《防腐剂的测定》PPT课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,防腐剂的测定,概论,薄层层析法,苯甲酸、山梨酸测定,防腐剂,是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂,防腐剂的种类,我国允许使用的品种主要有：,苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等非允许的防腐剂：,硼砂、水杨酸、氯霉素、青霉素,防腐剂的测定方法,GB/T5009292003,第一法 气相色谱法,第二法 高效液相色谱法,第三法 薄层色谱法,本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中苯甲酸、山梨酸含量的测定方法本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中苯甲酸、山梨酸含量的测定教学重点、难点,薄层层析法,薄层色谱法测定苯甲酸和山梨酸,原理,利用样品中各组分对吸附剂吸附能力的不同，发生了无数次吸附和解吸过程对吸附剂吸附能力弱、对展开剂溶解度大的组分随流动相迅速向前移动，可较快地随着展开剂迁移到层析板的上端；对吸附剂吸附能力强的组分移动慢，则留在层析板的下端利用各组分在展开剂中溶解能力和被解吸能力的不同，最终将各组分彼此分开。

实验流程,制板活化点样展开定性或定量,1、,制板,吸附剂均匀地涂在玻璃板上作为固定相，经干燥、活化后，称薄层板将吸附剂均匀地涂在玻璃板上这个过程称,制板,2、,点样,把含有不同组成的被测样品，点在涂有吸附剂的薄层板上，称,点样,3、,展开,由于物质中各组分受到吸附剂的吸附力和溶剂的解吸附力的反复作用，各组分在层析板上向前迁移过程称为,展开,，,选用适当的有机溶剂，通过毛细管作用，逐步浸润层析板，有机溶剂称为,展开剂,（流动相）定性或定量,展开后使各组分分离，再根据比移值和斑点的大小进行定性或定量吸附剂,分离效果及层析速度主要取决一吸附剂的粒度的大小而吸附作用则与颗粒本身的微孔大小有关吸附剂的活性：对于同一吸附剂，若以不同的方法制备处理，其吸附能力也有强弱的变化，一般常以“活性”表示吸附力的强弱分为五级：一级活性最强，五级活性最弱一般用二三级吸附剂的常用种类有：硅胶、,聚酰胺,薄层板制备,1、,平铺法,：用购置或自制的薄层涂布器，进行制板，涂层既方便又均匀，是科研中常用的方法2、,倾注法,：将调好的浆料倒在玻璃板上，用手摇晃，使其表面均匀平整，然后放在水平的平板上晾干这种制板方法厚度不易控制。

注意事项,用湿法制薄层，应入在水平的台面上，否则由于台面不平而使吸附剂糊状体向低处流动，造成薄层厚度不一致晾干时应放在通风良好的地方，无灰尘，以防薄层被污染烘干后应放在干燥器中冷却、贮存活化,活化的目的：,是为了增加吸食剂的吸附能力，即增加活性操作：,湿法制板都应进行晾干、烘干干燥薄层板经过自然干燥后，失去了大部分水分才能进行活化处理活化的温度为,105-110,观察与思考：,将含水分过多的薄层板立即放入烘箱（,105-110,）中活化，会出现什么现象？,由于水分突然大量蒸发则造成板面断裂或龟裂，而使薄层板不能使用点样,点样技术直接影响到分离效果和要检出灵敏度点样仪器：玻璃毛细管（一般用于定性）、生化用血色素管（一般用于定性），微量注射器（一般用于定量），,规格：2020cm,在薄板一端,1.5,厘米处开始每隔厘米作一记号（铅笔轻轻点一下，切勿刺破薄层）共六点，用,0.5,毫米直径的毛细管吸取样品，各样品按右图点样二次（样品量微克，点子直径不超过毫米）薄层色谱法,原理,样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。

展开,展层至溶剂前沿顶端,0.5,厘米处时取出薄板（展开时间约小时），在溶剂前沿处作记号并放在空气中晾干，以除去溶剂将选择的展开剂倒入层析槽或层析缸中（液层高度约为,0.5cm,）,待容器内溶剂蒸气达到饱和后，将点好样的薄层析放入槽或缸中进行展开注意：点样的位置必须要在展开剂液面之上当展开剂展开，其前沿上升到板顶端,5-10mm,处时，取出薄层板，用铅笔划出前沿的位置、晾干显色,用喷雾器显色均匀喷雾在薄层上，放烘箱中保持加温至层析斑点显现此显色剂可使各种,糖呈现,出不同颜色定性,根据各标准糖液层析后所得班点的位置确定混合样品中所分离出的各个斑点分别为何种糖定量,用各种显色方法使斑点出现后，应立即用铅笔或小针划出斑点的位置，并计算,R,值化合物移动的距离（斑点中心到原点的距离）,R,值,溶剂的移动的距离（溶剂前沿到原点距离）,苯甲酸和山梨酸测定（薄层层析法）,步骤,样品处理,点样,展开,显色,定性或半,定量,聚酰胺板的制备,称取,1.6g,聚酰胺粉，加,0.4g,可溶性淀粉，加约,7ml,水，研磨,35min,，立即倒入涂布器内制成、,0.3mm,的薄层板两块，室温干燥后，于,80,干燥,1h,取出置于干燥器中保存。

注意事项,：聚酰胺薄层板，烘干温度不能高于80，否则聚酰胺变色注意！,样品提取,操作流程图：,2.5g,样品,于,25ml,具塞量筒,加,0.5ml,盐酸,用,15ml,乙醚萃取，振摇,1min,用,10ml,乙醚萃取,合并两次萃取液,于另一,25ml,具塞量筒思考题：,酸化的目的是什么？,使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸或山梨酸，用乙醚提取另一,25ml,具塞量筒,NaCl,洗涤两次,静止,10min,通过无水,NaSO4,层过滤,于,25ml,容量瓶,加乙醚定容至,25ml,吸取,10.0ml,乙醚提取液,分现将置于10ml具,塞离心管中,40,水浴上挥干,加,0.1ml,乙醇溶解残渣,备用思考题,1、样品中如含有二氧化碳、酒精时应如何处理？,2、富含脂肪和蛋白质的样品应如何处理？,答：如含有二氧化碳、酒精时应先加热除去；富含脂肪和蛋白质的样品应除去脂肪和蛋白质，以防用乙醚萃取时发生乳化除去的方法同糖精的测定测定,点样：,在薄层下端,2cm,的基线上，用微量注射器点,样品液，同时各点,苯甲酸、山梨酸标准溶液展开与显色：,将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开,内，展开,槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至,10cm,，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。

样品中所含苯甲酸、山梨酸的量与标准斑点比较定量（苯甲酸、山梨酸的比移值依次为）操作技术要点,点样：少量多次，大小要均匀展开：展开剂倒入展开槽中，展开剂液层约为.0.5cm,并盖盖一段时间，使之预告达到饱和状态，再放入薄层板显色：均匀喷洒显色剂计算,X=,m,5,1000,M,6,10/25,V,6,/V,5,1000,。