722S型分光光度计操作规程.docx

722S 型分光光度计操作规程XXXXXXXXX检测中心作业指导书文件代号HNCDC/ QTDxx-xxxx第4版 第0 次修订 第1页 共2 页722S 型分光光度计操作规程实施日期XXXX年XX月XX日1 目的为保证722S型分光光度计的正常运转，确保其出具的数据准确、可靠，特制定本规程 2 适用范围本实验室现有722S型分分光光度计的使用和维护3 职责仪器操作人员需严格按照此规程进行4．技术特性4.1 使用环境：4.1.1仪器应放在干燥的房间内，室温5〜35 °C,室内相对湿度小于85%4.1.2 使用时放置在坚固平稳的工作台上，避免震动，并避免阳光直射及强烈电磁场干扰 避免灰尘及腐蚀性气体4.1.3 电源电压：(220±22) V 频率(50±1) Hz4.1.4 仪器表面宜用温水擦试，请勿使用酒精、丙酮等溶剂清洁4.2 主要技术参数4.2.1光学系统：衍射光栅C-T单色器4.2.2 波长范围： 340-1000 nm4.2.3 光源：卤素灯20 W/12 V4.2.4 波长准确度：±2 nm4.2.5 波长重复性： 1 nm4.2.6 透射比准确度：土0.5% (t) (SRM930D)4.2.7透射比重复性：0.3% (t)4.2.8 光谱带宽： 6 nm。

4.2.9 杂散光：W0.5% （t） （360 nm, NaN02）4.2.10 显示标尺：（T）： 0.0%〜199.9%（A）： -0.3〜2.999（ F）：1〜9999（C）：0〜99995 操作方法5.1.1 预热：仪器开机后灯及电子部门需热平衡，故开机预热30分钟才能进行工作，如紧 急应用时请注意随时调节0%T,调100%T5.1.2 调零：目的：校正基本读数标尺两端（配合100%T调节），进入正确测试状态； 调整：开机预热后,改变测试波长时或测试一段时间,以及作高精度测试前； 操作：打开试样盖（关闭光门或用不透光材料在样品室中遮断光路）,然后按0%键,即能自 动调整零位5.1.3 调整 100%T目的：校正基本读数标尺两端（配合调零）,进入正确测试状态；调整：开机预热后,更换测试波长或测试一段时间后,以及作高精度测试前一般在调零 前应加一次100%T调整以使仪器内部自动增益到位）；操作：将用作背景的空白样品置入样品室光路中,盖上试样盖（同时打开光门）按下100% 键即能自动调整100%T （一次有误差时可加按一次）；注：调整100%T时整机自动增益系统重调可能影响0%T,调整后请检查0%T，如有变化可 重调 0%键一次。

5.1.4 调整波长 使用仪器上唯一的旋钮,即可方便地调整仪器当前测试波长,具体波长由旋钮左侧的显示窗 显示,读出波长时目光垂直观察注:本仪器因采用机械联动切换滤光片装置，故当旋钮转动经过480 nm时会有金属接触声， 如在480-1 000 nm间存在轻微金属摩擦声，属正常现象5.1.5 改变试样槽位置让不同样品进入光路试样槽架是四位置的，用仪器前面的试样槽拉杆来改变，打开样品室盖以便观察样品槽中的 样品位置最靠近测试者的为“0”位置，依次为“1”、“2”、“3”位置对应拉杆推向最内为 “0”位置，依次向外拉出相应为“1”、“2”、“3”位置，当拉杆到位时有定位感，到位时请 前后轻轻推动一下以确保定位准确5.1.6 确定滤光片位置本仪器备有减少杂光，提高340-380 nm 波段光度准确性的滤光片，位于样品室内部左侧， 用一拨杆来改变位置当测试波长在340-380 nm波段内如作高精度测试可将拨杆推向前（见机内印字指示），通常 可不使用此滤光片，可将拨杆置在400-1000nm位置注：如在380-1000nm波段测试时，误将拨杆置在340-380nm波段，则仪器将出现不正常现 象如噪声增加，不能调整100%T等）5.1.7 改变标尺 本仪器有四种标尺：透射比：用于对透明液体和透明固体测量透射特点； 吸光度：用于采用标准曲线法或绝对吸收法定量分析，在动力学测试时亦能利用本系统； 浓度因子：用于在浓度因子法浓度直读时设定浓度因子；浓度直读：用于浓度直读时，作设定和读出，亦用于设定浓度因子后的浓度直读； 各标尺间的转换用模式键操作并由“透射比”、“吸光度”、“浓度因子”、“浓度直读”指示灯 分别指示，开机初始状态为“透射比”，每按一次顺序循环。

