甲胎蛋白（afp）作业指导书.doc

55XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 文件编号：LAB－OP－MY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01Elecsys E 170/E 411甲胎蛋白(AFP )1. 分析原理采用双抗夹心法原理，整个过程18分钟完成·第1步：10μl标本、生物素化的抗AFP单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗AFP单克隆抗体混匀，形成夹心复合物·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定检测结果由机器自动从标准曲线上查出此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得2. 标本要求血清：按标准常规方法采集血浆：肝素、EDTA－K3或枸橼酸钠抗凝其中用枸橼酸钠抗凝的血浆，测定结果需+10%标本在2－8 度 可稳定7天，-20度 可稳定3个月含沉淀的标本使用前需离心不要加热灭活标本标本和质控品禁用叠氮钠防腐3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。

试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子含防腐剂R1：生物素化的抗AFP单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml浓度4.5mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0含防腐剂R2：Ru(bpy)3 2+标记的抗AFP单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml浓度12.0mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0含防腐剂其他所需材料：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11298500 Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号12135019Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号12135027Elecsys PC/CC杯,货号03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651 Elecsys E 411分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970 Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159, Elecsys 反应杯（CUP），货号11706829 Elecsys 加样头（TIP），货号117068024. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批AFP试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。

应用AFP CalSet定标液定标定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：· 一个月（同一批号试剂）· 7天（放置仪器上的同一试剂盒）· 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤： 在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标 在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。

批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本6. 质量控制Elecsys通用质控品（PreciControl Universal）1和2或其它合适的质控品各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次质控间隔期应适用于各实验室的具体要求检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施7. 计算方法 分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为IU/ml 或ng/ml 换算方法: IU/ml×1.21= ng/ml ng/ml×0.83= IU/ml8. 参考范围 646名健康人测定结果 95%<=5.8IU/ml或<=7.0ng/ml 100%<=11.3IU/ml或<=13.6ng/ml 孕妇的AFP参考值(中位数)见下表.“妊娠周数”的计算是从上次月经期的开始日数起妊娠周数141516171819例数38217822386975353146ng/ml27.930.936.140.448.3146IU/ml23.225.630.033.540.145.5各实验室应对各自地区人群的甲胎蛋白正常值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值范围。

9. 分析性能 精密度 10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.2g/dl）、脂血（脂质<1500mg/dl）和生物素<60ng/ml等干扰 接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血 不受类风湿因子干扰（1500U/ml） 37种常用药物经试验对本测定无干扰 AFP浓度高达1百万IU/ml（1.21百万ng/ml）也不出现钩状效应 接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人会出现假阳性反应 ElecsysAFP测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断11. 临床意义 AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道70－95%的原发性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高 但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/mlAFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者 不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查 孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂,无脑症,食管atresia或多胎,AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down's综合征的危险性.12．参考文献1. Taketa K. Alpha-Fetoprotein in the 1990s. In: Sell SS. Serological cancer markers. Humana Press 1992;31-46, ISBN: 0-89603-209-4.2. Ruoslathi E, Engvall E, Kessler MJ. Chemical Properties of Alpha-Fetoprotein. In: Herberman RB, McIntire KR (eds). Immunodiagnosis of Cancer. New York: Marcel Dekker Inc 1979:101-117. 3. Ramsey WH, Wu GY. Hepatocellular carcinoma: update on diagnosis and treatment. Dig-Dis 1995;13,2:81-91.4. Sato Y, et al. Early recognition of hepatocellular carcinoma based on altered profiles of alpha-fetoprotein. New Engl J Med 1993;328,25:1802-1806.5. Klepp O. Serum tumor markers in testicular and extragonadal germ cell malignancies. Scand J Clin Lab Invest Suppl 1991;206:28-41.6. Sturgeon C. Practice Guidelines for Tumor Marker Use in the Clinic. Clin Chem 2002;48(8):1151-1159.7. Fateh-Moghadam A, Stieber P. Sensible use of tumor markers.Boehringer Mannheim 1994; Cat. No. 1536869. 8. Stuart KE, Anand AJ, Jenkins RL. Hepatocellular Carcinoma in the United States. Cancer 1996;77,11:2217-2222. 9. Brewer JA, Tank ES. Yolk sac tumors and alpha-fetoprotein in first year of life. Urology 1993;42,1:79-80.10. Wald NJ, et al. Antenatal maternal serum screening for Down’s syndrome: results of a demonstration project. BMJ 1992;305:391-394.11. Canick JA, Saller DN Jr. Maternal serum screening for aneuploidy and open fetal defects. Obstet Gynecol Clin North Am 1993;20,3:44。