水油水体系中的胰岛素的快速分离和定量测定.pdf

水一油一水’’体系中的胰岛素的快速分离和定量测定邓斌1 ’2 ，刘征1 ，罗国安¨，马红1 ，段明星H( 1 清华大学生命科学与工程研究院，北京，1 0 0 0 8 4 )( 2 云南烟草研究院，昆明，6 5 3 1 0 0 )目前胰岛素应用于糖尿病人的治疗尚停留在注射阶段，为了扩大胰岛素的应用范围，口服型胰岛素的研制一直是广大药学家和医疗工作者关注的对象口服型胰岛素开发的关键主要是如何克服肠胃分泌物对胰岛素的分解，并顺利进入血液中起降血糖的作用为此，我们应用一种特殊的油制剂将亲水性的胰岛素进行包裹，再用一种非离子的双亲赋形剂一L a b r a s o l ( 应用于食品工业中) ，在油剂型胰岛素外围再形成一道亲水膜，使油剂型胰岛素在水相中形成以“水一油一水”( w ／o ／w ) 体系为基础的口服剂型u ’3 1 本文对比了H P L C 与M E K C应用于该体系中胰岛索的分离、定量测定及样品回收率实验，并总结出了最佳的分离方案1 实验部分1 ．1 仪器毛细管电泳系统为B E C K K A NP ／A C E T MM D Q ( F u l l e r t o n ，C A ，U S A ) 。

毛细管柱为未涂层熔硅弹性石英毛细管( B e c k m a nI n s t r u m e n t s ，I N C ．) ，内径7 5um ，柱长5 0a m ，有效柱长4 0a m 检测器为二极管阵列检测器( F u l l e r t o n ，C A ，U S A ) H P L C 为B e c k m a nG o l dl1 0 Bd e l i v e r ym o d u l e ，由1 6 6d e t e c t o r ( F u l l e r t o n ，C A ，U S A ) 在2 1 4n m 处检测分离柱为B e c k m o nO D SU L T R A S P H E R E5 胛，15 0X4 ．6m mI ．D ．c o l u m n ( F u l l e r t o n ，C A ，U S A ) 1 ．2 药品和试剂胰岛素、牛血清白蛋白( 组分V ) 购于S i g m a 公司( S t ．L o u i s ，M O ，U S A ) ．T r i s 购于B i o —R a dP a c i f i cL T D ( K o w l o o n ，H o n gK o n g ) ，乙腈( A C N ) 购于F i s h e rS c i e n t i f i c ( F a i rL a w n ，N J ，U S A ) ．L a b r a s o l 为G a t t e f o s s 6C o m p a n y ( F r a n c e ) 馈赠。

其它试剂均为国产分析纯实验用水为二次蒸馏水溶液和样品在实验前均用0 ．2um 的滤膜过滤1 ．3H P L C 条件流动相为5 0a Ms o d i u mp h o s p h a t e 和A C N ( 2 ：1v ／v ) 及0 ．1 ％T F A ( v ／v ) ．进样量为2 0斗l ，流速为O ．5m l ／m i n ，室温下分离⋯1 ．4M E C K 条件电极缓冲液( B G E ) 由1 0m m o l ／LT r i s - H C L ，1 0 ％L a b r a s o l ( v ／v ) ，1 0 ％A C N ( v ／v ) 组成( p H = 8 ．2 ) ，配好后在超声条件下脱气5 m i n ，0 ．1m o l ／LN a O H 和水各冲洗3m i n ( 2 5p s i ) ，压下进样5S 然后在2 0k V 电压下进行分离，然后通过0 ．2um 的滤膜过滤在进样前用接着用B 6 E 冲洗3m i n ( 2 5p s i ) 0 ．2p s i 气柱温控制在2 5 2 1 4n m 检测2 实验结果及讨论胰岛素和白蛋白在H P L C 和M E K C 中都得到了较好的基线分离。

但油峰和胰岛素峰在两者中3 7出峰顺序各不相同，在H P L C 中，胰岛索峰在前，而在M E K C 中正好相反两种方法的定量分析结果如表1 所示H P L C 方法性范围、精密度、最低定量限等指标上稍优于M E K C 方法，但样品回收率较差，仅在6 3 ％，而M E K C 达至U 9 2 ％除此之外，M E K C 方法具有简便、快速和成本低的特点，完全适用于口服油剂型胰岛素胶囊的研制、药代和质量控制的需要同时，此方法还可广泛应用于其它同样体系的蛋白药物的分析，这为许多药物从脂溶性的形式转化为水溶性的剂型后的分离和定量测定开辟了新的分析方法和途径表IH P L C 和M E K C 方法对W ／O ／W 体系中胰岛素定量分析情况‘浓度( m g ／m ] ) ：0 ．8 ．b 由胰岛索和油峰间算出．参考文献1 ．M o r i s h i t a M M a t s u z a w a A ，T a k a y m m a K ，c t a l ．／n t J P h a r m ，1 9 9 8 ，1 7 2 ( 1 - 2 ) ：1 8 9 _ 1 9 8 ．2S i l v a C u n h aA ，G r o s s i o r dJ L , P u i s i c u xF ' C ta 1 ．I n t J P h a r m ，1 9 9 7 ，1 5 8 ( 1 ) ：7 9 - 8 9 ．3 ．D c n gB ，L i uZ ，L u oGA ．M aH ，D u a nMX ．J P H A R M A C E U T B I O M E D ．2 0 0 2 ，2 7 ：7 3 —8 03 8。