5.2 应用操作5.2.1 测定透明材料的透射比预热-设定波长-置入空白-置标尺为“透射比”-确定滤光片位置-粗调100%T-调零-调100%T-置入样品-读出数据-关机5.2.2 测定透明材料的透射比曲线在要求测量的波段内按要求的间隔逐点按 5.2.1 的步骤重复执行，并将各波长点对应透射比 值标记在方格纸上即呈现该材料的透射比曲线5.2.3 测定透明溶液的吸光度预热-设定波长-置入空白-调100%T、0%T-置标尺为“吸光度”-样品置入光路-读出数据-关机5.2.4 用标准曲线法对物质定量 取已知含量的标准样品-按样品各自的分析规程制备样品溶液及背景溶液-设波长、置空白、 调零、置“吸光度”、读出样品吸光度-重复上步读出各标准溶液吸光度-以各样品中已知含 量及读得吸光度绘制标准曲线-读未知样品得吸光度，在曲线表上找出对应浓度，然后关机5.2.5 直接使用浓度直读功能 当对象分析规程比较稳定，在标准曲线基本过原点情况下，用户可不必采用手续较复杂得标 准曲线法，而直接采用浓度直读法定量，本方法仅需配置一种浓度在用户要求定量浓度范围2/3 左右的标准样品，操作如下：测出标准样品吸光度-置标尺为浓度直读-按f或（键使读数达已知含量值（或含量值的10n 倍）-置入未知样品溶液-读出显示值即含量值（或含量值的10n倍）-关机5.2.6 直接使用浓度因子功能 在上节执行第三步后如置标尺至“浓度因子”，在显示窗中出现的数字即这一标准样品的浓 度因子，记录这一因子，则在下次开机，测试时不必重测已知标准样品只需要输入这一因子 即可直读浓度，具体步骤如下：开机、预热、置波长、置背景溶液、调0%、调100%T-置标尺为“浓度因子”-按f或/键 使显示值为输入因子数-置标尺为“浓度直读” -置入未知样品溶液-读出显示值即浓度值-关 机6 期间核查程序6.1 概述722s 型分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效应，物 质对光的吸收是具有选择性的。

各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光 通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱因此，仪器的波长准确度对测定结果有直接影响 当仪器工作数日或搬动后，必须进行校验，以确保仪器的使用和测定的精确6.2 期间核查方法6.2.1 使用标准物质进行核查 选一有证标准物质，按照标准方法用该仪器测定该标准物质中某参数测得数据（应是平均 值），与标准物质的已知数据相比较判定公式：式中：y1――核查时，用该仪器测得的标准物质中某参数的平均值；U1——标准物质中该参数的已知值；yref 实验室核查时提供的扩展不确定度，k=2;Uref——标准物质证书中提供的该参数的扩展不确定度，k=2o当 时为合格6.2.2 采用仪器比对法进行核查 当实验室有两台同类型测量设备时，可用被测对象（或核查标准）进行测量，得到测量值分 别为y1、y2,其测量不确定度分别为U1、U2这两台设备应溯源到同一计量标准，它们 之间具有一定相关性，但在评定不确定度时可不予考虑判定公式：式中：y1――第一台测量设备的测量值；yl――第二台测量设备的测量值；U1――第一台测量设备测量结果的扩展不确定度，k=2；U2――第一台测量设备测量结果的扩展不确定度，k=2.当 时为合格。

6.2.3 核查仪器波长的准确性 镨钕玻璃是一种含有稀有金属镨与钕的玻璃制品，它的光谱吸收特性是固定不变的因此，可以用镨钕玻璃核查仪器波长的准确性，作调整仪器波长时的依据错钕滤光片的特征吸收峰为529nm6.2.3.1 检查方法：1 ）先将波长盘指示在580 nm,观察出射单色光为黄色，如不是，要调节波长螺杆使出射 光为黄色2 ）将波长指示转到520.0 nm,光路空白时调节100%，然后拉动拉杆将错钕玻璃推入光 路，测定其吸收率，记下读数，再将波长盘转到 522、 524、 526、 527、 528、 529、 530、 531、 532、534、536 nm,这样依次逐点测定吸收率，记下读数6.2.3.2 检验结果的判定：查出上述各点吸收率的最小值，观察波长读数是否为（529.0±3.01） nm,如果在这区 间之内，说明波长基本正确，不用校正如在这区间之外，需调节波长校正调节螺杆（只需 稍微转一点），再重复上述检定，直到符合允许误差范围为止6.3 核查周期六个月7 维护程序及周期7.1 光源灯7.1.1 拿灯时不要碰窗口，以免手上的油污经紫外照射后，形成结痕难以去掉,每当因不小 心而碰触时，均应及时用无水乙醇抹擦干净。

7.1.2 每次均需待灯冷却后，再重新启动启动后预热 15-30 min 才能读数7.2 单色器7.2.1 平时要放入变色硅胶，保持内部干燥，发现硅胶变红，应及时更换每次测定挥发样 品必须使用密封吸收池，以免样品蒸气进入单色器，腐蚀反射镜、透镜及色散元件的镜面7.2.2 每半年左右或搬动后应检查波长准确度等，以确保仪器性能正常检查方法按运行检 查程序7.3 样品室7.3.1 样品室是存放吸收池的地方，为防止样品的交叉污染，决不可将样品留在样品室中过 夜7.3.2 每次用完的吸收池要放在中性肥皂水中（将十二烷基硫酸钠用蒸馏水配制成透明的稀 溶液），或放在8 mol/L盐酸加45% （V/V）乙醇的等量混合液中浸泡，然后用自来水冲洗， 再用蒸馏水洗净，放在无灰尘的地方凉干备用如果急于使用，可在真空中抽干，但不要用 热吹风吹干7.3.3每次盛过蛋白质和核酸的样品池最好使用非离子型清洗剂（如triton）浸泡如果吸收 池实在太脏，质量好的吸收池可放在洗液中稍加处理，但要随即取出冲洗，不宜浸泡过长的 时间洗液必须冲洗干净，因为它也有类似蛋白质和核酸的吸收光谱7.4 比色皿 比色皿每次用完后应立即用蒸馏水洗净，用软布或擦镜纸擦干，放于比色皿盒内。

8 注意事项 在测量过程中，因停电、停水、停气或仪器突然损坏，应即停机，待查明原因后再重复测量， 标样和样品应重新采集，以确保检验质量。