+CD25+Foxp3+and CD4+CD25-Foxp3+T cells in SLE patients and normal controls,Fig 2.The expression of CD127 by CD4+T cell subpopulation,材料与方法,（可以参考他人的文章）,前言,CD4+CD25+,调节性,T,细胞在,SLE,发病中作用的的报道不甚一致，且尚无在新发,SLE,患者研究的报道,Foxp3,表达不只限于,CD4+CD25+T,细胞,（,Treg,），作者以往研究观察到,新发,SLE,患者,CD4+CD25-Foxp3 T,细胞频率增高,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞有什么临床意义,（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨 论,有关,CD4+CD25+Treg,细胞在,SLE,患者周围血中状况的报道不尽相同。