离心机的原理和使用.ppt

离心机的原理和使用离心机的原理和使用 n实验目的：了解离心机的原理和使用方法实验目的：了解离心机的原理和使用方法n实实验验原原理理：：借借助助离离心心机机旋旋转转所所产产生生的的离离心心力，使不同大小和不同密度的物质分离力，使不同大小和不同密度的物质分离n用用途途：：细细胞胞的的收收集集、、细细胞胞碎碎片片和和沉沉淀淀的的分分离等常用离心分离离等常用离心分离n超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和各种生物大分子的重要手段之一各种生物大分子的重要手段之一 8/26/202418/26/20242一一 离心机的种类与用途离心机的种类与用途n速度：速度：n常速（低速）常速（低速） <8000r/minn高速高速 10000~30000r/min n超速超速 >30000r/min n转子：转子：n固定角转子（固定角转子（Eixed-Angle-Rotor））n主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品n甩平转子（甩平转子（Siwing-Bucket-Rotor））n主要用于样品作密度梯度离心主要用于样品作密度梯度离心 8/26/20243常速离心机常速离心机n1 常速离心机常速离心机n<8000r/min, R.C.F<1*104gn用用途途：：分分离离细细胞胞、、细细胞胞碎碎片片、、培培养养基基残残渣及粗结晶等较大颗粒渣及粗结晶等较大颗粒8/26/20244高速离心机高速离心机n2高速离心机高速离心机n1*104g～～2.5*104 r/min ，，R.C.F 1*104g～～105gn用用途途：：分分离离各各种种沉沉淀淀物物、、细细胞胞碎碎片片及及较较大的细胞器等大的细胞器等n高速冷冻离心机高速冷冻离心机8/26/20245超速离心机超速离心机n2.5*104g～～8*104 r/min ，，R.C.F 5*105g或更高或更高n结结构构：：离离心心管管帽帽、、冷冷冻冻装装置置和和温温控控系系统统、、真真空空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等。

系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等n按用途分：按用途分：n制制备备用用超超速速离离心心机机：：分分离离纯纯化化生生物物大大分分子子、、细细胞器和病毒等胞器和病毒等n分分析析用用超超速速离离心心机机：：测测定定样样品品纯纯度度（（根根据据紫紫外外吸吸收收率率或或折折光光率率等等判判断断））、、沉沉降降系系数数、、相相对对分分子量子量8/26/20246n沉沉降降系系数数S：：单单位位离离心心力力作作用用下下粒粒子子的的沉沉降降 速速 度度 ，， 以以 Svedberg表表 示示 ，， 简简 称称 S1S=1*10-13s8/26/20247n沉降系数S与分子量M有对应关系，测出离心机转速、离心时间和粒子移动距离，可求出S，再得到M8/26/20248二二 离心方法的选择离心方法的选择n对对于于常常速速和和高高速速离离心心机机，，由由于于所所分分离离的的颗颗粒粒大大小小和和密密度度相相差差较较大大，，只只要要选选择择好好离心速度和时间，就能达到分离效果离心速度和时间，就能达到分离效果n超速离心的离心方法：超速离心的离心方法：差速离心差速离心、、密度密度梯度离心梯度离心和和等密度梯度离心等密度梯度离心 8/26/20249n1 差速离心差速离心n采采用用不不同同的的离离心心速速度度和和离离心心时时间间，，使使沉沉降降速速度度不不同同的的颗颗粒粒分批分离的的方方法法。

主主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒要用于分离大小和密度差异较大的颗粒8/26/2024102 密度梯度离心密度梯度离心n样样品品在在密密度度梯梯度度介介质质中中进进行行离离心心，，使使沉沉降降系系数数比比较较接接近近的的物物质质得得以以分分离离的的一一种种区带分离方法区带分离方法n密密度度梯梯度度系系统统：：梯梯度度介介质质有有足足够够大大的的溶溶解解度度，，不不与与分分离离组组分分反反应应，，不不会会引引起起分分离组分的凝集、变性或失活离组分的凝集、变性或失活n常用介质：蔗糖、甘油等常用介质：蔗糖、甘油等n样样品品铺铺在在密密度度梯梯度度溶溶液液表表面面，，离离心心后后形形成若干条界面清楚的不连续区带成若干条界面清楚的不连续区带8/26/2024118/26/2024123 等密度离心等密度离心n当当欲欲分分离离的的不不同同颗颗粒粒的的密密度度范范围围在在离离心心介介质质的的密密度度梯梯度度范范围围内内时时，，不不同同浮浮力力密密度度的的物物质质颗颗粒粒在在离离心心力力作作用用下下一一直直移移动动到到与与各各自自浮浮力力密密度度相相等等的的位位置置（（等等密密度度点），形成区带。

点），形成区带n等等密密度度离离心心常常用用的的介介质质：：铯铯盐盐，，如如CsCl，，Cs2SO4，，CsBr8/26/202413三三 离心条件的确定离心条件的确定n离心力（转速）离心力（转速）n离心时间离心时间n温度温度npH值值 n真空真空8/26/202414思考题思考题n1 名词解释名词解释 离心分离离心分离 相对离心力相对离心力 沉降系数沉降系数n2 按离心机转速分，离心机有哪些种类按离心机转速分，离心机有哪些种类？各自的适用范围是什么？？各自的适用范围是什么？n3 超速离心方法有哪些？超速离心方法有哪些？n4 离心操作应注意控制哪些条件？离心离心操作应注意控制哪些条件？离心转速和沉降时间有何关系？转速和沉降时间有何关系？8/26/202415。